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        延胡索加工炮制一體化飲片與傳統(tǒng)炮制飲片鎮(zhèn)痛作用比較

        2013-12-01 07:00:00楊毅孫乙銘徐建中俞旭平浙江省中藥研究所杭州310023
        中國現(xiàn)代應用藥學 2013年10期
        關鍵詞:扭體延胡索飲片

        楊毅,孫乙銘,徐建中,俞旭平(浙江省中藥研究所,杭州 310023)

        延胡索為罌粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥塊莖,別名元胡。延胡索是常用理氣止痛藥,具活血化淤、行氣止痛功效,臨床常用于胸脅、脘腹疼痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、產(chǎn)后淤阻、跌打腫痛等證[1]。延胡索乙素為延胡索主要化學成分之一,具有顯著的鎮(zhèn)痛作用?,F(xiàn)代藥理實驗亦證明其有鎮(zhèn)痛作用[2]。目前臨床用延胡索多為炮制品;其傳統(tǒng)的加工炮制分為 2個階段,即產(chǎn)地加工和入藥前炮制。

        傳統(tǒng)的延胡索加工炮制方法不僅工藝繁瑣,實際應用費時費力,其質(zhì)量也不穩(wěn)定。而且,傳統(tǒng)延胡索飲片呈塊狀或粒狀,質(zhì)地堅硬,有效成分煎出率低。將延胡索的產(chǎn)地加工與炮制結合起來的一體化加工技術,生產(chǎn)出的延胡索飲片不僅能提高延胡索藥材的質(zhì)量,還能減少藥材中有效成分的流失。經(jīng)檢測,加工炮制一體化的延胡索飲片中延胡索乙素的含量高出藥典 50%以上。加工炮制一體化延胡索飲片不僅質(zhì)量穩(wěn)定,品質(zhì)得到了保證,同時也為中藥生產(chǎn)企業(yè)減少了能源的消耗,提高其生產(chǎn)效率,增加產(chǎn)業(yè)效益。

        本研究利用扭體法、熱板法和熱水縮尾法比較加工炮制一體化延胡索飲片與傳統(tǒng)炮制延胡索飲片的鎮(zhèn)痛作用的差異性,為延胡索的加工炮制一體化工藝技術提供科學依據(jù)。

        1 儀器與材料

        1.1 動物

        ICR小鼠,♀♂皆用,體質(zhì)量18~22 g,由浙江省實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK(浙)2003-0001。

        1.2 試劑

        0.6 %醋酸溶液,由中國杭州化學試劑有限公司生產(chǎn),生產(chǎn)許可證:XK13-201-00067。阿司匹林腸溶片(德國拜耳公司,批號:20110978,規(guī)格:0.1 g)。

        1.3 儀器

        APT457A型工業(yè)電子天平(深圳安普特電子科技有限公司);ACS-6型電子天平(花潮公司);YJ501S型超級恒溫浴槽(上海躍進醫(yī)療器械廠);秒表(上海秒表廠)。

        1.4 試驗樣品制備

        試驗樣品制備見表1。

        延胡索乙素測定方法根據(jù)孫乙銘等[3]的文獻方法進行測定。給藥樣品采用稱取不同延胡索樣品50 g浸泡1 h,水煎煮2次,第1煎加入400 mL水,第2煎加入250 mL水,2次煎煮微沸25 min,過濾,合并濾液,水浴濃縮。制成水煎液1 g·mL-1。

        2 方法與結果

        2.1 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗

        取體質(zhì)量18~22 g小鼠(♀♂各半)隨機分為5組,每組16只,分別為延胡索加工炮制一體化樣品1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品 2、陽性對照組及生理鹽水組。灌胃給藥3 d,給藥劑量為 1 0 g·kg-1。末次給藥前禁食 4 h,灌胃 30 min后腹腔注射 0.6%醋酸溶液,劑量為0.1 mL·(10 g)-1,觀察并記錄 2 0 min 內(nèi)出現(xiàn)扭體反應的動物數(shù)及其平均扭體次數(shù)(以后肢伸展,身體扭曲拉長,腹肌內(nèi)凹,間歇性收縮為痛指標)。結果見表2。

        表1 試驗樣品制備Tab 1 The preparation of samples

        表2 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠醋酸扭體反應的影響(n=16, s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

        表2 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠醋酸扭體反應的影響(n=16, s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

        注:與生理鹽水組相比,1)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.01

        組 別 扭體潛伏期/s 扭體次數(shù)(20 min)/次 抑 制率/%樣品 1 547.40±347.48 5.33±4.351) 63.3樣品 2 473.47±340.48 9.33±8.62 35.8樣品 3 518.13±289.17 11.47±7.85 21.1陽性對照組 551.56±298.59 4.42±4.591) 69.6生理鹽水組 428.13±249.21 14.53±11.98 -

        由表2可見,3種延胡索醋制樣品和陽性對照組均可使醋酸所致小鼠扭體反應的潛伏期延長,20 min內(nèi)扭體次數(shù)減少,均具有鎮(zhèn)痛作用。與生理鹽水組相比,在醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應試驗中,3種炮制延胡索,鎮(zhèn)痛率分別達到63.3%,35.8%,21.1%和69.6%。尤其樣品1抑制率達到63.3%,在20 min內(nèi)樣品1和陽性對照組扭體次數(shù)顯著減少(P<0.01)。

        2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗

        在室溫為 13~18 ℃的環(huán)境下,取體質(zhì)量 18~22 g小鼠,♀,在恒溫水浴(55±0.5)℃條件下,依次測量各小鼠的痛閾值(用秒表記錄,自小鼠投入熱浴板中至出現(xiàn)舔后足的反應時間為痛閾指標。選擇痛反應潛伏期在5~60 s的小鼠為合格鼠,剔除過敏(<5 s)或反應遲鈍(>60 s)的個體。取合格小鼠,按痛閾時間分為 5組,分別為延胡索加工炮制一體化樣品1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品2、陽性對照組及生理鹽水組。每組22只,給藥3 d后進行實驗。末次給藥前將小鼠置于(55±0.5)℃的熱板上,首先測定5個實驗組的基礎潛伏期,給藥前測2次(間隔10 min),取其平均值,然后給對照組用生理鹽水灌胃,其余4個給藥組分別用對應樣品灌胃,測定各組在給藥后30,60,90,120 min舔足潛伏期的變化。超過90 s無反應者,潛伏期按90 s計。結果見表3。

        表3 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱板測試舔足反應潛伏期的影響(n=22, s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

        表3 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱板測試舔足反應潛伏期的影響(n=22, s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

        注:與生理鹽水組相比較,1)P<0.05, 2)P<0.01;與樣品3組比較,3)P<0.05Notes: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01; compared with sample 3 group, 3)P<0.05

        組 別 基礎潛伏期/s 給藥后各時間段的舔足潛伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min樣品 1 33.55±14.73 36.35±19.49 34.13±22.712)3) 41.30±18.812) 32.39±19.571)樣品 2 33.73±12.47 34.43±22.56 30.86±18.682)3) 34.62±19.75 30.38±15.251)樣品 3 33.23±17.01 29.86±15.81 19.10±11.92 30.38±24.45 21.57±20.05陽性對照組 33.83±15.23 35.90±17.56 37.56±15.632) 48.68±23.562) 30.56±18.671)生理鹽水組 33.45±12.42 27.27±16.69 15.64±7.13 20.32±10.54 20.73±10.42

        表3結果表明,與生理鹽水組相比,3種炮制延胡索給藥組與陽性對照組在給藥60 min以后均具有提高小鼠熱刺激痛閾的作用。給藥 120 min后,樣品1、樣品2和陽性組仍具有明顯鎮(zhèn)痛作用。樣品3在給藥后30,60,90,120 min痛閾值有所延長,但與生理鹽水組比較差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        2.3 熱水縮尾法疼痛模型的制備及給藥方案[4]

        取小鼠,♀♂兼用,將小鼠尾尖端3 cm浸入 48 ℃恒溫水浴鍋中,記錄其縮尾的潛伏期為痛閾指標,測2次(間隔10 min),求其平均值,取潛伏期是5~30 s的為合格鼠,剔除過敏(<5 s)或反應遲鈍(>30 s)的個體。24 h后進行實驗,取合格小鼠50只,分別為延胡索加工炮制一體化樣品 1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品 2、陽性對照組及生理鹽水組,每組小鼠10只。給藥3 d后進行實驗。末次給藥前將小鼠尾尖端3 cm浸入48 ℃的恒溫水浴鍋中,測定5個實驗組的基礎潛伏期,測兩2次(間隔10 min),取其平均值,然后給對照組用生理鹽水灌胃,其余4個給藥組分別用對應樣品灌胃,測定各組30,60,90,120 min 小鼠的縮尾潛伏期的變化,超過60 s無反應者,痛閾按60 s計。結果見表4和表5。

        表4 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾法疼痛潛伏期的影響(n=10, s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

        表4 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾法疼痛潛伏期的影響(n=10, s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

        注:與生理鹽水組相比,1)P<0.05,2)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01

        組 別 基礎潛伏期/s 給藥后各時間段的疼痛潛伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min樣品 1 6.94±0.44 8.86±1.10 10.23±0.962) 8.85±0.332) 9.85±0.782)樣品 2 6.88±0.43 8.25±0.76 8.69±0.951) 7.68±0.641) 8.55±0.561)樣品 3 6.79±0.48 8.37±0.86 8.65±0.651) 7.54±1.12 8.54±1.36陽性對照組 6.82±0.51 9.25±1.121) 9.58±1.252) 10.28±2.682) 9.78±1.022)生理鹽水組 6.85±0.46 7.98±0.88 7.68±0.65 6.95±0.54 7.54±0.98

        表5 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾實驗中的痛閾提高率Tab 5 Analgesic ratio of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs by tail-immersion test

        表4與表5結果表明,與生理鹽水組相比,陽性對照組在給藥30 min后具有顯著提高小鼠疼痛痛閾的時間,3種炮制延胡索給藥組給藥60 min以后也均具有提高小鼠疼痛痛閾的時間。給藥120 min后,樣品1、樣品2和陽性組仍具有顯著提高小鼠疼痛痛閾的時間。樣品3在給藥后30,60,90,120 min痛閾值有所延長,其中只有在給藥60 min痛閾延長有顯著性差異,其他3個時間點與生理鹽水組比較差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。表5的結果表明,3種炮制延胡索給藥組和陽性組都能提高小鼠疼痛的痛閾時間,尤其是樣品1在給藥60 min后痛閾提高百分率分別為33.20%,27.34%,30.64%,其中60 min和120 min的痛閾提高率還高于陽性組。數(shù)據(jù)表明延胡索加工炮制一體化樣品的痛閾提高率均高于傳統(tǒng)炮制延胡索樣品,說明延胡索加工炮制一體化樣品延胡索優(yōu)于傳統(tǒng)炮制的加工方法。

        3 討論

        將延胡索的產(chǎn)地加工與炮制結合起來的一體化加工技術,不僅能提高延胡索藥材的質(zhì)量,減少藥材中有效成分的流失,使其質(zhì)量穩(wěn)定,品質(zhì)得到了保證。從延胡索乙素檢測結果看,加工炮制一體化延胡索的延胡索乙素含量遠高于傳統(tǒng)炮制延胡索;且扭體法、熱板法、熱水縮尾法都證實了加工炮制一體化延胡索與傳統(tǒng)醋制均有鎮(zhèn)痛作用,加工炮制一體化延胡索的鎮(zhèn)痛作用比傳統(tǒng)醋制延胡索的鎮(zhèn)痛作用更強。說明延胡索加工炮制一體化技術較優(yōu),該技術同時也為中藥生產(chǎn)企業(yè)減少了能源的消耗,提高其生產(chǎn)效率,增加產(chǎn)業(yè)效益。本研究試驗為延胡索的加工炮制一體化提供科學依據(jù)。

        [1]Ch.P(2010)VolⅠ(中國藥典2010年版.一部)[S]. 2010: 130.

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