顧曉荔 孟躍進(jìn) 廖予妹 胡桂明 任曉爽

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院 鄭州 450014

SOX2是一種干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎干細(xì)胞全能性發(fā)育、器官形成及神經(jīng)分化等方面起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與其異常的表達(dá)相關(guān)。然而關(guān)于SOX2在宮頸癌中的表達(dá)研究較少，本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)SOX2蛋白在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)合主要的臨床病例參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討其與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2011－07—2012－06我院婦產(chǎn)科住院初治的150例子宮切除患者的標(biāo)本，其中宮頸鱗癌60例，年齡30～69歲，平均43.2歲。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)臨床分期:Ⅰ期33例，Ⅱ期17例，Ⅲ期10例。病理分級(jí):高分化28例，中分化17例，低分化15例。有淋巴轉(zhuǎn)移13例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移47例。術(shù)前均未行化療和放療。宮頸上皮內(nèi)瘤變CIN組織70例和因子宮肌瘤等良性病變行子宮切除的正常宮頸組織20例。所取組織標(biāo)本均由2位病理學(xué)專家檢查確診，臨床及病理資料完整。

1.2 免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)SOX2蛋白表達(dá) 將組織標(biāo)本常規(guī)脫水、石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，脫蠟至水，再按照免疫組化SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行免疫組化染色，一抗工作液濃度以1:200稀釋，以0.1 MPBS代替一抗作陰性對(duì)照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，常規(guī)脫水透明后中性樹(shù)膠封片。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) SOX2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈現(xiàn)棕褐色顆粒。隨機(jī)選取至少10個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野(從上至下，從左至右)計(jì)數(shù)100個(gè)完整腫瘤細(xì)胞，判定標(biāo)準(zhǔn):①以著色細(xì)胞的百分率記為0～3分，(其中無(wú)著色為0分，＜25%為1分，26% ～50%為2分，50%以上為3分);②以著色的深淺記為0～3分，(其中不著色為0分，輕度著色為1分，中度為2分，重度為3分)。以①、②分之和判定結(jié)果:陰性(－):0分;弱陽(yáng)性(+):1～2分;中度陽(yáng)性(++):3～4分;強(qiáng)陽(yáng)性(+++):5～6分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，所分析資料均為計(jì)數(shù)資料，各組間比較使用x2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SOX2在不同宮頸組織中的表達(dá)水平 結(jié)果顯示:在60例宮頸鱗癌組織中，41例SOX2蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為68.3%(41/60)。在70例CIN中，36例呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率51.4%(36/70)，而在20例正常的宮頸組織中，僅有7例呈弱陽(yáng)性表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)率為35%(7/20)。三組間相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03)。進(jìn)一步比較得出SOX2在正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于CIN中的陽(yáng)性表達(dá)率(x2=4.4，P=0.044)和宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(x2=6.944，P=0.016)，而CIN與宮頸鱗癌組織中SOX2的陽(yáng)性表達(dá)率相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.674，P=0.464)。詳見(jiàn)表 1。

表1 SOX2在不同宮頸組織中的表達(dá)情況

1.2 SOX2在宮頸鱗癌組織中的表達(dá) 宮頸鱗癌組織中SOX2蛋白陽(yáng)性顆粒位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈現(xiàn)棕褐色顆粒，而且隨著細(xì)胞分化程度的降低，其陽(yáng)性顆粒明顯增多，染色明顯加深。高、中、低分化宮頸鱗癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為53.6%、70.6%和93.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.027)。I期宮頸鱗癌組織中SOX2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于II、III期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)。有淋巴轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中SOX2的陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌組織，但兩組間相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.194)。詳見(jiàn)表2

表2 SOX2在宮頸鱗癌中的表達(dá)水平

3 討論

SOX基因是具有高度保守的HMGboxDNA結(jié)合域的一類SRY相關(guān)基因家族，能夠編碼一些參與多種發(fā)育過(guò)程的調(diào)控，如決定性別、神經(jīng)發(fā)育、多種血細(xì)胞生成等多種組織器官發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子［1－2］。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，許多疾病的形成與SOX基因的突變關(guān)系密切。SOX2作為SOX家族中的一員，是一種干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，在早期的胚胎的發(fā)生、器官的形成以及神經(jīng)的分化，干細(xì)胞的研究中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)SOX2參與了多種腫瘤的形成，如卵巢癌［3］、肺癌［4］、乳腺癌［5］等。陳清江［6］等在對(duì)食管癌中SOX2的表達(dá)研究中發(fā)現(xiàn)，SOX2的陽(yáng)性表達(dá)在食管鱗癌組織，與正常食管的黏膜上皮細(xì)胞的表達(dá)差異顯著，其陽(yáng)性表達(dá)率為56.6%，且腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性顆粒在多在胞漿，呈現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示:SOX2在正常宮頸組織、CIN組織及宮頸鱗癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為35%、61.4%、68.3%其陽(yáng)性表達(dá)率是逐漸增加的，三組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.016，P＜0.05)。SOX2蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、組織分化程度關(guān)系密切(P＜0.05)，但在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。SOX2蛋白的陽(yáng)性顆粒在正常的宮頸組織中主要表達(dá)與基底細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)和接近基底層的棘細(xì)胞，宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性顆粒多見(jiàn)于癌細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)且染色明顯，呈棕褐色，且與分化程度相關(guān)，分化程度越低，陽(yáng)性顆粒的數(shù)量越多，染色越強(qiáng)。SOX2在干細(xì)胞的全能性及自我更新方面起著重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)SOX2能夠?qū)?xì)胞的命運(yùn)起到調(diào)控的作用，在細(xì)胞多潛能性上發(fā)揮重要的作用，所以其陽(yáng)性表達(dá)的增加可能是與宮頸癌的分化程度有關(guān)，維持了細(xì)胞的多潛能性，抑制細(xì)胞的成熟分化，從而抑制其向成熟細(xì)胞分化;由此可見(jiàn)SOX2陽(yáng)性表達(dá)的增強(qiáng)有可能成為子宮頸癌尤其是中低分化的癌的惡性進(jìn)展的一個(gè)原因。因此SOX2有望成為宮頸癌的臨床診治療的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

通過(guò)本研究得出SOX2蛋白的過(guò)表達(dá)可能是導(dǎo)致宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制之一，但SOX2的確切作用機(jī)制目前尚不完全清楚。希望通過(guò)對(duì)SOX2基因的深入、廣泛的研究，進(jìn)一步了解其在宮頸鱗癌的作用機(jī)制，為宮頸癌的早期診斷、臨床治療及預(yù)后評(píng)估等提供一定的理論依據(jù)。

［1］袁虎，王秋菊，韓東一.SOX家族基因的功能及其研究進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·遺傳學(xué)分冊(cè)，2005，28(6):332 －333.

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(收稿 2012－10－02)