齊向濤 戚 帥 許 追 歐 都 許丹丹 楊 莉 齊亞銀

（新疆石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832000)

北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果及免疫程序分析

齊向濤 戚 帥 許 追 歐 都 許丹丹 楊 莉 齊亞銀*

（新疆石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832000)

為了查明北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)O型口蹄疫病毒的抗體陽(yáng)性率及免疫合格率，并提出針對(duì)該病的最佳免疫程序，分別采集北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的公豬、后備母豬、哺乳母豬、妊娠母豬、7日齡、14日齡、21日齡、30日齡、40日齡和55日齡仔豬等不同豬群的血液，分離血清，共計(jì)1 500份。采用間接ELISA方法檢測(cè)其抗體。結(jié)果顯示，3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)不同豬群的口蹄疫抗體陽(yáng)性率及免疫合格率之間差異顯著 （≤0.05），口蹄疫總體抗體陽(yáng)性率為86.4%。3個(gè)豬場(chǎng)口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為90.3%、90.6%、78.4%，不同豬群的抗體陽(yáng)性率分別為公豬100%、后備母豬100%、哺乳母豬100%、妊娠母豬100%、7日齡仔豬91.9%、14日齡仔豬92%、21日齡仔豬87.6%、30日齡仔豬83.4%、40日齡仔豬73.9%、55日齡仔豬58.2%。綜合本研究結(jié)果及該豬場(chǎng)前期的免疫程序，建議仔豬的口蹄疫免疫程序?yàn)?0日齡首次免疫，54日齡二次免疫。

口蹄疫抗體；間接ELISA；免疫程序

口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）是由口蹄疫病毒引起的以感染偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)規(guī)定為一類(lèi)動(dòng)物疫病。該病傳播途徑多，傳播速度快，傳染性強(qiáng)，病原變異大，危害嚴(yán)重，曾多次在世界上流行。FMD可侵害多種動(dòng)物，以偶蹄獸最易感。口蹄疫病毒具有傳播迅速和傳播范圍廣的特點(diǎn)，其傳播方式有蔓延式和跳躍式，一般呈流行性，但也可形成跨地區(qū)的大流行。在自然狀態(tài)下，數(shù)個(gè)感染性病毒顆粒即可引起動(dòng)物發(fā)病，由于該病的發(fā)生會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失和政治影響，因此，其防治工作得到世界各國(guó)的高度重視[1]。

母源抗體既能保護(hù)幼畜免遭病原侵襲、抵抗感染，又會(huì)降低疫苗免疫的效果。若免疫時(shí)間過(guò)早，母源抗體可能會(huì)干擾疫苗的作用而導(dǎo)致免疫失??；若免疫時(shí)間過(guò)遲，母源抗體水平過(guò)低，易引起發(fā)病[2]。適時(shí)免疫接種，一方面要避開(kāi)母源抗體的干擾，一方面又要維持抗體對(duì)豬群的免疫保護(hù)率。口蹄疫免疫抗體檢測(cè)是預(yù)防和控制口蹄疫發(fā)生的重要手段。豬場(chǎng)尤其是規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)增強(qiáng)預(yù)防意識(shí)，加強(qiáng)口蹄疫免疫監(jiān)測(cè)，制定合理有效的免疫程序[3]。

為了解北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)豬O型口蹄疫免疫效果，給養(yǎng)殖戶(hù)提供科學(xué)合理的口蹄疫免疫方案，本研究以北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)為研究對(duì)象，收集其背景資料，包括品種、飼養(yǎng)管理措施、免疫防治程序、藥物保健方案等，并分別采集北疆地區(qū)3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的公豬、后備母豬、哺乳母豬、妊娠母豬、7日齡仔豬、14日齡仔豬、21日齡仔豬、30日齡仔豬、40日齡仔豬、55日齡仔豬等不同階段豬群的血清，共計(jì)1 500份，對(duì)試驗(yàn)的3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行豬O型口蹄疫抗體水平的血清學(xué)調(diào)查和仔豬O型口蹄疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律研究，依據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，制定合理的豬O型口蹄疫免疫程序。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（武漢科前動(dòng)物生物制品公司）、酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司），微量移液器（德國(guó)Eppendorf公司），恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）。

1.2 試驗(yàn)樣品

1.2.1 血清樣品的準(zhǔn)備

由北疆A、B、C 3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)＞（種母豬 200頭）中分別采集公豬血清60份、后備母豬血清120份、哺乳母豬血清120份、妊娠母豬血清120份、7日齡仔豬血清180份、14日齡仔豬血清180份、21日齡仔豬血清180份、30日齡仔豬血清180份、40日齡仔豬血清180份、55日齡仔豬血清180份。共計(jì)1 500份。

1.2.2 樣品采集時(shí)間、方法及樣品儲(chǔ)存血清共分4次均等采集，分別為2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；采血方式為前腔靜脈采血（個(gè)別成年豬只采取耳緣靜脈采血）；血液采集后用高速離心機(jī)提取-血清，置于 20℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)方法與判定

1.3.1 試驗(yàn)方法

按照豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)ELISA試劑盒操作。

1.3.2 結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD630值。陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD630值均≥0.8，陰性對(duì)照孔的平均OD630值均＜0.3時(shí)，試驗(yàn)有效。樣品OD630值≥0.4時(shí)判定為陽(yáng)性；樣品OD630值＜0.4時(shí)判定為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

用EXCEL軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理，用SPSS 11.5對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 規(guī)?；i場(chǎng)口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

統(tǒng)計(jì)4次血清檢測(cè)結(jié)果并匯總，運(yùn)用EXCEL軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理，用SPSS 11.5對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)不同豬群O型口蹄疫抗體水平檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 不同豬場(chǎng)及豬群O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果比較

2.2.1 不同豬場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果比較

3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為：A場(chǎng)90.3%、B場(chǎng)90.6%、C場(chǎng) 78.4%；血清抗體的ELISA測(cè)定平均值為：A場(chǎng)1.232、B場(chǎng)1.182、C場(chǎng)1.388。由結(jié)果可以看出，A場(chǎng)總體免疫效果最好，B場(chǎng)免疫結(jié)果也比較好，特別是總體的抗體陽(yáng)性率達(dá)到了90.6%，而C場(chǎng)的免疫效果最差，尤其是對(duì)仔豬的免疫保護(hù)率較低，而且抗體的均勻度不高。

表1 3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)口蹄疫抗體的監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2.2 不同豬群O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果比較

對(duì)各豬群抗體檢測(cè)結(jié)果加以比較，公豬、后備母豬、妊娠母豬、哺乳母豬的抗體陽(yáng)性率均為100%，7日齡仔豬為91.9%，14日齡仔豬為92%，21日齡仔豬為 87.6%，30日齡仔豬為83.4%，40日齡仔豬為73.9%，55日齡仔豬為58.2%。

不同豬群O型口蹄疫血清抗體的ELISA測(cè)定結(jié)果顯示，公豬ELISA測(cè)定平均值為1.725，后備母豬為1.497，妊娠母豬為 1.438，哺乳母豬為1.523，7日齡仔豬為1.653，14日齡仔豬為 1.394，21日齡仔豬為1.312，30日齡仔豬為1.184，40日齡仔豬為0.819，55日齡仔豬為0.651。

綜上所述，仔豬出生后抗體水平就開(kāi)始下降，而在30日齡后下降速度加快。

2.3 檢測(cè)結(jié)果分析

通過(guò)對(duì)3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)不同豬群O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，3個(gè)豬場(chǎng)的豬群雖都經(jīng)豬O型口蹄疫疫苗免疫，但抗體陽(yáng)性率及免疫合格率之間差異顯著（≤0.05），不同豬場(chǎng)及豬群間的抗體分布并不均勻。公豬和后備母豬抗體陽(yáng)性率最高，仔豬抗體陽(yáng)性率偏低，55日齡仔豬的免疫效果不理想，群體整體抗體水平較低，其原因可能為：仔豬免疫力較差，免疫效果不理想；免疫程序不科學(xué)，免疫時(shí)機(jī)不適宜，不能產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答。如母源抗體消失后而疫苗免疫沒(méi)有及時(shí)跟進(jìn)，產(chǎn)生免疫保護(hù)空檔。

表2 3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的口蹄疫免疫程序

3 討論

3.1 加強(qiáng)口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)

規(guī)模養(yǎng)殖戶(hù)應(yīng)重視口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)。開(kāi)展抗體監(jiān)測(cè)的目的不僅僅是診斷，更主要的是評(píng)價(jià)豬群整體的免疫狀況，并且根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果對(duì)免疫方案進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整或提供一些預(yù)警機(jī)制。對(duì)于生產(chǎn)母豬，豬場(chǎng)應(yīng)根據(jù)自身實(shí)際，嚴(yán)格實(shí)行全進(jìn)全出制。對(duì)于一些生產(chǎn)流程相當(dāng)規(guī)范的豬場(chǎng)，可以跟胎次免疫，但每年需合理地進(jìn)行2～3次免疫抗體監(jiān)測(cè)。對(duì)于仔豬，建議在首次免疫之前檢測(cè)其體內(nèi)的母源抗體水平，以確定最佳首次免疫日齡。免疫過(guò)早，母源抗體影響太大，容易造成免疫失敗或群體抗體水平不均衡。免疫過(guò)遲，口蹄疫免疫空白期延長(zhǎng)，染病危險(xiǎn)增加。同時(shí)最好在二次免疫前檢測(cè)口蹄疫病毒抗體水平，以確定合理的免疫程序。

3.2 3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的口蹄疫免疫程序

現(xiàn)在在我國(guó)受口蹄疫威脅的地區(qū)，一般采用28～35日齡首次免疫，首次免疫后1個(gè)月進(jìn)行二次免疫的方案。但這種免疫方案存在很多不理想之處。在本試驗(yàn)過(guò)程中，筆者發(fā)現(xiàn)3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采用的免疫程序與一般的免疫程序不同。具體免疫程序如下：公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬每年春、秋各普免1次；經(jīng)產(chǎn)母豬每次斷奶前免疫1次；后備母豬配種前免疫2次；仔豬斷奶前后，即30～35日齡首次免疫，50～70日齡二次免疫。在本研究中，仔豬口蹄疫免疫抗體水平參差不齊、波動(dòng)較大，推測(cè)可能是仔豬的首次免疫及二次免疫日齡偏早造成的。30日齡仔豬體內(nèi)的母源抗體水平依然較高，會(huì)造成免疫抑制，所以此階段不能進(jìn)行首次免疫，建議仔豬的首次免疫時(shí)間推遲到40日齡。這樣在仔豬55日齡左右時(shí)，抗體水平不至于太低，可在此時(shí)進(jìn)行第二次免疫。經(jīng)調(diào)整后，3個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的口蹄疫免疫程序如表2。

[1]裔群英.鹽城地區(qū)生豬口蹄疫免疫抗體與疫情監(jiān)測(cè).南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[2]王峰.豬O型口蹄疫疫苗不同豬齡免疫抗體分析試驗(yàn).廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011 (21）：118-119.

[3]Chenard G,Miedema K,Moonen P,et al.A solid-phase blocking ELISA for detection of type O foot-and-mouth disease virus antibodies suitable for mass serology.Journal of Virological Methods, 2003,107(1):89-98.

S851.35

B

1673-4645(2013)09-0045-03

2013-07-22

齊向濤（1987-），男，陜西人，碩士研究生

齊亞銀（1980-），男，寧夏人，博士，副教授，主要從事動(dòng)物傳染病的診斷與防治工作