熊國亮

(江西省胸科醫(yī)院,江西南昌330006)

液基夾層集菌技術(shù)檢測痰標(biāo)本中抗酸桿菌對診斷肺結(jié)核的應(yīng)用價值

熊國亮

(江西省胸科醫(yī)院,江西南昌330006)

目的評價液基夾層集菌技術(shù)檢測抗酸桿菌對肺結(jié)核診斷的應(yīng)用價值。方法對134例肺結(jié)核病人晨痰標(biāo)本同時進(jìn)行液基夾層集菌技術(shù)與直接痰涂片進(jìn)行鏡檢檢測抗酸桿菌，比較兩種方法的陽性檢出率。選取10份抗酸桿菌陽性痰標(biāo)本，將處理后的消化痰液接種到羅氏培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，來評價液基夾層集菌技術(shù)的安全性。結(jié)果液基夾層集菌技術(shù)和直接痰涂片檢測抗酸桿菌的陽性率分別為28.4%(38/134)和16.4%(22/134)，檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義。安全性試驗發(fā)現(xiàn)經(jīng)消化液處理的痰標(biāo)本，培養(yǎng)8周后未見分枝桿菌生長。結(jié)論液基夾層集菌技術(shù)提高了肺結(jié)核病人痰標(biāo)本的陽性檢出率，且操作簡單、安全性高，是一種很有推廣價值的檢測方法。

肺結(jié)核；結(jié)核分枝桿菌；痰；集菌技術(shù)

結(jié)核病仍是嚴(yán)重威脅人類健康的重大慢性傳染病，現(xiàn)在每年有300萬人死于結(jié)核病，結(jié)核病在全球仍呈上升趨勢。結(jié)核病人的細(xì)菌學(xué)檢查，是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，傳統(tǒng)的結(jié)核病診斷直接涂片陽性率低，結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率相對高些但培養(yǎng)時間需要4～8周，難以用于指導(dǎo)臨床和治療[1-4]。近年來，一種基于液基薄層技術(shù)的結(jié)核診斷新技術(shù)—液基夾層集菌制片技術(shù)逐步發(fā)展起來，本文應(yīng)用該技術(shù)對臨床肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中的抗酸桿菌進(jìn)行了檢測，并評價其對肺結(jié)核診斷的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源134例肺結(jié)核病人均是2010年10月至2012年5月在江西省胸科醫(yī)院結(jié)核內(nèi)科住院的病人，其中男89例、女45例平均年齡46.7歲。所有病例的診斷依據(jù)為細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、胸部X線、生化等指標(biāo)，入選病例符合《結(jié)核病診斷指南》對肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)。囑病人留取晨痰3.0～5.0ml。

1.2 試劑和儀器液基夾層杯抗酸染色液試劑盒、夾層杯、消化液、TQ-12自動離心涂片機、KP-1快速干片機均為湖南天騎公司提供。

1.3 直接痰涂片法接《中國結(jié)核病防治規(guī)劃---痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》[5]進(jìn)行涂片、染色、鏡檢和記錄結(jié)果。

1.4 液基夾層集菌技術(shù)(1)標(biāo)本處理：將直接痰涂片鏡檢后所剩余痰液，加2倍體積消化液、置室溫約30min，其間搖動數(shù)次，待消化完全，用一次性塑料吸樣管移取消化好的痰液3.0 m l于夾層杯內(nèi)，放入TQ-12自動離心涂片機中4000r/min，離心8 min，傾去上清液、瀝干，將夾層杯放入KP-1快速干片機內(nèi)烘干固定。(2)染色鏡檢：在夾層杯中進(jìn)行抗酸染色完畢，自然干燥或烘干后，用專用取片針頂出夾層片，使涂菌面向下，置載玻片(已滴加中性樹膠)，用鑷子輕壓，防止氣泡，油鏡檢查。

1.5 液基夾層集菌技術(shù)安全性試驗取直接痰涂片陽性的消化完全痰標(biāo)本(消化時間15～20min)接種到羅氏培養(yǎng)基斜面上(覆蓋整個斜面)，進(jìn)行37℃培養(yǎng)，然后觀察分枝桿菌在培養(yǎng)基上生長情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法采用卡方檢驗對液基夾層集菌技術(shù)與直接痰涂片鏡檢法檢出的陽性率進(jìn)行比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 134例痰標(biāo)本用兩種方法進(jìn)行抗酸桿菌檢測結(jié)果液基夾層集菌技術(shù)陽性38例，陽性率28.4%；直接痰涂片鏡檢法陽性22例，陽性率16.4%。比較兩種方法的陽性檢出率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=66.5,P＜0.01)，見表1。

表1 液基夾層集菌技術(shù)與直接痰涂片鏡檢法檢出結(jié)果比較

2.2 10份直接痰涂片陽性的痰標(biāo)本經(jīng)完全消化后培養(yǎng)結(jié)果接種到羅氏培養(yǎng)基上，37℃，培養(yǎng)8周后均未見分枝桿菌的生長。

3 討論

液基夾層集菌技術(shù)是一種新型的集菌技術(shù)，與直接涂片法相比本質(zhì)上是一樣的，該技術(shù)的創(chuàng)新主要體現(xiàn)在離心集菌、消化液處理痰標(biāo)本方面，其主要特點是：一徹底消化了痰液、細(xì)胞，完全釋放出分枝桿菌；二是滅活了分枝桿菌，保障后期操作的生物安全，然后通過加熱、高速離心，將釋放出來已滅活的分枝桿菌集聚到彭氏夾層杯底部的基片上，再進(jìn)行染色鏡檢[6]。

本研究中液基夾層集菌技術(shù)對134例痰標(biāo)本的陽性檢出率為28.4%，而直接涂片法陽性率為16.4%，比較兩種方法的陽性檢出率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=66.5,P＜0.01)。直接涂片法中的22例陽性標(biāo)本在液基夾層集菌技術(shù)全為陽性；直接涂片法中的112例陰性標(biāo)本在液基夾層集菌技術(shù)檢測到16例標(biāo)本陽性，該16例陽性菌量有15例為1+，1例為2+，均沒有查出3+或以上菌含量，說明直接涂片法對菌量少的標(biāo)本存在漏檢情況。

消化處理液的主要成分為含氯消毒劑，其作用主要為消化痰液，釋放分枝桿菌，本方法檢測時，除消化外的其他步驟均在生物安全柜外進(jìn)行，故消化液的性能直接影響方法的安全性，本研究按照本實驗室分枝桿菌培養(yǎng)的液化時間將10例涂片陽性的痰標(biāo)本接種到羅氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)8周后均未見分枝桿菌的生長，說明后期整個操作流程可以滿足生物安全的要求。

綜上所述，液基夾層集菌技術(shù)提高了肺結(jié)核病人痰標(biāo)本的陽性檢出率，且操作簡單、安全性高，是一種很有推廣價值的檢測方法。

[1]王蘇民.結(jié)核病及其實驗技術(shù)的現(xiàn)狀與展望[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2001,24(1):71-72.

[2]Behr MA.Warren SA.Salamon H,et al.Transmission of Mycobacterium tuberculosis from patients smear-negative for acid-fast bacilli[J].Lancet,1999,353(9151):444-449.

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[4]Urbanczik R.Present position ofmicroscopy and of culture in diagnostic mycobacteriology[J].Zentralbl Balteriol Mikrobiol Hyg A, 1985,260(1):81-87.

[5]趙雁林,姜廣路.中國結(jié)核病防治規(guī)劃—痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2009:7-14.

[6]宋紅煥,季明,唐國鋒,等.液基夾層杯技術(shù)用于基層實驗室結(jié)核病診斷的可行性研究[J].中國防癆雜志,2012,34(7):441-444.

App lication value of liquid-based interlayer vessel technique in detection of acid-fast bacilli in the diagnosis of M ycobac-terium tuberculosis

XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo explore the value of detecting acid-fast bacilliby liquid-based interlayer vessel technique in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.MethodsA total of 134 cases ofmorning sputum specimens from pulmonary tuberculosis patientswere detected by liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod simultaneously.The positive rates of the twomethodswere compared.Ten acid-fast bacilli positive sputa were treated with digestion liquid,then the digestive sputa were inoculated at Roche medium and cultured at 37℃.The security of liquid-based interlayer vessel technique was evaluated by preparing the growth ofmycobacteria.ResultsThe positive rates of detecting acid-fastbacilli by using liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod were 28.4%and 16.4%,respectively.There was significant diference between the two methods(P＜0.05).The sputum samples treated with the digestive liquid were not found the growth ofmycobacteria after 8 weeks’culture.ConclusionThemethod of liquid-based interlayer vessel technique can improve the positive detection rate in TB patients.It is a simple and safemethod,and has extension value.

Pulmonary tuberculosis;Mycobacterium tuberculosis;Sputum;Liquid-based interlayer vessel technique

R446.5,R521,R446.19,R378.91+1

A

1674-1129(2013)05-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.002

江西省衛(wèi)生廳科技項目(編號：20091266)

熊國亮，男，1964年10月生，主任技師，主要從事結(jié)核病的細(xì)菌、免疫、分子生物學(xué)工作。