烏力吉白乙，湯媛宇，王宏偉

（1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院病歷科，內(nèi)蒙古通遼028000；2.內(nèi)蒙古通遼市科爾沁區(qū)第一人民醫(yī)院病歷科 028000）

胃癌是臨床上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，而癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移則是其治療的主要難點(diǎn)。近年有研究［1］顯示，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1與胃癌細(xì)胞的各種生物學(xué)行為具有顯著的相關(guān)性，同時(shí)可能影響細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的表達(dá)水平，而后者也與癌細(xì)胞的分化、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［2］。本次研究選取38例胃癌患者的胃癌組織與38例正常胃黏膜組織，觀察胃癌組織中KISS-1的表達(dá)水平與胃癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的作用，旨在探討其對(duì)胃癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的影響，為今后胃癌的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年10月至2012年6月在通遼市科爾沁區(qū)第一人民醫(yī)院進(jìn)行胃癌根治術(shù)的38例胃癌患者手術(shù)后預(yù)留的新鮮胃癌組織標(biāo)本，手術(shù)前均未接受化學(xué)或放射治療。其中，男23例，女15例，年齡34～79歲，平均（58.6±11.2）歲。分化程度：分化型癌14例，未分化癌24例；浸潤(rùn)深度：T1～T2（未侵及肌層）27例，T3～T4（侵及肌層）11例；無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者25例，有淋巴轉(zhuǎn)移者13例。收集同期胃潰瘍手術(shù)切除后經(jīng)病理檢查確認(rèn)的正常胃黏膜組織38例。

1.2 KISS-1檢測(cè) 每份標(biāo)本取0.1g加入總RNA抽提試劑（TRIzol）中充分裂解，分離核酸與核蛋白，按TRIzol RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行后續(xù)步驟，用分光光度計(jì)測(cè)定所得的總RNA的濃度及純度。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）一步法進(jìn)行基因檢測(cè)，以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)KISS-1蛋白表達(dá)量。TRIzol和RT-PCR試劑盒均購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。

1.3 ECM檢測(cè) 所有標(biāo)本均以10%甲醛固定，采用石蠟包埋切片。鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法即SP法（streptavidin perosidase）染色按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以磷酸緩沖液（PBS）替代一抗作為陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照。層粘連蛋白（LN）及Ⅳ型膠原根據(jù)顯色范圍和腺體周邊完整程度歸為連續(xù)線狀型、間斷線狀型、碎片型和完全缺失型。纖維連接蛋白（FN）則與陰性對(duì)照進(jìn)行對(duì)比分析，有陽(yáng)性產(chǎn)物沉積則為陽(yáng)性。胃癌細(xì)胞、基底膜和間質(zhì)中FN表達(dá)分別記為細(xì)胞FN、基膜FN及間質(zhì)FN。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織中KISS-1表達(dá)水平 KISS-1mRNA在胃癌組織中的陽(yáng)性率為56.2%，表達(dá)水平為（0.57±0.06），其在正常胃黏膜組織中的陽(yáng)性率為87.1%，表達(dá)水平為（0.83±0.02）。顯示KISS-1在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達(dá)水平，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同時(shí)，KISS-1在不同浸潤(rùn)深度及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)量亦有顯著性差異（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 KISS-1對(duì)ECM表達(dá)的作用 此外，在不同KISS-1陽(yáng)性水平下，ECM的主要成分：LN、Ⅳ型膠原及FN的表達(dá)情況也表現(xiàn)出明顯差異，KISS-1表達(dá)與ECM表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)。不同KISS-1陽(yáng)性水平下ECM表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 KISS-1在不同病理學(xué)特征組中的表達(dá)水平比較

表2 不同KISS-1陽(yáng)性水平下ECM的表達(dá)水平比較［n（%）］

3 討 論

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1是Kostadima等［3］在1996年從人黑色素瘤細(xì)胞株中率先發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。KISS-1在正常組織中有廣泛表達(dá)，而其表達(dá)缺失被認(rèn)為與乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤細(xì)胞的局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等主要生物學(xué)行為具有顯著相關(guān)性［4］。

本研究顯示，KISS-1在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達(dá)水平，表明KISS-1的表達(dá)水平可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及癌細(xì)胞的生物學(xué)行為具有高度相關(guān)性，KISS-1高表達(dá)時(shí)可抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，低表達(dá)時(shí)則促使腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［5］。同時(shí)，在不同浸潤(rùn)深度和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，KISS-1的表達(dá)也顯示出明顯差異。KISS-1表達(dá)的陽(yáng)性率越低，胃癌細(xì)胞的侵犯越深，且KISS-1在存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，顯示KISS-1也影響了胃癌細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移［6］。其作用機(jī)制可能在于KISS-1基因通過(guò)降低細(xì)胞質(zhì)內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）的活性，減少其與基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）啟動(dòng)子的結(jié)合，從而降低癌細(xì)胞的浸潤(rùn)性和機(jī)動(dòng)性［7-8］。

一般認(rèn)為，腫瘤的實(shí)質(zhì)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)起決定作用，后者又反過(guò)來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、極性及運(yùn)動(dòng)，影響其局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等主要生物學(xué)行為［9］。LN、Ⅳ型膠原及FN是ECM的主要成分。研究證實(shí)，正常胃組織中，LN及Ⅳ型膠原表現(xiàn)為連續(xù)線型分布，在胃癌組織中則表現(xiàn)為斷裂缺損。此外，在正常胃組織中各種基膜都存在完整的FN分布，而胃癌組織中細(xì)胞FN和基膜FN表達(dá)呈明顯下降［10-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同KISS-1陽(yáng)性水平下，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達(dá)水平具有明顯差異，KISS-1的表達(dá)水平越高，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達(dá)水平也相應(yīng)提高。提示KISS-1可通過(guò)對(duì)ECM表達(dá)的影響間接作用于腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程［12］。

［1］Mitchell DC，Abdelrahin M，Weng JS，et al.Regulation of KISS-1metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct in teraction of t ranscription factors act ivator protein-2alpha and specificity protein-1［J］.J Biol Chem，2006，281（1）：51-58.

［2］Hanna E，Quick J，Libutti SK.The tumourmicroenvironment：anovel target for cancer therapy［J］.Oral Dis，2009，15（1）：8-17.

［3］Kostadima L，Pentheroudak is G，Pavlidis N.The missing kiss of life：transcriptional activity of them etastas is suppressor gene KISS-1in early breast cancer［J］.Anticancer Res，2007，27（14）：2499-2504.

［4］呂志強(qiáng)，丁厚中.KISS-1基因與惡性腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2007，17（5）：457-460.

［5］劉愛(ài)東.KISS-1在胃癌中的表達(dá)及意義［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20（19）：2354-2355.

［6］何新陽(yáng)，梁偉，王志華，等.ECM-1和VEGF在胃癌中的表達(dá)［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（1）：25-28.

［7］Lee KH，Kim JR.Kiss-I suppresses MMP-9expression by activating p38MAP kinase in human stomach cancer［J］.Oncol Res，2009，18（2）：107-116.

［8］杜華貞，張延新，李維山，等.KISS-1與TIMP-1在胃癌中的表達(dá)及臨床病理意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008，24（3）：374-376.

［9］黃海力，王盂薇.腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.生物技術(shù)通訊，2006，17（1）：84-87.

［10］Rao JS，Bhoopathip，Chetty C，et al.MMP-9short inteffering RNA induced senescence resulting in inhibition of medulloblastoma growth via p16（INK4a）and mitogenactivated proteinkinase pathway［J］.Cancer Res，2007，67（10）：4956-496.

［11］姚宏亮，楊竹林，李永國(guó)，等.轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1和KAI-1在胃癌組織中表達(dá)的原位雜交研究［J］.中華胃腸外科雜志，2007，10（3）：274-277.

［12］Dhar DK，Naora H，Kubota H，et al.Downregulation of Kiss-1expression is responsible for tumor invasion and worse prognosis in gastric carcinoma［J］.Int J Cancer，2004，111（6）：868-872.