薛士梅

(天津市濱海新區(qū)大港中醫(yī)醫(yī)院， 天津 300270 )

牛黃上清膠囊是由人工牛黃、薄荷、黃連、黃柏、黃芩等19味藥材制成的中藥制劑，具有清熱瀉火、散風(fēng)止痛的功效，用于熱毒內(nèi)盛、風(fēng)火上攻所致的頭痛眩暈、目赤耳鳴、咽喉腫痛、口舌生瘡。在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中未有該項(xiàng)定量分析，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用HPLC法對(duì)黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定，以作為該制的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試藥

LC-2010C高效液相色譜儀(日本島津)，LC-Solution色譜儀工作站。黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào)110715-201016，含量94.0%)；甲醇、磷酸均為色譜純，水為純化水。牛黃上清膠囊(江西天施康弋陽(yáng)制藥有限公司，批號(hào)12030902、12060801、12070502)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相甲醇-0.2%磷酸溶液(48∶52)；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；流速1.0 ml/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量10 μl。分離度不小于1.5，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于5000。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品10.35 mg，置100 ml量瓶中,用70%甲醇稀釋至刻度,作為對(duì)照品貯備液(97.3 μg/ml)。精密量取貯備液10 ml,置25 ml量瓶中,用70%甲醇稀釋至刻度,即得濃度為38.9 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品10粒的內(nèi)容物混勻，取約0.38 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml,稱定重量，超聲處理(功率150 W，頻率40 kHz)30 min，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻,濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 取除黃芩外按處方量配制的樣品，按供試品溶液制備的方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液10 μl注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在黃芩苷峰位置上沒有干擾峰。見圖1。

1.黃芩苷

2.3線性關(guān)系考查 取黃芩苷對(duì)照品貯備液(97.3 μg/ml)，分別精密量取1、2、3、4、5和6 ml，置10 ml量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄各自峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y=40 235.7X-10 435.6(r=0.999 96)。結(jié)果表明黃芩苷在9.73～58.38 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗(yàn) 取按“2.2.1”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定黃芩苷峰面積，其RSD為0.03%。

2.5重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)12030902)6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果黃芩苷含量為2.115 mg/粒，RSD為0.3%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2．6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)12030902)溶液，分別于0、2、4、8、12和24 h測(cè)定，其黃芩苷峰面積RSD為0.7%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．7回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批已知含量的樣品(批號(hào)12030902，含量2.115 mg/粒)約0.19 g，共6份，分別精密加入1.2161 mg/ml黃芩苷對(duì)照品溶液25 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備所需溶液，依法測(cè)定，計(jì)算黃芩苷的平均回收率為99.43%，RSD為0.8%。見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．8樣品測(cè)定 分別取3批供試品，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl,分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算即得。見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1黃芩苷在《中國(guó)藥典》測(cè)定方法中檢測(cè)波長(zhǎng)分別為277和280 nm[1]，本品于277 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，其分離效果及峰形不好，選用280 nm波長(zhǎng)處測(cè)定取得了較好的分離效果，與《中國(guó)藥典》中黃芩藥材的HPLC法測(cè)定波長(zhǎng)相同。

3.2本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溶劑及提取時(shí)間進(jìn)行了考查，以純甲醇、50%甲醇和70%甲醇作溶劑，超聲提取30 min，結(jié)果表明70%甲醇提取效果較好[2]。又以70%甲醇超聲提取20、30和40 min，結(jié)果表明超聲30 min樣品中黃芩苷含量與超聲40 min提取結(jié)果相當(dāng)。故最終選擇70%甲醇超聲30 min作為提取條件，此法提取成分含量較高，且操作簡(jiǎn)便。

1 中國(guó)藥典[S].一部.2010：282，487

2 張囡，陳雙璐，錢宇坤.HPLC法測(cè)定清肺丸中黃芩苷和柚皮苷含量[J].天津藥學(xué)，2011，23(6)：6