姚一帆

(浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江杭州310000)

溫度對(duì)血管緊張素Ⅱ及腎素活性結(jié)果影響的研究

姚一帆

(浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江杭州310000)

目的研究血管緊張素Ⅱ(AⅡ)和腎素活性(PRA)在不同溫度條件下對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。方法90例標(biāo)本分成三組，第一組采血后4℃低溫離心。第二組室溫放置2h后4℃低溫離心。第三組在4℃冰箱放置2h后4℃低溫離心。離心后三組都在30min內(nèi)上機(jī)測(cè)定結(jié)果。另外，將20例標(biāo)本分別放入4℃和-20℃冰箱，取0d、1d、2d、3d、7d、14d為時(shí)間點(diǎn)，測(cè)定結(jié)果保持穩(wěn)定的天數(shù)。結(jié)果在分組實(shí)驗(yàn)中第二組與第一組相比AⅡ結(jié)果降低(20.21±10.98)%，PRA結(jié)果降低(25.6±9.76)%(P＜0.05)，第三組與第一組相比AⅡ結(jié)果降低(1.60±0.85)%，PRA結(jié)果降低(3.3±1.18)%(P＞0.05)，在4℃環(huán)境中，AⅡ與PRA前3天結(jié)果沒有顯著性差異，P＞0.05。3天到14天有顯著性差異，P＜0.05。在-20℃環(huán)境中AⅡ標(biāo)本在14天內(nèi)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果沒有顯著性差異，P＞0.05。PRA在7天內(nèi)的結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。而7天到14天有顯著性差異，P＜0.05。結(jié)論AⅡ和PRA對(duì)溫度敏感，室溫放置能使其結(jié)果偏低，而在低溫環(huán)境中能夠保持結(jié)果穩(wěn)定。建議AⅡ和PRA標(biāo)本的運(yùn)送與預(yù)處理都應(yīng)該在低溫中進(jìn)行，并制定詳細(xì)的操作規(guī)程確保在日常工作中流程的可靠。

分析前；血管緊張素Ⅱ；腎素活性

原發(fā)性醛固酮增多癥(primary aldosteronism, PA)是由于腎上腺皮質(zhì)病變引起醛固酮分泌增多，導(dǎo)致潴鈉排鉀、體液容量擴(kuò)張而抑制了腎素-血管緊張素系統(tǒng)[1]。以往認(rèn)為,PA在高血壓人群中并不常見，只占高血壓患者的0.4%～2.0%。但近年研究顯示5%～13%高血壓患者為PA，而在難治性高血壓中PA可高達(dá)20%[2]。這一研究進(jìn)展要?dú)w功于血漿醛固酮(ng/dl)與腎素活性(ng·ml-1·h-1)比值(aldosterone/rennin ratio,ARR)這一個(gè)敏感的PA篩查指標(biāo)的應(yīng)用。

傳統(tǒng)測(cè)定血管緊張素Ⅱ(AⅡ)和腎素活性(PRA)的方法為放射免疫法，該試驗(yàn)方法一般用碘125(125I)作為標(biāo)記物，實(shí)驗(yàn)后的廢液與垃圾有放射性污染，且操作繁瑣測(cè)定周期長。因而正逐步被測(cè)定速度快、污染少的全自動(dòng)免疫發(fā)光儀所代替[3]。影響AⅡ和PRA結(jié)果的因素很多，如采樣時(shí)間、病人飲食狀況、標(biāo)本的保存和測(cè)定前預(yù)處理等[4]。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，溫度對(duì)血管緊張素及腎素活性結(jié)果影響的文獻(xiàn)不多，通過不同溫度條件下結(jié)果的比較，為日常工作提供參考，便于質(zhì)量控制。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2013年3月入院病人30例，所有患者對(duì)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目知情。早上8：00-10:00Am抽

取肘靜脈血3ml，拔出針頭后注入到酶抑制劑抗凝管中，將管口封好后上下顛倒數(shù)次，混勻后立刻放入冰水浴，送至實(shí)驗(yàn)室低溫離心并分離血漿進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 儀器和方法

1.2.1 儀器采用深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司生產(chǎn)的Maglumi1000免疫發(fā)光儀，使用試劑為原裝配套試劑。批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為≤10%，批間變異系數(shù)(CV)≤15%。

1.2.2 方法將30例病人標(biāo)本分為三組處理，第一組完全按照項(xiàng)目SOP及《原發(fā)性醛固酮增多癥病人診斷治療指南》中規(guī)定進(jìn)行操作(血管緊張素Ⅱ和腎素活性標(biāo)本預(yù)處理過程基本一致)：標(biāo)本送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后4℃低溫離心，離心后立即上機(jī)測(cè)定AⅡ和PRA(儀器提前通過校正與質(zhì)控)，抽血到上機(jī)時(shí)間間隔不超過半小時(shí)。第二組標(biāo)本離心前先室溫放置2h，其他同第一組處理。第三組離心前4℃冰箱放置2h，其他同第一組處理。

此外，準(zhǔn)備20例病人標(biāo)本(保證每例標(biāo)本血漿大于2.5ml)，每例標(biāo)本分成12份，每份200μl。每例6份標(biāo)本分別放入4℃和-20℃冰箱，這樣將20例標(biāo)本均勻的分成了兩組。分別取第0天、第1天、第2天、第3天、第7天、第14天為6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每次從各組中取出20例標(biāo)本，測(cè)定AⅡ和PRA，結(jié)果取其平均值，統(tǒng)計(jì)結(jié)果保持穩(wěn)定的天數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理原始數(shù)據(jù)在Excel中記錄，剔除小于檢測(cè)限(0.1ng/ml)的腎素活性數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以x±s表示。在SPSS16.0中將分組處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用方差分析(One-Way ANOVA)統(tǒng)計(jì)，根據(jù)時(shí)間變化的低溫保存結(jié)果使用非參數(shù)檢驗(yàn)(Wilcoxon test)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AⅡ和PRA分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果第一組參照組、第二組室溫組、第三組低溫組各30例標(biāo)本在不同實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)得數(shù)據(jù)詳見表1。

2.2 AⅡ和PRA低溫保存結(jié)果

2.2.1 4℃保存結(jié)果AⅡ和PRA在4℃環(huán)境中保存，分別在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出20例標(biāo)本測(cè)定，結(jié)果詳見表2。

2.2.2 -20℃保存結(jié)果AⅡ和PRA在-20℃環(huán)境中保存，在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取出20例標(biāo)本測(cè)定，結(jié)果詳見表3。

表1 AⅡ與PRA在不同分組下所測(cè)量濃度及變化百分比

表2 AⅡ和PRA在4℃保存時(shí)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的結(jié)果

表3 AⅡ和PRA在-20℃保存時(shí)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的結(jié)果

3 討論

《原發(fā)性醛固酮增多癥病人診斷治療指南》中規(guī)定(由歐洲內(nèi)分泌學(xué)會(huì)及高血壓學(xué)會(huì)、國際內(nèi)分泌學(xué)會(huì)及高血壓學(xué)會(huì)共同制定)[5]：AⅡ和PRA的標(biāo)本，從病人血液樣本的采集，標(biāo)本運(yùn)送到達(dá)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)室把標(biāo)本離心分離的時(shí)間不能超過30min。這在日常工作中往往難以做到。

通過不同溫度的分組實(shí)驗(yàn)(結(jié)果詳見表1)發(fā)現(xiàn)

AⅡ和PRA的標(biāo)本在室溫環(huán)境下放置2h對(duì)結(jié)果有顯著性影響，但在4℃中放置2h對(duì)結(jié)果沒有影響。不同溫度的分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果為指南中的相關(guān)規(guī)定在實(shí)際操作中的困難提供了很好的解決方法。AⅡ和PRA的標(biāo)本在室溫下最多只能放置2h，而在4℃中可以穩(wěn)定保存，也就是說只要將標(biāo)本的前處理過程一直處在4℃的環(huán)境中就能使AⅡ和PRA不受溫度的影響。采集、運(yùn)送、離心標(biāo)本的總時(shí)間也將不再拘泥于指南中規(guī)定的30min了。

為滿足標(biāo)本前處理一直處于4℃這一條件，對(duì)檢測(cè)AⅡ和PRA的標(biāo)本提出以下注意事項(xiàng)：(1)自配試管在加好抗凝劑后放4℃冰箱保存，并做好冰箱的溫度記錄。(2)AⅡ和PRA的標(biāo)本放置在低溫保溫箱或冰水浴中運(yùn)送。(3)實(shí)驗(yàn)室接收到AⅡ和PRA的標(biāo)本后，立即在低溫離心機(jī)上離心，然后分離標(biāo)本的血漿，保存在4℃冰箱中等待檢測(cè)。(4)在用放射免疫法檢測(cè)標(biāo)本時(shí)，加樣應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行。當(dāng)用免疫發(fā)光儀檢測(cè)AⅡ和PRA的標(biāo)本時(shí)，特別要注意樣本倉的溫度，避免溫度過高，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]。(5)為便于檢測(cè)后的復(fù)查，完成測(cè)定的AⅡ和PRA標(biāo)本應(yīng)放置在-20℃冰箱中。因?yàn)橥ㄟ^低溫保存實(shí)驗(yàn)(結(jié)果詳見表2、表3)發(fā)現(xiàn)標(biāo)本在4℃中只能穩(wěn)定保存3天，而在-20℃時(shí)可以至少穩(wěn)定保存一周。

在PRA 4℃長時(shí)間保存試驗(yàn)中(詳見表2)發(fā)現(xiàn)：PRA的20例標(biāo)本在4℃保存的前3天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果隨時(shí)間延長而降低，但在第7天的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)的結(jié)果卻突然較前3天增加，且在第14天又下降為最低。仔細(xì)分析原始數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)這是由PRA的檢測(cè)和計(jì)算方法造成的。PRA的結(jié)果是由標(biāo)本在不同溫度下(37℃和4℃)靜置1h后測(cè)得的血漿腎素Ⅰ的數(shù)值相減而得，也就是說PRA是一個(gè)差值。當(dāng)標(biāo)本長時(shí)間保存時(shí)，不同溫度下測(cè)得的血漿腎素Ⅰ數(shù)值都隨時(shí)間延長而降低，因?yàn)樵诓煌瑴囟认卵獫{腎素Ⅰ的數(shù)值下降不是成等比的，所以兩者的差值不一定下降。有時(shí)當(dāng)測(cè)得的37℃的結(jié)果與4℃的結(jié)果非常接近時(shí)，PRA還會(huì)容易出現(xiàn)負(fù)值，猜測(cè)可能是由于前者溫度高,下降幅度大再加上本身數(shù)值接近，因而出現(xiàn)差值為負(fù)的現(xiàn)象。

[1]楊永青,王曉周,蔣綺年.血漿PRA,AT-Ⅱ,NPY RIA在原發(fā)性高血壓分型和治療中的應(yīng)用[J].放射免疫學(xué)雜志,2001,14(6):321-322.

[2]黃瑩,黃敏葵.血漿醛固酮/腎素活性比值篩查原發(fā)性醛固酮增多癥的臨床價(jià)值[J].廣西醫(yī)學(xué),2009,31(11)：1613-1614.

[3]章震花,張曉鳳,趙麗敏.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)丙型肝炎抗體的臨床評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4)：422-423.

[4]朱鼎良.應(yīng)重視在高血壓患者中開展原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查、確診和分型定位檢查[J].中華心血管病雜志,2006,34(10)：865-866.

[5]Funder JW,Carey RM,Fardella C,et al.Case detection,diagnosis,and treatment of patients with primary aldosteronism:an endocrine society clinical practice guideline[J].Clin Endocrinol Metab,2008,93(5):3266-3281

[6]馬鴻雁.標(biāo)本上機(jī)放置方式和放置時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(1)：80-81.

A study of temperature effect on the activity of plasma angiotensinⅡand renin

YAO Yifan.The First Affiliated Hospital of Zhejiang University,Hangzhou 310003,China

Objective To study the concentration changes of plasma angiotensinⅡ(AⅡ)and renin activity(PRA)in different temperature conditions.Methods Ninety blood samples were collected from 30 patients and divided into 3 groups.In the first group,the procedure followed the handling protocol provided by the manufacturers for the AⅡand PRA kits precisely.The other two groups kept at room temperature and 40C for 2 hours respectively,and then processed samples by the handling protocol the first group followed.In addition,other 20 specimens were separately stored for 1,2,3,7 and 14 days at 4°C and-20°C to evaluate the stability of AⅡand PRA.Results When blood samples were kept at room temperature for 2 hours,the PRA and AⅡdecreased significantly(P＜0.05),but both unchanged if samples were placed at 4°C for the same time period.During storage at 4°C, the PRA and AⅡgot no significant changes for 3 days.After 3 days,PRA and AⅡdecreased rapidly.When put into the-20°C environment,the PRA and AⅡwere stabilized for a week.ConclusionThe AⅡand PRA were sensitive to temperature,and decreased quickly in a room temperature.But a low temperature storage condition would remain them in a stable state.So it is necessary to apply well-defined pre-analytical procedures for AⅡand PRA measurements.

Preanalytical;Plasma angiotensinⅡ;Plasma renin activity

R586.2+4，R446.62

A

1674-1129(2013)06-0549-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.06.013

姚一帆，男，1984年3月出生，檢驗(yàn)師，溫州醫(yī)學(xué)院本科畢業(yè)，浙江大學(xué)在職研究生，專業(yè)：檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，主要研究免疫學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)等。