黃金長，張功亮，郭廣秀，王建，彭芳，陳青

(贛州市人民醫(yī)院病理科，江西贛州341000)

細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價值

黃金長，張功亮，郭廣秀，王建，彭芳，陳青

(贛州市人民醫(yī)院病理科，江西贛州341000)

目的探討細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理診斷中的意義。方法收集有異型細(xì)胞及癌細(xì)胞的漿膜腔積液50例，進(jìn)行離心涂片、細(xì)胞塊切片HE染色，并進(jìn)行CK、CK7、CK20、CDX-2、MC、Calretinin、Vimentin、TTF-1、CA125等免疫細(xì)胞化學(xué)染色，選擇性標(biāo)記。結(jié)果常規(guī)細(xì)胞涂片厚，背景不清晰；離心沉渣包埋切片細(xì)胞多而集中，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結(jié)構(gòu)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色效果較好，陽性定位準(zhǔn)確，可靠性高。結(jié)論細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，能提高胸腹水腫瘤細(xì)胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細(xì)胞來源有重要的價值。

胸腹水，細(xì)胞塊，石蠟包埋，免疫細(xì)胞化學(xué)染色

脫落細(xì)胞病檢是目前各級醫(yī)院病理科的一個工作重點及發(fā)展方向，其中胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查在制片及診斷技術(shù)上都存在很大困難[1]。對臨床送檢的胸腹水，國內(nèi)大部分醫(yī)院采用直接離心涂片法來做出診斷。但在實際應(yīng)用中，我們發(fā)現(xiàn)直接涂片法存在涂片厚，細(xì)胞重疊，結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞量少而陽性檢出率低等缺點[2，3]，很難鑒別腫瘤細(xì)胞及增生的間皮細(xì)胞，并且不能判斷瘤細(xì)胞的起源。通過對胸腹水離心涂片、細(xì)胞塊石蠟包埋切片及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)的結(jié)合，能提高胸腹水腫瘤細(xì)胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細(xì)胞來源有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 樣本收集我院臨床科室送檢的胸腹水共50例。其中胸水36例，腹水14例。男性20例，女性30例。年齡在35～81歲。臨床明確有器官占位15例，胸腹水原因待查22例。

1.2 試劑所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB顯色劑均購于福州邁新生物技術(shù)有限公司，按說明書進(jìn)行實驗步驟操作。

1.3 方法(1)收集患者胸腹水，取50～300ml進(jìn)行離心(2000r/min,10min)；(2)離心后棄去上清液，取少量沉淀做細(xì)胞涂片；(3)在沉淀中加入消化液體至30ml，震蕩2min后離心(2000r/min,10min)；(4)離心后棄去上清液，加入10%福爾馬林液體50ml，震蕩5～10min后離心(2000r/min,10min)；(5)離心后靜置2～3h，棄去福爾馬林液體，將沉淀用紙包裹進(jìn)行脫水；(6)常規(guī)石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，中性樹膠封固；(7)用CK(pan)、CK7、CK20、CDX-2、Calretinin、MC等抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，胸水加做TTF-1、腹水加做CA125，以試劑盒中提供的對照作為陰陽性對照，DAB顯色。

2 結(jié)果

檢測結(jié)果均由高年資的病理醫(yī)師閱片并復(fù)習(xí)臨床資料，診斷腺癌26例，鱗癌2例，非腫瘤性增生的間皮細(xì)胞22例(結(jié)果見表1)。與常規(guī)的涂片法相比較，該法制作的切片[蘇木精-伊紅染色]色彩鮮艷，背景清晰，收集到的細(xì)胞比常規(guī)涂片多，并且有一定的組織結(jié)構(gòu)(圖1)。根據(jù)不同的抗體，所表達(dá)的陽性部位與組織學(xué)相同，陽性顆粒呈棕黃色(圖2)。

圖1 腹水細(xì)胞塊石蠟包埋，H-E染色，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結(jié)構(gòu)(×100)

圖2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色(CK7)，陽性顆粒位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕黃色SP法(×100)

表1 50例胸腹水常規(guī)涂片及細(xì)胞塊石蠟包埋切片結(jié)果比較(n，%)

3 討論

胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查為病理科日常工作，但部分胸腹水受其它因素的影響，對作出正確的診斷帶來一定的困難，如炎性胸腹水增生或退變的間皮細(xì)胞與某些惡性細(xì)胞尤其是腺癌細(xì)胞在形態(tài)上易于混淆[4]；細(xì)胞涂片診斷惡性胸腹水，因涂片厚，常有大量紅細(xì)胞、炎性滲出物及黏液，細(xì)胞結(jié)構(gòu)重疊，背景不清晰，其敏感度只有50%～78%[5]；細(xì)胞塊石蠟包埋切片法收集的有核細(xì)胞多，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，與常規(guī)涂片法相結(jié)合，大大提高了細(xì)胞學(xué)的陽性檢出率[2]；同時，用細(xì)胞塊做免疫細(xì)胞化學(xué)染色，能做連續(xù)切片，可以多種抗體組合運用或?qū)δ骋惶囟?xì)胞的比較觀察，以滿足診斷的需要及對其組織來源進(jìn)行判別；如Calretinin、Vimentin、MC陽性多提示為增生的間皮細(xì)胞，CK7、TTF-1陽性多提示腫瘤細(xì)胞來源于肺，CK7、CA125陽性多提示腫瘤細(xì)胞來源于卵巢，CDX2、CK20陽性提示腫瘤細(xì)胞來源于胃腸道；但要說明的是，抗體的組織特異性并非絕對，多種抗體聯(lián)合進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色并設(shè)立對照有助于克服某些抗體表達(dá)意義不明確造成的困惑[6]。

[1]陳建華,陳中,丁博.血漿凝固法胸腹水細(xì)胞塊技術(shù)的臨床應(yīng)用[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2012,30(4):412-413.

[2]郭智俊,彭桂香,潘乃梁.胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規(guī)涂片法的對比[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志,2002,18(4):437.

[3]李琳,胡海,黃曉楠.胸腹水沉淀物制片方法介紹[J].診斷病理學(xué)雜志,2003,10(1):50.

[4]肖同浩,陳壽松,熊麗萍,等.提高胸腹水腫瘤細(xì)胞檢出率的方法探討[J].臨床軍醫(yī)雜志,2009,37(2):277-278.

[5]Queiroz C,Barral-Netto M,Bacchi CE.Characterizing subopulations of neoplastic cells in serous effusions.The role of immunocytochemistry[J].Acta Cytol,2001,45(1):18-22.

[6]毛瑛玉,楊敏,劉冬戈,等.細(xì)胞塊切片免疫細(xì)胞化學(xué)染色在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志,2009,38(8):547-550.

R446.8，R392.11

A

1674-1129(2013)05-0489-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.035