姜增鶴

（黑龍江省富?？h畜牧獸醫(yī)局動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江富裕 161200）

豬嵴病毒的研究進展

姜增鶴

（黑龍江省富?？h畜牧獸醫(yī)局動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江富裕 161200）

豬嵴病毒是微RNA病毒科嵴病毒屬成員，是無囊膜的單股正鏈RNA病毒，可能與豬的腹瀉有關(guān)。本文對豬嵴病毒的研究進展進行了綜述，對病毒的病原學(xué)、流行病學(xué)以及檢測方法進行了重點概述，并提出了豬嵴病毒研究仍需解決的問題。

豬嵴病毒；RNA病毒；腹瀉

近年來，新病原（豬嵴病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬博卡病毒、豬輸血傳播病毒、杯狀病毒、豬戊型肝炎及豬巨細胞病毒等）不斷被人類發(fā)現(xiàn)。這些新的病原大多分離于患病豬只，可能在疾病的發(fā)生中起到一定的作用。本文旨在對豬嵴病毒的研究進展進行綜述，希望對廣大獸醫(yī)從業(yè)人員和研究者有所幫助。

1 病原學(xué)

豬嵴病毒 （porcine kobuvirus, PKV）為微RNA病毒科嵴病毒屬成員，屬于無囊膜的單股正鏈RNA病毒。第八次病毒分類報告將嵴病毒新增入微RNA病毒科，目前該病毒科可分為12個屬[1]：口瘡病毒屬（Aphthovirus）、禽星狀病毒屬（Avihepatovirus）、心病毒屬(Caradiovirus)、腸道病毒屬(Enterovirus)、馬鼻病毒屬（Erbovirus）、戊肝病毒屬（Hepatovirus）、嵴病毒屬（Kobuvirus）、副腸孤病毒屬（Parechovirus）、捷申病毒屬（Teschovirus）、禽腦脊髓炎病毒屬（Tremovirus）、扎幌病毒屬（Sapelovirus）、塞內(nèi)卡病毒屬（Senecavirus）。2012年第九次病毒分類報告將PKV加入嵴病毒屬，目前該病毒屬成員包括愛知病毒、牛嵴病毒和PKV三種病毒[2]。其中愛知病毒是于1989年在日本愛知縣胃腸炎病人糞便標本中發(fā)現(xiàn)的，并依據(jù)發(fā)現(xiàn)地而命名為愛知病毒（Aichi virus）[3]，而牛嵴病毒于2003年首次在日本牛的糞便和血清中分離得到[4]，PKV則是于2007年同時在匈牙利[5]和中國[6]的豬糞樣品中首次被發(fā)現(xiàn)，并相繼在泰國[7]、日本[8]、韓國[9]、巴西和荷蘭[10]等國被發(fā)現(xiàn)。

PKV基因組全長約8 201 bp，共編碼2 488個氨基酸，包括5＇非編碼區(qū)，開放閱讀框（ORF）[11]和含有Ploy (A)序列的3＇非編碼區(qū)[12]。其中ORF編碼1個多聚蛋白，經(jīng)過酶解，產(chǎn)生1個前導(dǎo)蛋白L（leader），3種結(jié)構(gòu)蛋白VP0、VP3和VP1，以及7種非結(jié)構(gòu)蛋白 2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D（圖1）[13]。

2 流行病學(xué)

PKV由 Gábor Reuter等人于2007年首次在匈牙利健康豬腹瀉糞便樣品中發(fā)現(xiàn)，隨后該病毒在很多國家相繼被發(fā)現(xiàn)，且陽性感染率相對較高，從16.7%到99.0%不等。在荷蘭，斷奶仔豬中為16.7%（3/18）[10]；韓國健康豬群中為19.3%（16/83）[9]；中國健康豬群中為30.1%（97/322）[6]；日本健康豬群中為45.4%（133/293）[8]；巴西豬群中（包括未斷奶、斷奶仔豬和成年母豬）為53.0%（61/115）[10]；韓國具有腹瀉癥狀的豬群中為84.5%（71/84）[9]；泰國具有腹瀉癥狀的豬群中為99.0%（97/98）[7]。這些數(shù)據(jù)表明PKV呈世界范圍內(nèi)流行，且陽性率高，在具有腹瀉癥狀的豬群中尤甚。盡管如此，PKV是否與豬的腸道疾病相關(guān)，目前尚無定論。

PKV通過何種途徑傳播，目前也沒有確切的證據(jù)證明。Gábor Reuter 等[14]報道，在感染PKV的豬血清中，也檢測到了PKV，表明PKV可能從胃腸道系統(tǒng)轉(zhuǎn)入了血液循環(huán)系統(tǒng)，從而導(dǎo)致病毒血癥，糞口途徑可能是PKV的傳播途徑之一。但是，也可能存在其他傳播途徑，如哺乳、血液及食物等。

圖1 豬嵴病毒的基因結(jié)構(gòu)示意圖

2010年4月至今，韓國、日本、泰國，我國廣東、福建、廣西、江西、湖北等規(guī)?；i場陸續(xù)發(fā)生豬的嚴重腹瀉，主要癥狀為哺乳仔豬多在出生2～3天后先嘔吐，后腹瀉，迅速死亡，母豬和育肥豬無明顯癥狀，按照常規(guī)腹瀉病處理治療，基本無明顯效果[15]，哺乳仔豬的發(fā)病率為100%，死亡率達到80%以上，5日齡內(nèi)的仔豬死亡率更是達到100%[18]，且疫情在很多豬場一直往復(fù)存在。張莎等[19]于2012年通過PCR技術(shù)對來自我國24個省市84個豬場的病料樣品進行PKV的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在236份病料中，共有63份為PKV陽性，陽性率為26.69%；而在檢測的84個豬場中，共有36個豬場顯示PKV陽性，其疫情持續(xù)時間長，感染范圍廣，死亡率高，比往年要嚴重許多，因此不能排除其他病原混合感染、協(xié)同感染的可能。

3 檢測方法

PKV作為一種新發(fā)現(xiàn)的病毒，相關(guān)的報道還較少。同微RNA病毒科其他成員一樣，PKV的基因序列變異頻率高，根據(jù)相關(guān)文獻報道[16]，PKV的3D基因最為保守，多以該病毒3D基因部分保守序列設(shè)計引物，對PKV進行檢測。

張文波等[17]運用PKV的3D基因保守序列建立RT-PCR檢測方法，其最小檢測量可達2.3 pg，重復(fù)性和特異性良好。該方法可用于PKV的分子流行病學(xué)調(diào)查和臨床病例的快速診斷。熒光定量PCR可以在反應(yīng)過程中對累積擴增產(chǎn)物進行分析和檢測。在反應(yīng)體系中加入熒光分子，通過熒光信號的比例增加來反映DNA量的增加，從而完成PCR產(chǎn)物的實時檢測。試驗結(jié)果無需通過瓊脂糖凝膠電泳來評估，大大節(jié)省了試驗時間，提高了試驗效率。劉孟良等[18]建立的PKV的SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測方法，其最低檢出拷貝數(shù)為100拷貝，且具有良好的穩(wěn)定性和較高的精確度。

PCR技術(shù)無疑是新發(fā)病原快速有效的檢測手段，但由于其操作繁瑣，試驗藥品及配套儀器昂貴，不具規(guī)模的豬場很難配備，并不適合基層豬場對病原的快速檢測。建立一種便于基層推廣和應(yīng)用的PKV免疫學(xué)檢測技術(shù)已是當(dāng)務(wù)之急。國內(nèi)學(xué)者陳蕾等[19]對PKV的主要結(jié)構(gòu)蛋白即中和抗體結(jié)合蛋白VP1蛋白進行了表達，并對其主要的抗原表位、二級及三級結(jié)構(gòu)進行分析。該結(jié)果為PKV特異性抗原的免疫印跡和ELISA等免疫學(xué)方法的建立提供了科學(xué)的參考依據(jù)，有助于進一步推進PKV的研究。

4 展望

目前對PKV的研究才剛剛起步，很多問題有待解決。PKV及其他嵴病毒屬成員與動物疾病的關(guān)系還不明確，在具有腹瀉癥狀的豬群中，PKV陽性率明顯高于無腹瀉癥狀的豬群，但PKV是否與腸道疾病有直接關(guān)系，尚不清楚。但由于檢出率相對較高，可能是因為PKV與其他腸道病毒的混合感染或是PKV作為疾病發(fā)生的誘因。PKV與嵴病毒的其他成員如愛知病毒和牛嵴病毒是否具有交叉感染尚不知道，對動物乃至人類的健康構(gòu)成潛在的威脅。目前，牛嵴病毒已成功通過vero細胞分離，但有關(guān)PKV的細胞分離還未見報道，限制了對該病毒的研究，國內(nèi)外對PKV的研究還僅限于序列測定分析[9,23]，對其致病機理、免疫學(xué)特性、流行病學(xué)特性等方面還未能深入研究。PKV為一種新型病毒，給世界豬業(yè)帶來危害的同時也給科研人員帶來了挑戰(zhàn)和機遇。

[1]International committee on taxonomy ofviruses.Virology Division-IUMS. http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy. asp?version=2009,2012-02-05.

[2]Knowles NJ,Hovi T,Hyypia T,et al.Virus Taxonomy,Ninth Report of the InternationalCammitteeonTaxonomyof Viruses:Picornaviridae.San Diego:Elsevier Academic Press,2012:855-881.

[3]Yamashita T,Kobayashi S,Sakae K,et al..Isolation of cytopathic small round viruses with BS-C-1 cells from patients with gastroenteritis.Infect Dis,1991,164 (5):954-957.

[4]Yamashita T,Ito M,Kabashima Y, et al.Isolation and characterization of a new species of kobuvirus associated with cattle.Gen Virol,2003,84(11):3069-3077.

[5]Reuter G,Boldizsar A,Kiss I,et al. Candidate new species of Kobuvirus in porcine hosts.Emerg Infect Dis,2008,14 (12):1968-1970.

[6]Yu JM,Jin M,Zhang Q,et al.Candidate porcine Kobuvirus,China.Emerg Infect Dis,2009,15(5):823-825.

[7] Khamrin P, Maneekarn N, Kongkaew A,et al.Porcine kobuvirus in piglets,Thailand.Emerg Infect Dis,2009, 15(12):2075-2076.

[8]Khamrin P,Maneekarn N,Hidaka S,et al.Molecular detection of kobuvirussequences in stool samples collected from healthy pigs in Japan.Infect Genet Evol, 2010,10(7):950-954.

[9]Park K,Park SJ,Kim HK,et al. Molecular detection of porcine kobuviruses in pigs in Korea and their association with diarrhea. Arch Virol, 2010, 155(11): 1803-1811.

[10]Barry AF,Ribeiro J,Alfieri AF,et al.First detection of kobuvirus in farm animals in Brazil and the Netherlands.Infect Genet Evol,2011,11(7)：1811-1814.

[11]Reuter G,Boros A,Pankovics P. Kobuviruses a comprehensive review.Rev Med Virol,2011,21:32-41.

[12]Yamashita T,Sakae K,Tsuzuki H, et al.Complete nucleotide sequence and genetic organization of Aichi virus,a distinct member of the Picornaviridae associated with acute gastroenteritis in humans. J Virol,1998,72(10):8408-8412.

[13]德全，葛菲菲，鞠厚斌，等．嵴病毒（Kobuvirus）研究進展．中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2012，34（12）：1006-1009．

[14 Reuter G, Kecskemeti S, Pankovics P.Evolution of porcine kobuvirus infection,Hungary.Emerg Infect Dis, 2010,16(4):696-698.

[15]修金生，陳小權(quán)，王斌.豬嵴病毒實時熒光定量RT-PCR方法的建立.中國人獸共患病學(xué)報，2012，28（9）：922-926．

[16]陳如敬，吳學(xué)敏，車勇良，等．豬嵴病毒福建株3D基因的克隆及遺傳進化分析．福建農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，27（9）：91-94．

[17]張文波，冷闖，段俊，等．豬嵴病毒RT-PCR測方法的建立及應(yīng)用．中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（1）：42-45．

[18]劉孟良，王瀟娣，徐薇薇，等．豬嵴病毒SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測方法的建立．中國獸醫(yī)科學(xué)，2013，43（3）：261-265．

[19]陳蕾，朱玲，李淞，等．嵴病毒VP1基因的克隆及生物信息學(xué)分析．中國獸醫(yī)科學(xué)，2012，42（12）：1254-1258．

S852.65+9.6

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