陳亞強(qiáng)張樂(lè)宜彭津津

（1重慶市黔江區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶 409000；2廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東廣州 510000；3重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶 404100）

仔豬滲出性皮炎的實(shí)驗(yàn)室診斷和綜合防治

陳亞強(qiáng)1張樂(lè)宜2彭津津3

（1重慶市黔江區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶 409000；2廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東廣州 510000；3重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶 404100）

豬滲出性皮炎是由葡萄球菌屬細(xì)菌引起的一種急性、超急性的高度接觸性傳染病，該病的主要特征是全身油脂樣滲出性皮炎、破潰、結(jié)痂，可導(dǎo)致腹水和死亡。本文針對(duì)一例豬滲出性皮炎的病例，對(duì)其實(shí)驗(yàn)室診斷方法、防治措施進(jìn)行了探討。關(guān)鍵詞：豬滲出性皮炎；葡萄球菌；診斷；防治

豬滲出性皮炎 （Exudative epidermit，EE）又稱豬油皮病或煤煙病，是一種急性、超急性的高度接觸性傳染病，主要特征為全身油脂樣滲出、惡臭、破潰，最后形成痂皮，可導(dǎo)致腹水和急性死亡。該病的主要病原是豬葡萄球菌（ ），但其他葡萄球菌如產(chǎn)色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、松鼠源葡萄球菌也可引起該病的發(fā)生[1]。5～6日齡的哺乳仔豬和剛斷奶的仔豬最易感染該病，偶見母豬感染[2]。普遍認(rèn)為脫落毒素的產(chǎn)生是該病的主要致病因子[3]，脫落毒素目前有6種類型，分別是EXHA、EXHB、EXHC、EXHD、SHETA和SHETB，這些毒素可以選擇性地消化真皮表面的Desmogen-1，導(dǎo)致細(xì)胞與細(xì)胞間的斷裂分離，特別是棘細(xì)胞層的細(xì)胞分離[4]。引起該病的細(xì)菌主要通過(guò)破損的皮膚侵入機(jī)體，此外機(jī)體免疫力低下也會(huì)導(dǎo)致該機(jī)會(huì)性病菌侵入。豬滲出性皮炎無(wú)季節(jié)特異性，目前該病的預(yù)防和治療尚無(wú)有效的疫苗和抗生素[5]。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2011年4月，廣東省增城市某豬場(chǎng)6～10日齡的2頭哺乳仔豬首先開始發(fā)病，病初眼眶周圍出現(xiàn)紅斑，豬場(chǎng)工作人員以為是打架咬傷，2天后背部也出現(xiàn)紅斑，并發(fā)現(xiàn)有水泡，病豬食欲下降，被毛雜亂，臥地不起，顫抖，并出現(xiàn)呼吸急促現(xiàn)象，體溫高達(dá)40.5℃。發(fā)病第3天，全窩開始發(fā)病，癥狀嚴(yán)重程度不一。發(fā)病第5天，皮膚表面滲出物和地面污物混合，形成一層棕黃色油脂樣痂皮。整窩豬只注射青霉素和鏈霉素，治療后無(wú)效，豬只開始死亡，窩死亡率達(dá)40%。之后送病豬的病料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，經(jīng)治療后剩余豬只痊愈。

2 病理變化

病豬消瘦，頜下淋巴結(jié)腫大，呈大理石樣外觀，心包積液；肺臟表面散在有大小不等的出血點(diǎn)，邊緣有淤血；肝臟發(fā)黃；腎臟腫大，形態(tài)不規(guī)則。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離與培養(yǎng)

用棉簽刮取沒有污物的皮膚處，同時(shí)無(wú)菌采病豬心臟、肺臟和淋巴結(jié)，分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和血平板培養(yǎng)基上劃線進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。皮膚組的平板中菌落較多，病豬心臟、肺臟和淋巴結(jié)組的普通瓊脂培養(yǎng)基和血平板培養(yǎng)基上均可觀察到乳白色、表面光滑隆起的單一圓形菌落。

3.2 鏡檢

運(yùn)用革蘭氏染色法對(duì)待檢菌落染色，顯微鏡下可觀察到藍(lán)紫色的球菌（圖1），呈葡萄串狀排列，初步確定為葡萄球菌。

圖1 葡萄球菌鏡檢結(jié)果

3.3 生化試驗(yàn)

將純培養(yǎng)的細(xì)菌接種于葡萄球菌屬細(xì)菌生化編碼鑒定管（項(xiàng)目：尿素、蔗糖、精氨酸水解、木糖、乳糖、甘露

糖、麥芽糖、木醇、甘露醇、蕈糖、乙酰葡糖胺、硝酸鹽還原、蜜二糖、果糖、V-P、山梨醇）進(jìn)行生化鑒定，對(duì)照TH-16S細(xì)菌生化編碼鑒定書，分析確定所分離到的菌株編碼及鑒定率，結(jié)果表明此菌編碼為331320（鑒定率94.3%，T值為0.89），初步確定為豬葡萄球菌。

3.4 PCR鑒定

將純培養(yǎng)后的葡萄球菌按照AXYGEN細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒步驟提取細(xì)菌基因組DNA，然后運(yùn)用已建立的多重PCR檢測(cè)方法進(jìn)行PCR鑒定，循環(huán)條件為：94℃預(yù)變性5分鐘；94℃變性 50秒、54℃退火 50秒、72℃延伸1分鐘，循環(huán)33次；最后72℃延伸10分鐘，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果，回收明亮條帶并測(cè)序。電泳結(jié)果表明（圖2），在GAP（826 bp）和EXHA基因引物擴(kuò)增處出現(xiàn)了明顯的條帶，表明其屬于葡萄球菌屬，并含有EXHA毒素基因；測(cè)序結(jié)果表明該菌和豬葡萄球菌（GenBank:DQ321689.1）的匹配率為99%，確定為豬葡萄球菌。

圖2 PCR鑒定結(jié)果M:DL2000 marker；Y:陰性對(duì)照；1～4:樣品；K:空白對(duì)照

4 討論與防治

4.1 藥敏試驗(yàn)

用接種棒挑取單個(gè)菌落，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上重復(fù)劃線。然后將商品藥敏試紙片貼在表面，37℃培養(yǎng)18小時(shí)，觀察抑菌圈大小。結(jié)果顯示：頭孢噻呋抑菌圈為23 mm、頭孢拉定21 mm，高度敏感；新生霉素18 mm，恩諾沙星16 mm，中度敏感；米諾環(huán)素5mm，四環(huán)素6mm，低敏感；青霉素、鏈霉素、氯霉素、慶大霉素耐藥。

4.2 綜合防治

因葡萄球菌很容易產(chǎn)生耐藥性，因此豬場(chǎng)若發(fā)生該病，最好進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，然后經(jīng)藥敏試驗(yàn)確定用何種抗生素，以免導(dǎo)致葡萄球菌帶毒菌株的變異而造成耐藥。此外，還有研究表明EE的發(fā)生與免疫力有很大關(guān)系，可能是由于免疫失敗而造成免疫力低下，進(jìn)而引發(fā)該病。因此，合理的免疫程序、良好的飼養(yǎng)管理和使用敏感的藥物進(jìn)行預(yù)防性投藥有助于預(yù)防該病的發(fā)生。

4.2.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

為給仔豬提供充足的奶水和母源抗體，應(yīng)保障母豬有足夠和清潔的飲水，可在水中添加300g/噸的食鹽、200g/噸的檸檬酸以及電解多維；提高母豬營(yíng)養(yǎng)水平，日糧中蛋白質(zhì)水平提高2%～3%，礦物質(zhì)水平提高3%～6%；保持良好的產(chǎn)房環(huán)境衛(wèi)生，通風(fēng)、溫濕度適當(dāng)，做好定期消毒工作。減少仔豬的皮膚劃傷，將產(chǎn)床上尖銳的地方磨平，在剪牙、斷尾等易造成感染的環(huán)節(jié)嚴(yán)格消毒、規(guī)范操作，避免仔豬互相打架。

4.2.2 制定合理的免疫程序

豬場(chǎng)要做好母豬豬瘟和口蹄疫的免疫。若免疫失敗，母豬抵抗力下降，母源抗體也會(huì)隨之減少，將會(huì)導(dǎo)致仔豬極易感染葡萄球菌，引起EE。所以各場(chǎng)應(yīng)根據(jù)各自情況，制定合理的免疫程序，購(gòu)買正規(guī)疫苗，保存得當(dāng)，在免疫過(guò)程中遵循操作規(guī)范，避免免疫失敗。

4.2.3 定期驅(qū)蟲

對(duì)不同階段的豬群進(jìn)行定期驅(qū)蟲，并做好詳細(xì)記錄。

4.2.4 藥物預(yù)防與治療

有條件的豬場(chǎng)可以定期分離鑒定產(chǎn)房細(xì)菌，通過(guò)藥敏試驗(yàn)進(jìn)行預(yù)防性投藥，堅(jiān)持預(yù)防為主、早發(fā)現(xiàn)早治療的原則。治療該病前最好先經(jīng)藥敏試驗(yàn)確定抗生素種類，本病例最后使用頭孢噻呋鈉2 mg/kg，地塞米松2 mL，10%恩諾沙星2.5 mg/kg，每日2次，連用3～5天，同時(shí)在豬體表涂魚石脂軟膏，最終在治療后5～8天時(shí)剩余豬只痊愈。如果有脫水嚴(yán)重的豬則及時(shí)補(bǔ)液，氯化鈉3.5g、碳酸氫鈉2.5g、氯化鉀1.5g、葡萄糖20 g和適量維生素C、維生素B6溶于1 L水中進(jìn)行口服補(bǔ)液。

[1]Chen S,Wang Y,Chen F,et al.A Highly Pathogenic Strain of Staphylococcus sciuri Caused Fatal Exudative Epidermitis in Piglets[J].PLoS One,2(1):e147. doi:10.1371.

[2]楊鼎，郝永清，宋長(zhǎng)緒.豬葡萄球菌脫落毒素研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30 (4):60-64.

[3]WegenerHC,Andresen LO, Bille-Hansen.Staphylococcus hyicus viru-Lence in relation to exudative epidermitis in the piglet[J].Can J Vet Res,1993,57: 119-125.

[4]Fudaba Y,Koji N,Lars OA,et al. Staphylococcus hyicus exfoliative toxins selectively digest porcine desmoglein 1[J]. Microb Pathog,2005,39(5-6):171-176.

[5]孫娟.仔豬葡萄球菌性皮炎的診治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2007(2):60.

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