趙 璇 王曉東

（山東省平度市人民醫(yī)院 山東 平度 266700）

支氣管哮喘的基本病理特征是氣道炎癥反應，它與病情惡化、氣道結構重建密切相關［1］。有研究表明，EOS在哮喘氣道炎癥反應中起重要作用。EOS炎癥程度可作為一個獨立的指標來診斷哮喘和衡量哮喘病情［2］；ECP是EOS激活后釋放的一種毒性蛋白，是EOS活化的標志，也是造成哮喘氣道炎癥的重要介質，可直接反映氣道炎癥狀態(tài)［3］。為提高臨床對哮喘的診斷及預后分析，我們于2004年12月至2008年12月對98例住院患者（哮喘急性發(fā)作組36例；哮喘治療緩解組32例；健康對照組30例）采用誘導痰的方法，并進行動態(tài)監(jiān)測誘導痰細胞學分類及ECP測定，旨在探討其與氣道炎癥反應狀態(tài)的關聯，并評價其在哮喘診斷和預后分析的價值。

1 研究對象和實驗方法

1.1 研究對象：研究對象均來自本院2004年12月至2008年12月期間住院病例：（1）哮喘的診斷標準及病情嚴重程度的分度均按中華醫(yī)學會呼吸病學分會1997年修定的“支氣管哮喘防治指南”［4］的標準進行；哮喘急性發(fā)作組36例，男20例，女16例，年齡22～82歲，平均（52±15）歲；哮喘治療緩解組32例：男15例，女17例，年齡32～75歲，平均（53±12）歲，均為哮喘治療后隨訪癥狀體征消失，并維持4周以上；（2）健康對照組30名：男15例，女15例，年齡28～64歲，平均（49±16）歲，為健康志愿的非吸煙者，無過敏史、無呼吸道疾病史，做痰誘導前1個月內無呼吸道感染。各組在年齡分布和性別組成上無顯著性差異（P＞0.05）。

1.2 實驗方法

1.2.1 痰液誘導及處理：哮喘患者（發(fā)作組和緩解組）誘導痰液前均吸入支氣管舒張劑喘樂寧200μg，以預防哮喘發(fā)作；采用Brightling等［5］報道的方法：用3%高滲鹽水超聲霧化吸入15～20min，用力咳痰至培養(yǎng)皿，向痰液內加入4倍體積的0.1%的二硫蘇糖醇，渦旋震蕩10min；再加入等量的磷酸鹽緩沖液震蕩5min，2 000r／min離心10min；上清液分裝，－70℃凍存待檢。沉淀用磷酸鹽緩沖液懸浮，用錐蟲藍拒染法鑒定細胞活力，＞50%為合格痰。制作細胞涂片，蘇木精－伊紅染色，光鏡下進行細胞學分類。

1.2.2 誘導痰ECP測定：ECP檢測采用熒光酶免疫法，按照ECP熒光酶免疫試劑盒的步驟，采用Pharmacia CAP變應原檢測系統(tǒng)（瑞典，靈敏度2μg／L，測定范圍2～200μg／L）檢測。

1.2.3 統(tǒng)計分析方法：數據輸入SPSS12.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，數值以±s表示，多組間的比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用最小顯著差異法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結果

如（表1）所示，哮喘急性發(fā)作組EOS數量、ECP測定值明顯高于哮喘治療緩解組、健康對照組（P＜0.01）；健康對照組EOS、Neu數量、ECP測定值明顯低于哮喘急性發(fā)作組、哮喘治療緩解組（P＜0.01）；哮喘治療緩解組EOS數量、ECP測定值明顯低于哮喘急性發(fā)作組，但明顯高于健康對照組（P＜0.05），哮喘治療緩解組與哮喘急性發(fā)作組Neu數量無明顯差異性。

3 討論

近年，人們已經逐步認識到哮喘是一種包括嗜酸粒細胞、肥大細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞等炎癥細胞浸潤的慢性炎癥性疾病，多種炎癥細胞在氣道浸潤和聚集，相互作用，可以分泌50多種炎癥介質和25種以上細胞因子，與炎癥細胞相互作用構成復雜的網絡，使氣道反應性增高，氣道收縮，黏液分泌增加，血管滲出增多。氣道炎癥最終導致氣道壁組織結構破壞增厚、基底膠原沉積、平滑肌增生肥大、分泌物閉塞氣道等病理改變。哮喘患者病情惡化可能是由于氣道炎癥加重所至。目前臨床上主要以肺功能、患者的癥狀來間接評價氣道炎癥的輕重，這些間接方式的主要缺點是與氣道炎癥的相關性差。纖支鏡檢查證實，很多以肺功能和臨床癥狀來指導治療的哮喘患者其氣道炎癥持續(xù)存在。

表1 誘導痰細胞組成及ECP含量

誘導痰最早用于肺癌的診斷，20世紀90年代初，Pin等把誘導痰引入哮喘患者氣道炎癥評價；近十年來，隨著誘導痰技術的改進和檢測方法的完善，除細胞總數和淋巴細胞分類的重復性較差外，嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、巨噬細胞等細胞分類和上清液液相成分具有良好的重復性，使其成為一種無創(chuàng)評價氣道炎癥的重要方法。嗜酸性粒細胞在哮喘發(fā)病機制中有著重要地位。嗜酸性粒細胞是一種毒性細胞，可以通過釋放胞質中的主要堿基蛋白（MBP）、嗜酸性粒細胞陽離子蛋白（ECP）、嗜酸性粒細胞衍生性神經毒素（EDN）等毒性顆粒蛋白損傷靶器官；這些顆粒蛋白是造成哮喘特征性表現的主要原因之一。其中，ECP是嗜酸性粒細胞活化后產生的主要毒性蛋白，能介導氣道上皮和細胞破壞，誘導肥大細胞釋放組胺等，造成氣道炎癥，在嗜酸性粒細胞性炎癥中起到重要作用。

長期治療方案應以氣道炎癥是否抑制為指導原則，根據氣道的炎癥輕重及時調整藥物劑量，使氣道炎癥得到有效控制的同時盡量減少藥物的用量。因此，臨床上連續(xù)監(jiān)測患者誘導痰EOS和ECP的變化，有助于預測哮喘病情的波動情況，對于需要長期治療的慢性支氣管哮喘患者，針對病情制訂相應的治療方案，具有一定的臨床參考價值。

［1］British Thoracic Society.The British guidelines on asthma management.Thorax，1997，52：S1－S21

［2］Rosi E，Ronchi MC，Grazzini M，et al.Sputum analysis，bronchial hyperresponsivness，and airway function in asthma：Results of a factor analysis.J allergy Clin Immunol，1999，103：232－237

［3］傅蓉，陳光瑾，馬瑞琴，等.哮喘患者血清嗜酸性細胞陽離子蛋白及白細胞介素－2受體觀察.中華結核和呼吸雜志，1999，22：211－212

［4］中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南（支氣管哮喘的定義、診斷、治療、療效判斷標準及教育和管理方案）.中華結核和呼吸雜志，1997，20：261－267

［5］Brightling CE，Ward R，Goh KL，et al.Eosinophilic bronchitis is an important cause of chronic cough［J］.Am J Respir Crit Care Med，1999，160（2）：406－410