杜乾坤，劉東海，楊緩緩，李文寧，郝 婷

(1.承德醫(yī)學(xué)院2009級中藥學(xué)系，河北承德 067000;2.指導(dǎo)教師)

學(xué)生園地

超聲提取素馨花總環(huán)烯醚萜苷的單因素實驗研究

杜乾坤1，劉東海2，楊緩緩1，李文寧1，郝 婷2

(1.承德醫(yī)學(xué)院2009級中藥學(xué)系，河北承德 067000;2.指導(dǎo)教師)

素馨花;總環(huán)烯醚萜苷;超聲提取

素馨花藥材又名耶悉茗花，為木犀科茉莉?qū)僦参锼剀盎?Jasminum officinale L.var. grandiflorum)的干燥花蕾，具有疏肝解郁、行氣止痛之功效，在我國民間用于治療消化不良、十二指腸球部潰瘍及慢性肝炎、肝硬化等癥[1]。素馨花主要化學(xué)成分為環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類和三萜皂苷類化合物[2-3]，其中環(huán)烯醚萜苷類化合物主要為橄欖苦苷，且具有抗HBV活性[4]。本研究以素馨花總環(huán)烯醚萜苷含量為考察指標(biāo)，用紫外分光光度法進(jìn)行含量測定，考察素馨花總環(huán)烯醚萜苷超聲提取工藝中的單因素及水平，為正交實驗法優(yōu)選素馨花總環(huán)烯醚萜苷的超聲提取工藝提供實驗依據(jù)，為素馨花中環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)成分的進(jìn)一步分離純化奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 SP-752型紫外分光光度計(上海光譜儀器有限公司);電子分析天平(瑞士梅特勒AG-245型);RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);CHRIST實驗室型冷凍干燥機(jī)(德國MARTIN CHRIST);素馨花(亳州藥材交易中心，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所藥物化學(xué)研究室副研究員、生藥學(xué)博士李彬鑒定);橄欖苦苷對照品(實驗室自制，純度99.5%);試劑均為分析純。

1.2 方法[5]

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制定:取橄欖苦苷對照品5.00mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.0500mg的溶液，作為橄欖苦苷對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在232nm波長處用紫外分光光度計測定吸收度。得回歸方程:A=0.0289，C-0.0049，R2=0.9998。

1.2.2 樣品測定:五個水平的總環(huán)烯醚萜苷含量測定均采用紫外分光光度計測定。取各個水平所得的干浸膏各2.00mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.0400mg的溶液，作為供試液。在232nm波長處用紫外分光光度計測定吸收度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出供試液中的總環(huán)烯醚萜苷的濃度C1，再用公式:總環(huán)烯醚萜苷收率(按藥材計算)(%)= (C1/0.0400×M干浸膏)/2.00×100%,計算出總環(huán)烯醚萜苷的收率。

2 結(jié)果

實驗選用了提取時間、提取溫度、料液比、提取次數(shù)以及乙醇濃度等對總環(huán)烯醚萜苷提取率起主要影響的5個因素，以素馨花總環(huán)烯醚萜苷的提取率為考察指標(biāo)，進(jìn)行了單因素考察。

2.1 提取時間對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響 固定提取溫度25℃，提取次數(shù)1次，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同的超聲時間對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響，結(jié)果見圖1。

圖1 提取時間對總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響

2.2 提取溫度對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取次數(shù)1次，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同提取溫度對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響，結(jié)果見圖2。

圖2 提取溫度對總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響

2.3 料液比對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，提取次數(shù)1次，乙醇濃度30%，考察不同料液比對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 料液比對總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響

2.4 提取次數(shù)對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同提取溫度對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響，結(jié)果見圖4。

圖4 提取次數(shù)對總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響

2.5 乙醇濃度對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，提取次數(shù)1次，料液比2:20，考察不同提取溫度對素馨花總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響，結(jié)果見圖5。

圖5 乙醇濃度對總環(huán)烯醚萜苷提取率的影響

3 討論

超聲提取的基本原理是利用超聲波產(chǎn)生強(qiáng)烈振蕩、高速和強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用，破壞植物藥材的細(xì)胞，使溶劑能滲透到藥材細(xì)胞中，加速藥材中有效成分的浸出提取。與傳統(tǒng)提取工藝相比，超聲波提取具有時間短、產(chǎn)率高、不需加熱(不破壞有效成分)、適應(yīng)性廣、提取的藥液雜質(zhì)少，有效成份易于分離、純化等優(yōu)點。超聲提取是目前研究中藥有效成分時優(yōu)先選擇的提取工藝之一。

前期工作中，我們考察了素馨花中總環(huán)烯醚萜苷的水冷浸、水煎煮、醇冷浸、醇回流等傳統(tǒng)提取工藝[6]。本實驗通過單因素試驗對素馨花中總環(huán)烯醚萜苷超聲提取的5種影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。比較5種影響因素所得結(jié)果，溫度對提取率影響最小，可以忽略;乙醇濃度、提取時間、提取次數(shù)、料液比等對提取率均有顯著影響。相關(guān)研究結(jié)果可為正交實驗法優(yōu)選素馨花總環(huán)烯醚萜苷的超聲提取工藝提供實驗依據(jù)。

[1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].第二版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006.2476

[2]趙桂琴,夏晶晶,董俊興.素馨花糖苷類化學(xué)成分研究[J].藥學(xué)學(xué)報,2007,42(10):1066-1069.

[3]趙桂琴,董俊興.素馨花三萜皂苷類化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2008,33(1):38-42.

[4]Zhao GQ, Yin ZF,Dong JX. Antiviral ef fi cacy against hepatitis B virus replication of oleuropein isolated from Jaminum of fi cinale L.var.grandiflorum[J].Journal of Ethnopharmacology,2009,125(2): 265-268.

[5]陳文珠，郭偉忠，林茵.梔子藥材提取工藝的優(yōu)化[J].井岡山學(xué)院(自然科學(xué))，2008，29(6):75-77.

[6]郝婷，趙桂琴，張樹峰.素馨花中總環(huán)烯醚萜苷提取工藝的研究[J].時針國醫(yī)國藥，2011，26(6):1353-1355.

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1004-6879(2013)01-0075-02

2012-06-13)