盧 林，曾令偉綜述，秦 波審校

（1.重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院感染科 401120；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科 400016）

具有免疫抑制功能的Th細(xì)胞過(guò)去被稱為抑制性T淋巴細(xì)胞（suppressor T cell），近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其能夠介導(dǎo)免疫耐受并抑制自身免疫性疾病，故更名為調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（regulator T cell，Treg）。越來(lái)越多的證據(jù)表明，Treg在抑制抗病毒T細(xì)胞免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。一方面，Treg抑制過(guò)強(qiáng)的T細(xì)胞免疫應(yīng)答避免對(duì)機(jī)體造成過(guò)度損傷；另一方面，由于限制了T細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)，病毒不能被及時(shí)清除而可能引起感染的持續(xù)存在，從而導(dǎo)致乙肝病毒感染后疾病慢性化的發(fā)生。

1 Treg的分類及表面標(biāo)志

Treg是一組異質(zhì)性的細(xì)胞，按照其來(lái)源及功能不同主要分為兩大亞群：一種是自然性Treg，由胸腺的T細(xì)胞發(fā)育而成；另一種是適應(yīng)性Treg，由成熟T細(xì)胞或正在分化中的自然性Treg在一定條件下生成，如存在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β），抗原暴露少或者共刺激不足等［1］。自然性Treg包括CD25＋FoxP3＋T細(xì)胞以及來(lái)自先天免疫系統(tǒng)的自然殺傷細(xì)胞（NK）。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，自然性Treg的功能是通過(guò)抗原非特異性、接觸依賴但不依賴細(xì)胞因子的途徑實(shí)現(xiàn)的［2］。適應(yīng)性Treg包括CD4＋CD25＋FoxP3＋T 細(xì)胞、產(chǎn)生白細(xì)胞介素-10（IL-10）的CD4＋T細(xì)胞（Tr1）、產(chǎn)生 TGF-β的CD4＋T細(xì)胞（Th3）、CD3＋CD4-CD8-T細(xì)胞［3-4］。適應(yīng)性Treg在體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)功能是通過(guò)細(xì)胞因子途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的［5］。另外，一些CD8＋T細(xì)胞也具有免疫調(diào)節(jié)功能，CD8＋CD25-T細(xì)胞在抗原存在的情況下能夠分化成CD8＋Treg［3，6］。然而，目前針對(duì) CD8＋Treg的研究還非常少，對(duì)CD8＋Treg的作用功能也還知之甚少。

到目前為止，還沒有一種完全特異的細(xì)胞表面標(biāo)志可以區(qū)分Treg，其中，白細(xì)胞介素-2（IL-2）受體α鏈（CD25）是Treg的一個(gè)原始標(biāo)志。將CD4＋CD25＋T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T細(xì)胞缺失的小鼠可以預(yù)防自身免疫性疾病，而將去除了CD25＋T的CD4＋T細(xì)胞移入該類小鼠則不能避免發(fā)生多器官特異的自身免疫性疾病。然而，自然產(chǎn)生的T淋巴細(xì)胞毒性相關(guān)抗原-4（CTLA-4）＋腫瘤壞死因子受體（GITR）＋CD25-T細(xì)胞亞群對(duì)自身免疫性疾病有很強(qiáng)的抑制功能，說(shuō)明CD25并非功能性Treg的必須結(jié)構(gòu)［7］。此外，CD4＋CD25＋Treg表面標(biāo)志物還包括CTLA-4［8］、GITR［9］。CTLA-4單抗和 GITR抗體均能夠阻斷Treg的免疫抑制功能［7］，但是CTLA-4缺陷小鼠的Treg和GITR-CD4＋CD25＋T對(duì)CD4＋CD25-T也有較強(qiáng)的抑制作用，說(shuō)明這些分子在Treg細(xì)胞的免疫抑制功能中發(fā)揮重要但非必要作用。和CD25相似，這兩種分子不僅表達(dá)于Treg也可表達(dá)于活化的效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞表面。FoxP3基因編碼的DNA結(jié)合蛋白可以抑制包括生成細(xì)胞因子和T細(xì)胞增生在內(nèi)的多種基因的轉(zhuǎn)錄［10］。在mRNA和蛋白質(zhì)水平上，F(xiàn)oxP3都僅表達(dá)于CD4＋CD25＋Treg，在CD4＋CD25-T和B淋巴細(xì)胞及CD8＋T細(xì)胞均無(wú)明顯表達(dá)。在小鼠，F(xiàn)oxP3是Treg的特異性細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物，因此目前普遍將FoxP3作為鑒別CD4＋CD25＋Treg的首選分子。然而近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，在人類，除了Treg一些非T細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞也能夠表達(dá)FoxP3［11］。最近發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素7（IL-7）受體（CD127）低表達(dá)有利于將Treg細(xì)胞同活化的T淋巴細(xì)胞區(qū)分開，它不僅可以分離出CD4＋CD25＋Treg，還能夠分離出 CD4＋CD25-T中的 Treg［12］。綜上，若聯(lián)合FoxP3和CD127可能會(huì)更加準(zhǔn)確地區(qū)分出CD4＋CD25＋Treg。

2 Treg細(xì)胞水平和疾病狀態(tài)

到目前為止，在HBV感染不同階段的Treg水平以及Treg與疾病狀態(tài)之間是否存在相關(guān)性尚無(wú)定論。一項(xiàng)大規(guī)模的研究顯示，慢性HBV攜帶者外周血單核細(xì)胞和肝組織中CD4＋CD25＋FoxP3＋的數(shù)量高于感染后恢復(fù)者及健康者，并與HBeAg狀態(tài)相關(guān)［13］。另外一項(xiàng)研究檢測(cè)急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎患者外周血Treg，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重型肝炎患者外周血Treg顯著升高［14］。同樣，慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者肝組織內(nèi)的Treg也升高［14］。另有研究也證實(shí)，外周血和肝內(nèi)的Treg與乙肝病毒核酸（HBV-DNA）及 HBsAg水平顯著相關(guān)［15-16］。與之相反，F(xiàn)ranzese等［17］發(fā)現(xiàn)慢性無(wú)癥狀攜帶者、慢性肝炎患者、自然恢復(fù)者以及健康者的Treg頻率無(wú)明顯差別。檢測(cè)HBV感染的慢／急性肝衰竭患者外周血Treg和輔助性T細(xì)胞17（Th17）的數(shù)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Treg／Th17的比值與肝衰竭預(yù)后呈正相關(guān)。經(jīng)過(guò)抗病毒治療后達(dá)到持續(xù)應(yīng)答的急性加重的慢性乙型肝炎患者，其Treg基因表達(dá)水平及病毒特異的Treg細(xì)胞數(shù)量均顯著增加［18］。另外一項(xiàng)研究顯示，恩替卡韋單藥抗病毒治療并抑制了病毒復(fù)制之后，Th17數(shù)量迅速增加而同時(shí)Treg下降［19］。

3 Treg與HBV感染的免疫耐受性

CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)對(duì)自身和外來(lái)抗原的免疫耐受性，其調(diào)節(jié)作用可以是病毒特異的。HBV感染慢性化可能與Treg介導(dǎo)的免疫耐受相關(guān)，主要通過(guò)以下幾個(gè)途徑發(fā)揮作用。首先，Treg自身可以分泌TGF-β、IL-10及低水平的γ干擾素（IFN-γ）和白細(xì)胞介素-4（IL-4），從而介導(dǎo)免疫耐受。其次，Treg細(xì)胞抑制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖和活化。在轉(zhuǎn)基因小鼠的模型中證實(shí)，肝內(nèi)的FoxP3＋CD4＋Treg細(xì)胞數(shù)量顯著增加能夠有效抑制活化T細(xì)胞應(yīng)答［20］；另外，體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，CD4＋CD25＋Treg不僅能夠抑制CD8＋T細(xì)胞增殖，還能夠抑制其分泌IFN-γ等免疫應(yīng)答活性［21］。最后，Treg能夠抑制髓樣樹突狀細(xì)胞成熟，從而使T細(xì)胞的活性減低［1］。

4 Treg向肝臟遷移機(jī)制

Treg是如何及時(shí)到達(dá)炎癥或者感染部位發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)功能的呢？Oo等［22］分離慢性肝炎患者肝內(nèi)的Treg，并檢測(cè)Treg表面的受體表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)Treg高表達(dá)趨化因子受體4（CCR4）和趨化因子受體3（CXCR3），且顯著高于其他受體的表達(dá)，并且CCR4和CXCR3在肝內(nèi)Treg上的表達(dá)水平顯著高于外周血Treg水平。在體外模型中，分別阻斷CXCR3及CCR4以觀察其對(duì)Treg黏附肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)CXCR3阻斷時(shí)，黏附于肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞上的Treg數(shù)量顯著減少，并且分別阻斷趨化因子配體9（CXCL9）、趨化因子配體10（CXCL10）、趨化因子配體11（CXCL11）與CXCR3的結(jié)合，黏附于肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞上的Treg數(shù)量亦減少，但是效果沒有CXCR3顯著。Erhardt等［23］用次致死劑量（5mg／kg）伴刀豆球蛋白（Con A）分別處理野生型（WT）及CXCR3缺陷型（CXCR3-／-）小鼠，后者出現(xiàn)的肝損害顯著強(qiáng)于前者，再次用次致死劑量（5mg／kg）Con A處理，結(jié)果 WT小鼠表現(xiàn)出對(duì)Con A耐受（無(wú)或者僅輕微的肝損害），而CXCR3-／-小鼠未耐受；分離已經(jīng)接受兩次Con A處理的 WT及CXCR3-／-小鼠的Treg并分別輸給未經(jīng)處理過(guò)的 WT小鼠，然后，再給予（5 mg／kg）Con A處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WT小鼠Treg對(duì)Con A誘導(dǎo)的肝損傷有保護(hù)作用，并且肝內(nèi)的CXCR3＋Treg顯著多于CXCR3-Treg，充分說(shuō)明CXCR3介導(dǎo)Treg向肝臟遷移在誘導(dǎo)Con A耐受的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

體外研究證實(shí)，乙肝病毒X蛋白（HBx）以一種劑量依賴的模式促進(jìn)肝細(xì)胞分泌CXCL9和CXCL10［24］。同時(shí)，臨床報(bào)道指出慢性乙型肝炎患者肝內(nèi)和外周血中的CXCL9及CXCL10表達(dá)水平均較健康者升高［25］。因此，乙肝病毒感染后，通過(guò)HBx誘導(dǎo)趨化因子CXCL9、CXCL10分泌，趨化Treg向肝臟遷移并發(fā)揮其對(duì)免疫細(xì)胞的抑制效應(yīng)，從而介導(dǎo)機(jī)體對(duì)肝炎病毒的免疫耐受。

5 阻斷Treg與免疫活化

既然Treg在慢性乙肝免疫耐受過(guò)程中發(fā)揮主要的作用，那么抑制Treg是否就有望打破免疫耐受呢？將編碼IL-12的質(zhì)粒輸入慢性感染土撥鼠肝炎病毒（WHV）的土撥鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有外周血土撥鼠肝炎病毒核酸（WHV-DNA）小于1010的土撥鼠接受治療后，均出現(xiàn)持續(xù)而顯著的外周血及肝內(nèi)WHV DNA病毒載量下降，并伴隨e抗原及表面抗原的消失。肝炎病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化因子，與受體CXCR3結(jié)合趨化Treg進(jìn)入肝臟從而介導(dǎo)肝臟免疫耐受。治療初期，所有土撥鼠肝內(nèi)的FoxP3＋表達(dá)均下降，而4個(gè)月后，無(wú)應(yīng)答土撥鼠肝內(nèi)的FoxP3＋顯著反彈，而應(yīng)答鼠肝內(nèi)的FoxP3＋則已降至檢測(cè)線水平以下［26］。這說(shuō)明，土撥鼠對(duì)IL-12無(wú)應(yīng)答可能是由于Treg的免疫抑制作用。Sprengers等［27］觀察了聚乙二醇干擾素治療應(yīng)答與無(wú)應(yīng)答患者的Treg數(shù)量差異發(fā)現(xiàn)，治療開始時(shí)應(yīng)答組與無(wú)應(yīng)答組的Treg無(wú)差異，隨著治療的進(jìn)行無(wú)應(yīng)答患者的Treg數(shù)量開始增加，而應(yīng)答組患者未出現(xiàn)這一情況，這說(shuō)明Treg可能是干擾素治療無(wú)應(yīng)答的機(jī)制之一。Dikopoulos等［28］給小鼠注射編碼 HBsAg的DNA疫苗，肝內(nèi)CD8＋T增強(qiáng)的同時(shí)CD4＋CD25＋Treg向肝臟浸潤(rùn)及遷移增加并抑制CD8＋T反應(yīng)。Furuichi等［29］將小鼠體內(nèi)的CD25＋T細(xì)胞預(yù)先剔除后，注射DNA疫苗能夠激起更加強(qiáng)烈的HBV特異T細(xì)胞以及記憶性T細(xì)胞免疫。因此，如果給予免疫刺激的同時(shí)能夠抑制Treg細(xì)胞功能，可能獲得持續(xù)的T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)從而有利于控制病毒。

6 展 望

Treg的結(jié)構(gòu)和功能還有很多方面需要進(jìn)一步研究。在乙型肝炎病毒感染后，Treg通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)使機(jī)體保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的平衡狀態(tài)，卻也導(dǎo)致了病毒的持續(xù)存在。Treg的功能，可能使機(jī)體進(jìn)入免疫激活狀態(tài)，有利于病毒的徹底清除，是抗HBV一個(gè)新的潛在治療靶位。但是，免疫激活后若失去Treg的調(diào)節(jié)作用，是否會(huì)造成機(jī)體更加嚴(yán)重的損傷，也是值得思考的問(wèn)題。

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