蔡珍珍等

【摘要】 目的：研究狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物對(duì)小鼠的半數(shù)致死量（LD50）。方法：150只昆明種小鼠，完全隨機(jī)平均分組，每組10只。腹腔注射給藥，分別給予不同濃度的狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物，以小鼠急性死亡率為指標(biāo)，求狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物的半數(shù)致死量（LD50）和LD50的95%可信區(qū)間。結(jié)果：狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物對(duì)小鼠的半數(shù)致死量（LD50）分別為31.03 mg/kg、1538.58 mg/kg。結(jié)論：狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究和開發(fā)狼毒大戟提供了毒性依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 狼毒大戟； 石油醚； 乙酸乙酯； 小鼠； 半數(shù)致死量

狼毒大戟又名東北狼毒，為大戟科植物狼毒大戟（Eup-horbia fischeriana Steud.）的干燥根，是中藥狼毒的主流商品之一，俗稱貓眼草。據(jù)《本草綱目》的引證，狼毒在《神農(nóng)本草經(jīng)》、南北朝時(shí)期陶弘景的《本經(jīng)集注》和《名醫(yī)別錄》、唐代蘇恭的《唐本草》等著作中均有記載[1]。其味辛，性平，有毒。經(jīng)過現(xiàn)代西醫(yī)和中醫(yī)的大量研究，已證實(shí)其具有良好的抗腫瘤活性成分[2]。2000年，趙奎君等分別使用狼毒大戟根的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿和石油醚的5種提取物對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行了體外抑菌實(shí)驗(yàn)[3]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通過這5種方法提取的成分均有不同程度的抑菌作用，其中以石油醚提取物抑菌作用最強(qiáng)。其次是氯仿、醋酸乙酯。近年來，隨著科學(xué)進(jìn)步，腫瘤的發(fā)生機(jī)制研究與闡明、抗腫瘤靶點(diǎn)的尋找與確定、新型抗腫瘤藥物的研發(fā)與應(yīng)用均有突破性的進(jìn)展，其中以納米分子醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展尤為突出[4-5]?；趯?duì)狼毒大戟的研究，期望能在納米分子水平層面做出重要的發(fā)現(xiàn)。因此，對(duì)于狼毒大戟的毒性研究極為必要與重要?，F(xiàn)今抗腫瘤藥物大部分還是依靠細(xì)胞毒性來發(fā)揮作用，在對(duì)抗腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)機(jī)體的正常細(xì)胞也存在著殺傷作用，因此，發(fā)現(xiàn)高效低毒的抗腫瘤新藥成為當(dāng)今社會(huì)的熱點(diǎn)問題。有文獻(xiàn)顯示，狼毒大戟的石油醚和乙酸乙酯提取物的濃度為100 μg/ml時(shí)，對(duì)SGC-7901、HT-29、HeLa三種腫瘤細(xì)胞均有顯著的抑制作用，其抑制率分別為56.48%，52.61%，45.37%和 52.19%，48.73%，50.12%[6]。但對(duì)于它們的毒性作用還未發(fā)現(xiàn)具體研究。本實(shí)驗(yàn)以狼毒大戟為代表，以昆明種近交系小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過腹腔注射法，分別研究了狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物對(duì)小鼠的半數(shù)致死量。

1 材料與方法

1.1 材料 昆明種小白鼠共150只，體重（22±2）g，雌雄各半，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。提供。實(shí)驗(yàn)室溫度（20±2）℃，濕度（65±15）%。狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物，齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物制備 取浸膏狀態(tài)的狼毒大戟石油醚提取物，用植物油配制好溶液，取干燥的狼毒大戟乙酸乙酯提取物，用水溶解。采用梯度稀釋法依次稀釋，得到藥物的各劑量組溶液。

1.2.2 LD50測(cè)定 經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)，測(cè)定小鼠狼毒大戟石油醚提取物的Dm、Dn值，取150只體重為（20±2）g的健康昆明種小鼠，雌雄各半，完全隨機(jī)分組，每組10只。于實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。設(shè)石油醚組為80只，每組分別給予石油醚提取物10.70、14.27、19.03、25.37、33.83、45.10、60.13和80.17 mg/kg乙酸乙酯組為70只，每組分別給予乙酸乙酯提取物800、1060、1410、1875、2500、3330和4440 mg/kg，行小鼠腹腔注射，注射量為0.4 ml/20 g。染毒后觀察7 d，記錄各組小鼠中毒癥狀、死亡時(shí)間和死亡數(shù)。按改良寇氏法公式計(jì)算各組LD50及95%可信區(qū)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用Excel軟件，按改良寇氏法公式計(jì)算各組LD50及95%可信區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠腹腔注射藥物后的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2，LD50統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

2.2 毒性反應(yīng) 采用腹腔注射法給藥后，多數(shù)小鼠出現(xiàn)精神萎靡、行動(dòng)遲緩、厭食、身體發(fā)抖、外界的敏感性減弱等中毒癥狀；瀕死小鼠出現(xiàn)掙扎，呼吸困難等癥狀；死亡小鼠經(jīng)尸解肉眼觀察，肝臟、脾臟輕微增大。

3 討論

從表3中可知狼毒大戟石油醚提取物的LD50為31.03 mg/kg，95%可信限為25.96～37.09；狼毒大戟乙酸乙酯提取物的LD50為1538.58 mg/kg，95%可信限為1294.59～1828.56。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性，在對(duì)其進(jìn)行新藥開發(fā)時(shí)應(yīng)考慮其安全性評(píng)價(jià)。

參考文獻(xiàn)

[1] 章振東，徐德昌.狼毒大戟的研究進(jìn)展[J].中國甜菜糖業(yè)，2007，45（4）：26-28.

[2] 李杰，張靜.中藥狼毒抗癌作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)研究，1996，9（5）：44-46.

[3] 趙奎君，楊雋，張浦芝.5種狼毒大戟提取物對(duì)結(jié)核桿菌抗菌作用的比較[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000，11（7）：589-590.

[4] T.Takashi，N.Mikihiko，T.Akihiro，et al.Molecular Targeting Therapy of Cancer：Drug resistance，Apoptosis and Survival Signal[J].Cancer Sci，2003，94（1）：15-21.

[5] R.P.Araujo，D.Connemara，Lance A.Liotta，et al.Network-targeted Combination Therapy： A New Concept in Cancer Treatment[J].Drug Discovery Today：Therapeutic Strategies，2004，1（4）：425-433.

[6] 章振東.狼毒大戟抗腫瘤活性成分的提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定[D].哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2007.

（收稿日期：2012-09-07） （本文編輯：李靜）