黃健(浙江省新昌縣人民醫(yī)院，浙江 新昌 312500)

花期對益母草藥材中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量的影響

黃健(浙江省新昌縣人民醫(yī)院，浙江 新昌 312500)

目的 研究開花對益母草藥材中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量的影響。方法 在同一地區(qū)不同時期采收益母草藥材樣品，按照藥典方法對其中的鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量進(jìn)行測定，縱向比較。結(jié)果 開花過程中益母草藥材中鹽酸水蘇堿及鹽酸益母草堿的含量不斷降低。結(jié)論 開花對益母草藥材中鹽酸水蘇堿及益母草堿含量影響較大，花后期因益母草堿不達(dá)標(biāo)不建議使用。

益母草；鹽酸水蘇堿；鹽酸益母草堿；藥材質(zhì)量

益母草為唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鮮或干燥地上部分。鮮品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季莖葉茂盛、花未開或初開時采割，曬干，或切段曬干[1]。益母草的藥用有效成分是生物堿，現(xiàn)已知有水蘇堿、益母草堿等多種生物堿[2]。水蘇堿是中藥益母草中的主要有效成分之一，具有多方面的生理活性：能提高冠狀動脈和心肌營養(yǎng)性血流量、減少心肌細(xì)胞壞死、降低血管阻力、改善微循環(huán)，減慢心率、減少心輸出量等作用[3]；能抑制乳腺癌和子宮肌腺病的發(fā)生[4]；具有祛痰、鎮(zhèn)咳、松弛支氣管平滑肌的作用[5]。益母草堿能夠抑制血小板的聚集，防止血栓形成。筆者對不同生長期益母草中水蘇堿和益母草堿進(jìn)行含量測定，縱向比較其含量變化，論證藥典中益母草的采收期是否合理。

1 材料

1.1 儀器

島津LC-15C高效液相色譜儀(日本島津)；Alltech 3300 ELAD蒸發(fā)光檢測器(美國奧泰科技有限公司)；BT125D電子天平(塞多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；AL104電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2 對照品

鹽酸水蘇堿 (中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-201111，含量：99.60%，使用前五氧化二磷減壓干燥12 h)；鹽酸益母草堿(中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-201111，含量：99.60%，使用前五氧化二磷減壓干燥12 h)。

1.3 樣品

本試驗(yàn)所用益母草樣品均為筆者在不同時期采自浙江省新昌縣同一群落。經(jīng)陳宗良副主任中藥師鑒定為唇形科植物益母草Leonurus japonicas Houtt.的地上部分。樣品1：2012年4月1日采收干燥，此時益母草生長較旺盛期，習(xí)稱童子益母草；樣品2：2012年5月6日采收干燥，此時益母草處于花前期，花苞小部分形成；樣品3：2012年6月1日采收干燥，此時益母草處于花中期，花部分開發(fā)；樣品4：2012年7月10日采收干燥，此時益母草處于花后期，花全部凋謝。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸水蘇堿的含量測定[6-7]

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Venvsil 100A C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；蒸發(fā)光散射檢測器(空氣流速：1.6 L·min-1，漂移管溫度：48.0 ℃)；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80∶20)；流速：1.0 mL·min-1；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)算應(yīng)≥6 000。

2.1.2 對照品溶液的制備 取鹽酸水蘇堿對照品10.39 mg，置25 mL量瓶中，加70%乙醇溶液至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.413 9 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液25 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

2.1.4 線性范圍 精密吸取對照品溶液5，10，15，20，25 μL分別注入高效液相色譜儀，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以進(jìn)樣量的對數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積對數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸線方程Y=1.658 4X-5.401 5，r=0.996 5。表明進(jìn)樣量在2.07～10.35 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 儀器精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積RSD為0.8%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液，在0，3，6，12，15 h分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測定，結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積RSD為1.3%，表明該方法15 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一采收時期樣品5份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果RSD為1.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取益母草樣品(含量2.34%)6份，各約0.2 g，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并進(jìn)行測定，結(jié)果平均回收率為97.9%，RSD=1.0%，見表1。

表1 鹽酸水蘇堿回收率試驗(yàn)表Tab 1 Recovery test of stachydrine hydrochloride

2.1.9 樣品測定 取不同花期的益母草樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定鹽酸水蘇堿的含量(n=3)，計(jì)算各樣品中鹽酸水蘇堿的含量，測得結(jié)果見表2；不同時期的樣品色譜圖見圖1。

表2 樣品中鹽酸水蘇堿的含量(n=3)Tab 2 Determination results of stachydrine hydrochloride in samples(n=3)

2.2 鹽酸益母草堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱Venvsil 100A C18柱(4.6mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液(24∶76)；檢測波長：277 nm。理論板數(shù)按鹽酸益母草堿峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取鹽酸益母草堿對照品8.48 mg，置100 mL量瓶中，加入70%乙醇溶液至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.084 8 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取“2.1.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液。

2.2.4 線性范圍 分別精密吸取對照品溶液1，2，5，10，15，25 μL注入高效液相色譜儀，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸線方程Y=57 983 689.03X+102 810.59，r=0.998。表明進(jìn)樣量在0.088 5～2.212 5 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 鹽酸水蘇堿HPLC色譜圖A-對照品；B-旺盛期樣品；C-花前期樣品；D-花中期樣品；E-花后期樣品；1-鹽酸水蘇堿Fig 1 HPLC chromatograms of stachydrine hydrochloride A-reference substances; B-vigorous growth period; C-flower prophase; D-flower midterm; E-flower later; 1-stachydrine hydrochloride

2.2.5 儀器精密度試驗(yàn) 取鹽酸益母草堿對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積RSD為1.2%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液10 μL，在0，6，12，18，24 h分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測定，結(jié)果峰面積的RSD為1.0%，表明其在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一采收時期樣品5份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定鹽酸益母草堿含量，結(jié)果RSD為1.9%，表明重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取益母草(含量為0.20%)樣品6份，各約0.2 g，分別精密加入鹽酸益母草堿對照品溶液5 mL，再精密加入70%乙醇溶液20 mL，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果平均回收率為97.8%，RSD=0.9%，見表3。

表3 鹽酸益母草堿回收率試驗(yàn)表Tab 3 Recovery test of leonurine hydrochloride

2.2.9 樣品測定 取不同花期的益母草樣品粉末，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算各樣品中鹽酸益母草堿的含量，結(jié)果見表4；不同時期的樣品色譜圖見圖2。

表4 益母草樣品中鹽酸益母草堿含量(n=3)Tab 4 Determination results of leonurine hydrochloride in samples(n=3)

3 討論

開花對益母草藥材中水蘇堿的含量有較大的影響。開花過程中益母草藥材中的含量不斷降低，以開花前期到中期較為明顯。雖然各個時期益母草藥材中含量都能符合藥典要求(鹽酸水蘇堿應(yīng)≥0.50%)，但開花過程中耗損嚴(yán)重。各個時期鹽酸益母草堿的差異較大，尤其是開花后期鹽酸益母草堿的損失較大，不能達(dá)到藥典的含量要求(含鹽酸益母草堿應(yīng)≥0.050%)。故益母草含量以童子益母草為優(yōu)，花前期較童子益母草略差，花中期又次于花前期，花后期最差不能達(dá)到藥典要求。

不同產(chǎn)地的益母草品質(zhì)不同，雖然炮制過程、儲存可能對總堿含量差異有一定影響，但由于益母草的炮制只是簡單的烘干切割，而且其有效成分生物堿又較為穩(wěn)定，經(jīng)過筆者的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)益母草藥材的質(zhì)量主要取決于產(chǎn)地采收時間，在花未開或花初開時，莖葉旺盛期采收的藥材水蘇堿及益母草堿含量最高，與藥典收載的干品夏季莖葉茂盛、花未開或初開時采割相吻合。建議在選用藥材時應(yīng)考慮到這一因素，從而提高生藥質(zhì)量，使之得到更好的用藥效果[2]。

開花對益母草藥材中其他物質(zhì)含量的影響有待進(jìn)一步研究。

REFERENCES

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Impact of the Flowering on the Content of Stachydrine Hydrochloride and Leonurine Hydrochloride in Leonuri Herba

HUANG Jian
(Xinchang People’s Hospital, Xinchang 312500, China)

OBJECTIVE To study the impact of the flowering on the content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride in Leonuri Herba. METHODS The samples of Leonuri Herba were harvested in different harvest period in Xinchang province. The content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride in Leonuri Herba was determined according to pharmacopoeia methods. RESULTS In the flowering period, the content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride kept decreasing. CONCLUSION Flowering had a great impact on the content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride in Leonuri Herba, thus in the end of flowering period, Leonuri Herba cann’t be used as medicine.

Leonuri Herba; stachydrine hydrochloride; leonurine hydrochloride; quality of medicine

R284.1；R917.101

B

1007-7693(2013)10-1077-05

2013-03-05

黃健，女，主管中藥師 Tel: (0575)86022082 E-mail: 2213726815@qq.com