徐群飛，劉淑媛，張世錕，胡 意，萬臘根

(南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006)

·質量控制·

血液分析儀顯微鏡鏡檢規(guī)則的建立與驗證

徐群飛，劉淑媛，張世錕，胡 意，萬臘根

(南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006)

目的建立并驗證血液分析儀顯微鏡鏡檢規(guī)則。方法通過對500份血液標本同時用血液分析儀分析和顯微鏡鏡檢，參考12條顯微鏡鏡檢陽性標準確定各項設定的鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率和假陰性率。結果紅細胞系、白細胞系、血小板系及三系聯(lián)合的真陽性率為99.00%、96.49%、99.00%、95.90%；假陽性率分別為12.98%、10.78%、5.86%、1.43%；真陰性率為87.02%、89.22%、94.14%、98.57%；假陰性率分別為1.00%、3.51%、1.00%、4.10%。結論紅細胞、血小板及三系聯(lián)合陽性報警要求鏡檢可作為XE-2100D血液分析儀的鏡檢規(guī)則；而白細胞陽性報警要求鏡檢可起到一定的過篩作用，但必須通過設置白細胞系其它一些鏡檢規(guī)則來彌補其不足,防止漏診。

血液分析儀；顯微鏡檢查；鏡檢規(guī)則

Sysmex XE-2100D血液分析儀采用半導體激光的流式細胞技術結合細胞化學染色熒光技術對外周血細胞進行分類[1]，并可分析原始細胞、幼稚細胞，大大提高了工作效率，使檢驗工作人員從繁重的工作中解放出來，但對血細胞的形態(tài)和結構分析依然不夠完善，遇到可疑標本必須通過手工鏡檢來復查，而南昌大學第一附屬醫(yī)院為大型綜合性醫(yī)院，病種多而復雜，同時標本量又非常多，所以，高復檢率與臨床即時檢驗、快速檢驗的要求相矛盾，如何根據醫(yī)院的條件制定有效的復檢規(guī)則已受廣泛關注，針對本實驗室制定血細胞顯微鏡復查標準是非常有必要的[2]。同時根據CNASCL43[3]的要求，我們參考相關文獻[4]，建立了本實驗室全自動血液分析儀Sysmex XE-2100D作血細胞分析時需要作顯微鏡鏡檢的規(guī)則，并且我們對建立的鏡檢規(guī)則進行了驗證，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器儀器為日本東亞公司生產的SysmexXE-2100D全自動血液分析儀和Sysmex SP-1000i全自動血涂片制備儀；顯微鏡為Olympus CH-21雙筒光學顯微鏡。

1.2 試劑SysmexXE-2100D全自動血液分析儀原裝配套試劑及全血質控物；瑞氏染液，染液按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》的要求配制[5]。

1.3 XE-2100D作血細胞分析時需要作顯微鏡鏡檢規(guī)則

1.3.1 紅細胞系鏡檢規(guī)則(1)RBC、HGB超出線性范圍或無結果；(2)HGB＜70g/L或大于參考區(qū)間上限20g/L；(3)MCV＜65fl或＞105fl；(4)MCHC＞380g/ L；(5)MCHC＜300g/L，且MCV≥80fl；(6)RDW-CV首次結果＞22%。

1.3.2 白細胞系鏡檢規(guī)則(1)WBC超出線性范圍或無結果；(2)首次WBC＜2.0×l09/L或＞20.0×l09/L；(3)無DC結果或DC結果不全；(4)成熟中性粒細胞＜1.0×l09/L或＞20.0×l09/L；(5)成熟淋巴細胞＞5.0× l09/L；(6)嗜酸性粒細胞＞2.0×l09/L；(7)嗜堿性粒細胞＞0.5×l09/L；(8)出現(xiàn)NRBC陽性報警；(9)WBC結果不可靠陽性報警；(10)出現(xiàn)IG陽性報警；(11)核左移陽性報警；(12)不典型或變異淋巴細胞報警；(13)有Blasts陽性報警。

1.3.3 血小板系鏡檢規(guī)則(1)PLT超出線性范圍或無結果；(2)首次PLT＜30×l09/L或＞500×l09/L；(3) MCV＜65fl；(4)任何計數結果伴PLT聚集報警。

1.4 涂片鏡檢結果為陽性的判斷標準(12條國際涂片鏡檢陽性判斷標準)[6](1)紅細胞明顯大小不等，＞1／2淡染區(qū)的紅細胞多于30%；(2)巨大血小板多于15%；(3)見到血小板聚集；(4)Dohle小體的粒細胞＞10%；(5)中毒顆粒中性粒細胞＞10%；(6)空泡變性粒細胞＞10%；(7)原幼細胞≥1%；(8)早幼／中幼粒細胞≥1%；(9)晚幼粒細胞＞2%；(10)異型淋巴細胞＞5%；(11)NRBC≥1%；(12)漿細胞≥1%。

1.5 鏡檢規(guī)則的驗證方法

1.5.1 標本每天抽取100份新鮮血常規(guī)標本(住院病人標本以血液科、腫瘤科為主，門診標本為隨機選取)，共500例標本。

1.5.2檢測方法每天用XE-2100D檢測配套質控品進行室內質控，在控后檢測病人標本，同時用SP-1000i制片染色，再由二名有經驗的工作人員進行顯微鏡鏡檢，對照國際涂片鏡檢陽性判斷標準觀察RBC、WBC、PLT形態(tài)有無異常，并對WBC進行分類。

1.5.3 判斷標準參照鏡檢陽性標準(12條國際涂片鏡檢陽性判斷標準)確立XE-2100D作血細胞分析時紅細胞系、白細胞系、血小板系鏡檢規(guī)則及三系聯(lián)合規(guī)則的真陽性、假陽性、真陰性、假陰性。其真陽性為觸犯鏡檢規(guī)則需要鏡檢而鏡檢為陽性；假陽性為觸犯鏡檢規(guī)則需要鏡檢而鏡檢為陰性；真陰性為沒有觸犯鏡檢規(guī)則同時鏡檢為陰性，假陰性為觸犯鏡檢規(guī)則而鏡檢為陽性。

1.6 統(tǒng)計方法采用四格表法計算真陽性率、假陽性率、真陰性率和假陰性率。

2 結果

2.1 參照國際涂片鏡檢陽性判斷標準，XE-2100D作血細胞分析時，遵照紅細胞、白細胞、血小板及三系聯(lián)合，其真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率見表1。

表1 各系規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率(%)

2.2 XE-2100D作血細胞分析時對單一的NRBC和IG鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率見表2。

表2 單一NRBC、IG鏡檢規(guī)則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率(%)

3 討論

上述結果顯示紅細胞系和血小板系鏡檢規(guī)則的假陰性率均為1.00%，其假陽性率分別為12.98%和5.86%，說明XE-2100D作血細胞分析時，我們遵照設立的紅細胞系和血小板系的鏡檢規(guī)則，對異常紅細胞和血小板檢測不容易出現(xiàn)漏診，但其假陽性率偏高達12.98%和5.86%，說明有一定的誤診率，增加了人工顯微鏡鏡檢的工作量，但我們認為本研究中導致紅細胞鏡檢假陽性率高的原因與“12條國際涂片鏡檢陽性判斷標準”中對紅細胞系僅設置了一條陽性標準即“紅細胞大小不等，＞1／2淡染區(qū)的紅細胞多于30%”造成的，而沒有考慮到紅細胞其它形態(tài)異常如出現(xiàn)球形紅細胞、橢圓形紅細胞、靶形紅細胞及含H-J小體紅細胞等可作為陽性標準有關，本研究中我們就發(fā)現(xiàn)1例有靶形紅細胞而未列入真陽性的病例。

結果也顯示白細胞系和三系聯(lián)合鏡檢規(guī)則的假陰性率分別為3.51%和4.10%，符合國際血液學復審協(xié)作組關于假陰性率＜5.0%的規(guī)定[1]，可達到篩選的目的，假陽性率分別為10.78%和1.43%，說明其有一定的誤診率，會增加一定的工作量。

表2結果顯示XE-2100D作血細胞分析時，如遵守單一有核紅細胞(NRBC)和幼稚細胞(IG)鏡檢規(guī)則時其假陰性率分別為3.85%和67.67%，說明XE-2100D作NRBC分析具有一定的篩查，能達到國際血液學復審協(xié)作組關于假陰性率小于5.0%的規(guī)定，但作白細胞分析時，其對IG的漏診率太高，達不到篩選的作用，但是我們可通過設置白細胞系其它鏡檢規(guī)則來彌補其不足,防止漏診。

綜上所述，血液分析儀在作白細胞分析時可起到一定的過篩作用，但必須設置鏡檢規(guī)則來防止漏診，由于各系血細胞分析原理不同，我們認為應針對各細胞系設置鏡檢規(guī)則，同時我們建議“12條國際涂片鏡檢陽性判斷標準”中應增加紅細胞系鏡檢陽性判斷標準，如球形紅細胞、橢圓形紅細胞、靶形紅細胞及H-J小體等可設為陽性參數。

[1]伍柏青,傅新文.當代五分類血細胞分析儀技術原理分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,29(4):391-39.

[2]]陳小劍,王曉歐,李綿綿.XE-2100血細胞分析儀血涂片復檢標準制定及評價[J]．中華檢驗醫(yī)學雜志,2007,30(4):384-387．

[3]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL43醫(yī)學實驗室質量管理和能力認可準則在血液學檢驗領域的應用說明[S].北京: 2012.

[4]XE-2100血細胞分析復檢標準制定協(xié)作組.Sysmex XE-2100自動血細胞分析和白細胞分類的復檢規(guī)則探討[J].中華醫(yī)學檢驗雜志,2008,31(7):752-757.

[5]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:123.

[6]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al.The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J].Lab Hematol 2005,11(2):83-90.

R446

A

1674-1129(2013)06-0566-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.06.020

江西省科技支撐計劃項目，編號：20121BBG70049