花逾冬 劉延龍 劉娟

(1.上海市生物醫(yī)藥科技產(chǎn)業(yè)促進(jìn)中心 上海 201203；2.上海世康特制藥有限公司 上海 201809 )

水飛薊素（silymarin，1）具有阻止或抑制脂質(zhì)過氧化，穩(wěn)定肝細(xì)胞膜，改善肝功能的作用，對(duì)急慢性肝炎、肝硬化和代謝中毒性肝損傷具有較好的療效。1為水難溶性藥物，用普通方法制備口服制劑，生物利用度較低。采用固體分散體等制劑工藝以期提高溶出度和生物利用度的研究有不少報(bào)道[1-4]。多種pH溶出介質(zhì)中的溶出曲線對(duì)比已成為對(duì)口服制劑質(zhì)量一致性和體內(nèi)生物等效性評(píng)估的重要手段[5-7]。本文以市售1膠囊（利加?。┳鳛閰⒈人幬?，同時(shí)與1原料藥和市售益肝靈片作比較，考察以固體分散原理自制的試制品1膠囊的溶出度并作一致性評(píng)價(jià)研究。

按照USP和進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，將1含有的6種組份作為溶出度考察對(duì)象，并按以下方法組合進(jìn)行計(jì)算：水飛薊賓（sylibin，2）其中含水飛薊賓A和水飛薊賓B（sylibin A + sylibin B）；異水飛薊賓（isosylibin，3）其中含異水飛薊賓A和異水飛薊賓B（isosylibin A + isosylibin B）；水飛薊汀和水飛薊濘（sylichristin +sylidianin，4）。上述各異構(gòu)體組份含量之和為1含量。

1 儀器與試藥

ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天津天大天發(fā)科技有限公司），Agilent1200高效液相色譜儀， MP1100B型電子分析天平。

2對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110856-200604），3、4對(duì)照品（上海同田生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為09121523和09121521）；1膠囊（利加?。ㄒ?guī)格:140 mg/粒，德國馬博士大藥廠，批號(hào)B0802693）；市售益肝靈片（ 規(guī)格：38.5 mg/片，上海復(fù)興朝輝藥業(yè)有限公司，批號(hào)1103F030）；試制品1膠囊（含量：143 mg/粒，批號(hào)110301）；1原料藥（遼寧省盤錦華成藥業(yè)有限公司，含量：80.2%，粒度：過100目28.7%、80目至00目61.6%、80目以下9.7%，比表面積：0.375 m2/g，批號(hào)20090804）；水為超純水；甲醇（色譜純）；其他試劑均為分析純。1的理化性質(zhì)[8]：1在水中的溶解度為0.040 1 mg/ml。由丙酮加石油醚所得水飛薊賓，為含1分子水之晶體，mp 167 ℃，180 ℃分解。水飛薊賓溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇，微溶于氯仿，不溶于水。

2 方法與結(jié)果

2.1 各組份定量方法及驗(yàn)證

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，（4.6 mm×125 mm，5 μm）；柱溫40 ℃；流動(dòng)相：混合溶劑A[85%磷酸-甲醇-水（5∶35∶65）]和混合溶劑B[85%磷酸-甲醇-水（5∶50∶50）]梯度洗脫（表1）；流速為 0.8 ml/min；檢測(cè)波長為288 nm；進(jìn)樣量10 μl；水飛薊賓A、B峰的分離度不得低于1.8。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)間表

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定2對(duì)照品10 mg、3對(duì)照品2.5 mg、4對(duì)照品5 mg，分別置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（1）、（2）、（3），2～8 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 供試品溶液的制備

取試制品20粒內(nèi)容物，混勻；精密稱定117 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇90 ml，混勻，超聲處理20 min，加甲醇稀釋至刻度；搖勻，靜置，取上清液，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 HPLC測(cè)定及圖譜

分別精密吸取對(duì)照品溶液（1）、（2）、（3）與供試品溶液各10 μl，進(jìn)樣，記錄色譜圖（圖1、2）。

供試品溶液各色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品溶液色譜峰保留時(shí)間一致。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

2.1.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取室溫存放的供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣5 μl分析，結(jié)果見表2：

表2 室溫保存不同時(shí)間樣品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.1.6 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液（1）、（2）、（3）各 5 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖峰面積（表3）。

表3 含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=6）

結(jié)果顯示，HPLC測(cè)定的2、3、4的峰面積的精密度RSD在0.1%～1.7%之間。

2.1.7 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液（1）、（2）、（3），每種分別進(jìn)樣 1、3、5、7 和10 μl，測(cè)定色譜圖峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)X，得回歸方程計(jì)算r，結(jié)果分別為：

水飛薊賓：Y＝3 010x+5.303，r＝0.999，濃度范圍 0.105 1 ～ 1.051 0 μg/ml；

異水飛薊賓：Y＝2 869x+0.196，r＝0.999，范圍濃度 0.027 1 ～ 0.271 5 μg/ml；

水飛薊?。篩＝2 868x-4.647，r＝0.999，濃度范圍 0.055 5 ～ 0.554 7 μg/ml；

水飛薊濘：Y＝3 492x-19.69，r＝0.999，濃度范圍 0.055 1 μg/ml～ 0.550 8 μg/ml；

測(cè)定結(jié)果表明，各組份在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液（1）、（2）、（3），分別用甲醇稀釋0、5、10倍，得到高、中、低三種濃度的對(duì)照品，分別精密加入到已知濃度試制藥物樣品甲醇溶液中，照HPLC法測(cè)定各組分含量，并計(jì)算回收率、RSD（表4）。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，各組分回收率較好，方法可行。

2.2 溶出度測(cè)定條件

2.2.1 溶出介質(zhì)的選擇

按照《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[9]，并依照USP34，選擇如下溶出介質(zhì)：①pH 1.5鹽酸溶液(取3.73 ml HCl加水稀釋至1000 ml)；②pH 5.8的磷酸鹽緩沖溶液（取250 ml 0.2 mol/L KH2PO4溶液與18 ml 0.2 mol/L NaOH溶液混合，加水稀釋至1000 ml）；③pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液（取250 ml 0.2 mol/L KH2PO4溶液與205 ml 0.2 mol/L NaOH溶液混合，加水稀釋至1 000 ml）；④含2%十二烷基硫酸鈉的pH 7.5磷酸鹽緩沖溶液。

2.2.2 轉(zhuǎn)速及其他條件選擇

USP34標(biāo)準(zhǔn)及水飛薊素膠囊進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)均采用槳法，轉(zhuǎn)速均為100 r/min，本研究條件選擇與其一致。

2.2.3 溶出度測(cè)定法

依照溶出度測(cè)定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法），分別用以上溶出介質(zhì)900 ml為溶劑，每杯放入試制品膠囊1粒，或參比藥物膠囊1粒，或精密稱定的裝有含水飛薊素140 mg的原料藥的膠囊一粒，或益肝靈一片，依法操作，并分別在10、20、30、45、60和90 min取溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照HPLC方法測(cè)定，對(duì)照品溶液用相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋5倍，計(jì)算每粒膠囊溶出的各組份含量，作溶出度曲線。

2.2.4 溶出度曲線

1各組份的溶出度曲線見圖3。

2.2.5 不同介質(zhì)中的溶出曲線

以各組份含量之和作為1含量，作不同介質(zhì)中的溶出曲線（圖4）。

2.3 數(shù)據(jù)處理及分析

采用非模型依賴法進(jìn)行溶出曲線的比較，試制品和原料藥與參比藥中各組分的溶出曲線對(duì)比數(shù)據(jù)見表5，各樣品與參比藥中1的溶出曲線對(duì)比數(shù)據(jù)見表6。其相似因子（f2）是衡量?jī)蓷l溶出曲線相似度的參數(shù)，計(jì)算公式分別如下：

其中n為取樣時(shí)間點(diǎn)個(gè)數(shù)，Rt為參比樣品在t 時(shí)刻的溶出度值，Tt為在t 時(shí)刻的溶出度值。f2值越接近100，則認(rèn)為兩條曲線相似。一般情況下， f2值高于50，可認(rèn)為兩條曲線具有相似性，試制品與參比樣品具有等效性。

實(shí)驗(yàn)取樣時(shí)間點(diǎn)分別在10、20、30、45、60和90 min，共6個(gè)點(diǎn)，當(dāng)藥物溶出量低于85%時(shí)，n取值為6；當(dāng)藥物溶出量在某取樣點(diǎn)超過85%時(shí)，以后的點(diǎn)不計(jì)入，n取值為去掉這些點(diǎn)后的取樣點(diǎn)個(gè)數(shù)。

圖3 1各組份的溶出度曲線

圖4 各組份含量之和在不同介質(zhì)中的溶出度

表5 不同溶出介質(zhì)中各組份的溶出度相似因子（f2）

表6 不同溶出介質(zhì)中各樣品1的溶出度相似因子（f2）

3 討論

1）試制品與參比藥物對(duì)比，各試驗(yàn)條件下，各組份f2因子均大于50，顯示二者溶出度具有相似性。

2）從原料藥的溶出度數(shù)據(jù)可知，1所含的各組份在不同pH條件下溶解度有差異，在酸性條件下溶解較差，各組份的溶解度與pH值呈正相關(guān)性，在pH 7.5磷酸緩沖溶液中，組份3、4的溶解度達(dá)60%以上，組份2的溶解度仍然在20%以下。經(jīng)制劑制備處理后，各組份溶出度隨pH值變化趨勢(shì)無顯著改變。

3）對(duì)溶出度有限制性作用的主要因素是組份2。經(jīng)適當(dāng)方法制成制劑后，組份2溶出度明顯改善，組份3的溶出度比原料藥也有所提高，在pH 7.5磷酸緩沖溶液條件下均可達(dá)到75%以上。各制劑樣品與原料藥比較，組份4的溶出狀況無明顯差異。

4）在pH 1.5鹽酸溶液條件下，各制劑樣品與原料藥比較，雖然f2因子顯示差異不大，但各組份溶出都非常低，無實(shí)際意義。其他試驗(yàn)條件下，市售益肝靈片與參比藥物對(duì)比，1的f2因子均小于50，顯示溶出度有明顯差異，市售益肝靈片溶出狀況與原料藥相似。

5）按照USP規(guī)定，以加2% SDS的pH 7.5磷酸緩沖溶液作溶出介質(zhì)，在此條件下，未經(jīng)任何處理的1原料藥也有可能符合溶出75%的要求。這一標(biāo)準(zhǔn)顯然有待商榷。

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