程　鵬，李光遠，王　蕾，李　旭，張　紅，李毅敏

(1.天津市醫(yī)藥科學研究所，天津　300020；　2.天津和杰醫(yī)療器械有限公司，天津　300384)

為保障婦女的生殖健康，對宮內節(jié)育器進行臨床前安全性評價，是宮內節(jié)育器應用于臨床前的重要內容。通過對動物進行生殖毒性實驗觀察，考查了解固定式宮內節(jié)育器對動物性功能、發(fā)情周期、交配行為、受孕、分娩、授乳和斷乳的影響，以及固定式宮內節(jié)育器對子代生長發(fā)育及對幼鼠發(fā)病率、死亡率的影響，判斷固定式宮內節(jié)育器是否具有潛在的生殖毒性，以降低臨床研究受試者和節(jié)育器上市后使用人群的使用風險。

1　材料與方法

1.1材料

1．1．1試驗樣品含吲哚美辛硅橡膠的固定式宮內節(jié)育器，由天津和杰醫(yī)療器械有限公司生產，用生理鹽水制備樣品浸提液，每1 ml生理鹽水浸提樣品量為：高劑量組0.2 g，中劑量組0.02 g，低劑量組1.90 mg，置37 ℃ 浸提72 h。

1．1．2實驗動物昆明種小鼠，購于北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，SPF級，鼠齡4～5周齡，體重17～23 g，未交配，雌性120只，雄性60只。

1.2實驗步驟按體重分層隨機分配的方法將小鼠分為空白對照組、高劑量組(10 g/kg)、中劑量組(1 g/kg)和低劑量組(95.0 mg/kg，為臨床人體用量的等效劑量)。各劑量組雌、雄小鼠于合籠前8周在飲用水中按劑量以50 ml/kg加入浸提液，對照組給予同量的生理鹽水。全部動物正常飼養(yǎng)并每日觀察，每周稱重1次，每周稱量飼料消耗量，雌、雄小鼠飼喂8周后，各組小鼠按2只雌鼠、1只雄鼠合籠，次日檢查陰栓，發(fā)現陰栓后放另盒飼養(yǎng)，并標記檢出陰栓日期，定為妊娠0日。共合籠3周。合籠后雄性小鼠繼續(xù)給予浸提液至交配后3周，雌性小鼠至子代出生后3周斷乳為止。3周后處死雄鼠做大體解剖，觀察主要臟器及生殖器官，取睪丸、附睪、儲精囊和前列腺組織固定，做病理學觀察。根據一代生殖試驗(OECD 415)的要求，應保證各組有16～20只孕鼠，本項試驗按照查出陰栓的先后次序，各組取前20只孕鼠繼續(xù)給予受試液，待孕鼠生產、母鼠哺乳，直至仔鼠生長到第21 d。將全部母鼠處死，做大體解剖，觀察主要臟器及生殖器官。取母鼠陰道、子宮、卵巢組織固定，做病理學觀察。

1.3觀察指標 雄鼠和雌鼠體重增長情況，孕鼠體重增長情況、受孕率、生育率，幼仔出生存活率、幼鼠哺育成活率、雌雄比率和仔鼠體重變化。

1.4統(tǒng)計方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，對空白對照組、三個樣品劑量組雌雄小鼠的受孕率、生育率、仔鼠個數、活胎率、死胎率及雌雄比率資料用χ2檢驗；體重等計量資料用t檢驗。

2　結果

2.1合籠前各劑量組雄性動物各時間段的體重增長情況合籠前各劑量組雄性動物各時間段的體重，與對照組相比無明顯差別；高劑量組動物在給樣后第6周死亡1只，無法判斷與試驗樣品的使用有關，也可能與動物本身的個體差異有關，故不考慮是毒性作用所致，實驗結果見表1。

2.2合籠前各劑量組雌性動物的體重增長情況合籠前各劑量組雌性動物的體重隨給樣時間的持續(xù)，個別數值略高于對照組，與對照組間雖有差異(P<0.05或P<0.01)，但不考慮是毒性作用所致，結果見表2。

表1　合籠前雄性動物體重增長情況　g

表2　合籠前雌性動物體重增長情況　g

*與對照組比較，P<0.05, **P<0.01

2.3合籠后各劑量組雄性動物的生育率比較合籠后各劑量組雄性動物的生育率未見與試驗樣品相關的異常改變，與對照組相比無明顯差別, 實驗結果見表3。

2.4合籠后各劑量組雌性動物的受孕情況合籠后各劑量組雌性動物的受孕率未見與試驗樣品相關的異常改變，與對照組相比無明顯差別, 實驗結果見表4。

2.5各組動物活產情況中、高劑量組動物的活產率明顯低于空白對照組，與對照組相比有差異(P<0.05)，實驗結果見表5。

表3　各組雄性動物生育率比較

表4　各組雌性動物受孕的情況

表5　各組動物活產情況

*與對照組比較，P<0.05

2.6各劑量組仔鼠體重變化情況逐漸增加，個別數值略高于對照組，與空白對照組間雖有差異(P<0.05或P<0.01)，但不考慮是毒性作用所致，實驗結果見表6。

2.7病理學檢查取雄鼠睪丸、附睪、儲精囊、前列腺，母鼠陰道、子宮、卵巢組織固定，病理學觀察結果顯示，雄鼠睪丸內曲精細管各級生精細胞存在，腔中可見發(fā)育良好的精子細胞；附睪小管上皮細胞排列整齊，腔中可見發(fā)育良好的精子細胞；前列腺各部腺體未見增生，上皮細胞未見變性或壞死。雌鼠的卵泡及黃體、白體均未見改變；子宮腺體未見增生、萎縮、變性和壞死；陰道上皮細胞未見變性、壞死，黏膜層的結締組織未見明顯的充血、水腫。

表6　各組仔鼠體重變化 　g

與對照組比較，*P<0.05, **P<0.01

3　討論

宮內節(jié)育器(IUD)因其高效、安全、價格低廉，已成為我國婦女使用率最高的避孕工具之一。含銅宮內節(jié)育器所致的疼痛、出血為其主要副作用，也是影響使用順應性的重要原因。吲哚美辛具有抑制前列腺素合成酶、阻止前列腺素(PG) 合成、解熱鎮(zhèn)痛及抗炎作用，提高了IUD使用的子宮相容性。含吲哚美辛宮內節(jié)育器的避孕效果和藥效學及機理研究均有大量報道，且其遺傳毒理學的安全性均需在上市前進行評價[1]。IUD的使用目的為避孕，但其對使用者生殖功能的影響仍需要進行評價。

本項研究以臨床使用劑量為基礎，依據毒理學研究原則設計的三個受試劑量[2，3]，其結果可最大限度地覆蓋該節(jié)育器的生殖毒性作用。由結果可以看出，相當于在臨床使用劑量(低劑量)下，受試組的各項生殖毒性指標均與空白對照組無顯著差異，而中、高劑量(分別相當于人體使用等效劑量的10倍和100倍)孕鼠的活產率明顯低于對照組。這除了與劑量遠高于臨床使用量有關外，也可能與實驗中每日制備的IUD浸提液相當于IUD放置初期銅離子的“爆釋”現象有關[4]?？傊卷椦芯康慕Y果顯示，在相當于人體使用劑量的條件下含吲哚美辛宮內節(jié)育器對生殖過程沒有明顯的毒性作用，具有一定的生殖安全性。

1劉昌官，李恕香，劉曉璦，等. 吲哚美辛宮內節(jié)育器的主要藥效學研究[J].生殖與避孕，2000，20(3)：165

2GB/T 16886.3-2008，醫(yī)療器械生物學評價第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗[S].

3袁伯俊，王治喬主編.新藥臨床前安全性評價與實踐[M].北京：軍事醫(yī)學科學院出版社，1997：117-151

4吳尚純，鄒燕.宮內節(jié)育器應用現狀與研究進展[J]. 中國實用婦科與產科雜志，2009，25(10)：795