郭培果

貴州省貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550005

高效液相色譜法測定通淋舒片中槲皮素的含量

郭培果

貴州省貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550005

目的：建立測定通淋舒片中槲皮素含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Thermo C18柱，流動相為甲醇－0.4%磷酸溶液（43∶57），流速為1.0mL／min，檢測波長360nm，進(jìn)樣量為10μL，柱溫為30℃。結(jié)果：槲皮素進(jìn)樣量在81.25～650.00μg（r＝0.9999）范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好；平均加樣回收率為99.20%，RSD為1.05%（n＝6）。結(jié)論：該方法快速簡便、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好、可用于通淋舒片中槲皮素的含量測定。

通淋舒片；槲皮素；高效液相色譜法；含量測定

通淋舒片是由 《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》內(nèi)科·腎系分冊收載的“通淋舒顆?！保踂S－10413（ZD－0413）－2002］［1］改劑型而成，由四季紅、車前草等中藥組成，具有清熱解毒，利尿通淋之功效。用于濕熱蘊結(jié)所致淋證的排尿不暢，淋漓澀痛；脾腎陽虛所致的腰膝酸痛，肢冷畏寒，失眠健忘，頭暈耳鳴，疲乏無力等癥。為了更好的控制藥品質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)［1～6］，進(jìn)行了色譜條件優(yōu)化和方法學(xué)考察。方法學(xué)研究表明，該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－10ATVP高效液相色譜儀；SPD－10AVP紫外檢測器；威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站（WML－2010）；HT－230A色譜柱恒溫箱；UV－1750型紫外可見分光光度計；島津AUW120D型萬分之一電子天平。

1.2 試藥 槲皮素對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號為100081－200907，供含量測定用）；通淋舒片由貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司研制；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 Thermo C18（250mm× 4.6mm，5μm）色譜柱；甲醇－0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；流速為1.0mL／min；檢測波長為360nm；進(jìn)樣量10μL；柱溫為30℃。理論板數(shù)按槲皮素峰計＞3000；槲皮素其它雜質(zhì)峰的分離度R＞1.5，拖尾因子（T）為0.99。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品16.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得槲皮素對照品貯備液（每1mL含0.3250mg）。精密吸取2mL對照品貯備液，置20mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得槲皮素對照品溶液 （含槲皮素32.50μg／mL）。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品，除去包衣，打粉，混勻，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇－鹽酸－水（7∶1∶2）混合液20mL，稱定重量，加熱回流2.5h，取出，冷卻，再稱定重量，用甲醇－鹽酸－水（7∶1∶2）混合液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按通淋舒片的制備工藝及制法，制備缺四季紅的陰性樣品；取約1g，精密稱定，置具塞錐形中，按“2.2.2”的制備方法制備缺四季紅陰性對照溶液。

2.3 干擾性試驗的考察 取對照品溶液、供試品溶液和缺四季紅的陰性對照溶液，各10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并進(jìn)行分析。由圖1可知，槲皮素峰與雜質(zhì)峰完全分離，而缺四季紅的陰性對照液在與對照品相同的位置，無相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸槲皮素對照品貯備液 （濃度為0.3250mg／m L）0.25、0.5、0.75、1、1.5、2m l置10m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含槲皮素為8.125、16.250、24.375、32.500、40.63、48.750、65.000μg／mL的溶液。分別吸取10μL，測定。結(jié)果表明，槲皮素在進(jìn)樣量為81.25～650.00μg（r＝0.9999）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。以進(jìn)樣量 （X）對峰面積 （Y）進(jìn)行回歸，得回歸方程為：Y＝1852.3658X＋3.8827，r＝0.9999。

2.5 精密度試驗 精密吸取濃度為32.50μg／mL槲皮素對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積，槲皮素峰面的RSD為0.02%，表明具有良好的精密度。

2.6 重復(fù)性試驗 取通淋舒片樣品6份，每份約1g，精密稱定，按“2.2.2”的方法制備供試品溶液，分別吸取供試

品溶液10μL注入高效液相色譜儀中測定含量，結(jié)果槲皮素的平均含量為0.6526mg／g，RSD為0.53%，說明本法重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品1g，按“2.2.2”的方法制備成供試品溶液，室溫下放置，分別于0、1、2、4、6、8、10h進(jìn)樣測定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.45%，表明室溫下10h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品 （槲皮素含量0.6526mg／g）6份，每份約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，各精密加入10mL槲皮素對照品溶液 （濃度為32.50μg／mL），按上述樣品制備方法和色譜條件，制備供試液并注入高效液相色譜儀，測定，計算，結(jié)果平均回收率為99.20%，RSD＝1.05%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品含量測定 取本品10批，按“2.2.2”的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定本品的含量，每批取2個樣品平行測試，計算，結(jié)果各批次含測結(jié)果的RSD均小于2%，見下表。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 波長的優(yōu)選 參照 《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版 “頭花蓼”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) “含量測定”項下的檢測波長和國家藥品監(jiān)督管理局 《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》內(nèi)科·腎系分冊收載的 “通淋舒顆?！睒?biāo)準(zhǔn) “含量測定”項下的檢測波長，同時結(jié)合本品紫外掃描圖 （取槲皮素對照品適量，加甲醇稀釋，掃描，結(jié)果槲皮素在359.0nm處有最大吸收），確定本品的檢測波長為360nm［1、2］。

3.2 提取溶劑的優(yōu)選 試驗中我們曾分別對甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、甲醇－鹽酸－水 （7∶1∶2）混合液［1、2］、甲醇－25%鹽酸溶液 （4∶1）混合液提取用溶媒進(jìn)行比較，結(jié)果以甲醇－鹽酸－水 （7∶1∶2）混合液提取液效果最好，故確定以甲醇－鹽酸－水 （7∶1∶2）混合液為溶劑。

3.3 提取方法的優(yōu)選 參照文獻(xiàn)，以甲醇－鹽酸－水（7∶1∶2）的混合液為提取溶媒，考察了超聲處理和回流提取等不同的提取方法，結(jié)果采用回流提取槲皮素含量較高，故將其作為本品的提取方法。同時對不同的回流提取時間1、1.5、2、2.5、3h進(jìn)行了考察，結(jié)果回流提取2.5h效果最佳。

3.4 流動相及流動相比例的優(yōu)選 本研究曾對甲醇－0.4%磷酸溶液、甲醇－水－甲酸、甲醇－0.2%磷酸溶液等多個流動相系統(tǒng)進(jìn)行比較。結(jié)果表明：流動相以甲醇－0.4%磷酸溶液較好。并考察了甲醇－0.4%磷酸溶液不同比例（41∶59、43∶57、45∶55），結(jié)果槲皮素峰峰與其它雜質(zhì)峰能較好分離，無明顯差異，最終確定流動相為甲醇－0.4%磷酸溶液（43∶57）。

［1］國家藥品監(jiān)督管理局.《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》內(nèi)科·腎系分冊 ［S］，2002：58.

［2］貴州省藥品監(jiān)督管理局編. 《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》［M］.貴州科技出版社，2003.147.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2010年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：198，204，849，1079，1080.

［4］陳秋晨，王琳，劉振.HPLC測定四季紅藥材中槲皮素的含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2008，24（4）：365－367.

［5］李雨生，王祥培，萬德光，等.HPLC法測定頭花蓼中槲皮素與山奈酚的含量［J］.中藥與臨床，2011，2（3）：24－26.

［6］蘇赤.高效液相色譜法測定乳舒片中槲皮素含量 ［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30（5）：642－643.

R283.6

A

1007－8517（2013）13－0013－02

2013.04.17）

郭培果 （1978～），男，布依族，執(zhí)業(yè)藥師。

郭培果，執(zhí)業(yè)藥師，Tel：0851－5400121－8804，E－mail：guozdq＿888＠163.com