孟建升，何 波，蔣俊春

(河南省商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 商丘 476000)

黃連上清片是國(guó)家基本藥物目錄中的常用藥品，現(xiàn)收載于2010年版《中國(guó)藥典》，是由黃連、梔子、連翹、炒蔓荊子、防風(fēng)等17味中藥組成的復(fù)方制劑，具有散風(fēng)清熱，瀉火止痛的功效，用于風(fēng)熱上攻、肺胃熱盛所致的頭暈?zāi)垦?、暴發(fā)火眼、牙齒疼痛、口舌生瘡、咽喉腫痛、耳痛耳鳴、大便秘結(jié)、小便短赤[1]。處方中的主要有效成分梔子為臨床常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為茜草科植物梔子的干燥成熟果實(shí)，具瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功，用于熱病心煩、目赤腫痛等癥[2]。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)梔子進(jìn)行了薄層色譜鑒別，未進(jìn)行含量測(cè)定。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥有效、安全，建立了測(cè)定本品中梔子苷含量的高效液相色譜法，為完善產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);MSA225S-000-DU型電子分析天平(德國(guó)賽多利斯公司)。梔子苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110749-200714);乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。黃連上清片為市售品。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Thermo BDS Hypersil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-水(15∶85);流速:1．0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:28℃。理論板數(shù)應(yīng)不低于2 000。

2．2 溶液制備

精密稱取梔子苷對(duì)照品5 mg，置200 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使其完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，取0．8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。另取缺梔子的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，其他成分對(duì)梔子苷測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:精密稱取梔子苷對(duì)照品5 mg，置200 mL棕色容量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件，分別進(jìn)樣 1，3，5，10，12，15，20 μL，記錄梔子苷峰面積值，以峰面積積分值(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1 109．9 X ＋32．84(r=0．999 9)。結(jié)果表明，梔子苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0．023 45～0．469 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，記錄峰面積。結(jié)果的RSD=0．99%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品約0．8 g，精密稱定5份，分別照供試品制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD=1．16%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一供試品溶液10 μL，分別在0，1，2，4，6，8，10 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD=1．03%(n=6)，表明供試品溶液中梔子苷在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):稱取6份已知含量為1．536 9 mg/g的樣品0．4 g，精密稱定，分別置1～6號(hào)錐形瓶中，另取梔子苷對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5，6，7 mL，置上述 1～6號(hào)錐形瓶中，依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件，分別測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．4 樣品含量測(cè)定

取5批樣品，依法制備供試品溶液，各進(jìn)樣10 μL，按外標(biāo)法計(jì)算梔子苷的含量，結(jié)果5批樣品中梔子苷的含量分別為1．536 9，1．463 7，1．652 6，1．369 8，1．598 7 mg/g。

3 討論

洗脫系統(tǒng)的選擇:比較了甲醇-水、乙腈-0．1%磷酸、乙腈-水洗脫系統(tǒng)。試驗(yàn)證明，乙腈-水洗脫系統(tǒng)梔子苷與其他物質(zhì)色譜峰分離度較好，故選用乙腈-水洗脫系統(tǒng)分析樣品。

供試品處理方法的選擇:參考文獻(xiàn)[3-4]，比較了稀乙醇、甲醇、氯仿、水幾種提取溶劑，結(jié)果表明，甲醇為最佳提取溶劑。比較了回流、超聲、冷浸3種提取方法，結(jié)果表明，超聲提取30 min能將供試品中的梔子苷較充分的提取，故選用甲醇超聲處理30 min作為供試品的處理方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1 067-1 068．

[2]劉 鋒，黃顯會(huì)，付美琴．高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方清開(kāi)靈注射液中梔子苷的含量[J]．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，31(4):104-107．

[3]吳學(xué)軍．HPLC測(cè)定黃梔花口服液中梔子苷[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2010，16(8):67-68．

[4]筆雪艷，劉曉鳳，張清波．HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈泡騰片中梔子苷的含量[J]．中國(guó)藥房，2011，22(3):240-241．