王繼貴

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗科，湖南長沙410011)

·述評·

卵巢癌生物標志物研究的現(xiàn)代進展

王繼貴

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗科，湖南長沙410011)

卵巢癌是婦女中最普通的一種惡性腫瘤。由于卵巢癌臨床癥狀含糊不清，大多數(shù)病人是在晚期階段診斷出的。本文概述了用血清生物標志物對卵巢癌早期診斷及疾病進程監(jiān)測的當前進展。

卵巢癌；生物標志物；檢測

卵巢癌(Ovarian cancer,OC)的診斷主要基于臨床癥狀、影像學(xué)及實驗室生物標志物的檢查。總的來說，已鑒別出200多種潛在的生物標志物，在OC時有不同的表達[1]。然而，已發(fā)現(xiàn)沒有單一的生物標志物對于OC的診斷是滿意的，當多種生物標志物聯(lián)合使用時，對OC的診斷可增加敏感度和特異性。由于OC病人臨床癥狀是難以捉摸和非特異的，大多數(shù)病人是在疾病的晚期階段診斷出的，此時其5年生存率僅30%[2]。因此，早期診斷OC將顯著改善病人的預(yù)后。本文將概述用血清生物標志物對OC的早期診斷及疾病進程監(jiān)測的當前進展。

1 OC的分類

大多數(shù)OC是由三個生物類別的細胞發(fā)展而來；上皮細胞、性索基質(zhì)細胞和生殖細胞。它們之中，上皮細胞癌占OC的90%。上皮細胞OC又被分成5個亞型：(1)漿液型，約占50%左右；(2)黏液型，約占5%～10%；(3)子宮內(nèi)膜樣型，約占10%～25%；(4)透明細胞型，約占4%～5%；(5)變遷型，罕見[3]。因為OC細胞有各種各樣的組織型，可以表達不同的腫瘤標志物，重要的是用多種腫瘤標志物可以檢測所有的OC。

2 卵巢癌的生物標志物

過去20年，用先進的技術(shù)，物別是質(zhì)譜法，發(fā)現(xiàn)了大量的血清生物標志物同OC有關(guān)[1]。Cramer等[4]在多種癌癥病人中，研究了OC生物標志物的過篩特性，發(fā)現(xiàn)了一些有希望的標志物。

2.1 糖鏈抗原125糖鏈抗原125(Carbohydrate antigen 125,CA125)在1981年由Bast等人發(fā)現(xiàn)的。當時他們用漿液性O(shè)C細胞株免疫鼠，產(chǎn)生了鼠單克隆抗體(OC125)。隨后的研究顯示：用參考界值35U/ml作為判斷標準，發(fā)現(xiàn)在80%漿液型OC的CA125增加、黏液型有69%、子宮內(nèi)膜樣型有75%、透明細胞型有78%、未分化型OC有88%。良性卵巢疾病病人有2.2%～27.8%CA125升高，在健康婦女中也發(fā)現(xiàn)有0.2%～5.9%人群CA125升高。CA125升高在Ⅰ期OC病人中有50%、Ⅱ期有90%，Ⅲ和Ⅳ期OC病人則＞90%。然而，在其他癌時，如子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌及其他胃腸道癌，CA125水平也增加。

由于CA125的特異性有限，目前尚未用作常規(guī)診斷試驗，但是用于監(jiān)測治療反應(yīng)及檢測疾病復(fù)發(fā)，它還是有用的[5]。最近，測定CA125被認為是對許多OC病人監(jiān)測的醫(yī)療標準，婦產(chǎn)科癌癥社會團體(GCIG)間已達成一致意見，推薦CA125只能用作評價治療效果，CA125反應(yīng)標準被定義為：同治療前的樣本比較，若治療后CA125下降50%，或CA125濃度在治療后下降到參考范圍內(nèi)，被認為是對治療有完全的應(yīng)答[6]。

Prat等[7]評價了CA125最低值在參考范圍(＜35U/ml)時的預(yù)后作用，繼最初治療之后，發(fā)現(xiàn)CA125水平絕對值增加≥5U/ml(同它的最低值比較)，是OC復(fù)發(fā)的一個強烈預(yù)測指征。這個新的CA125預(yù)測進展的標準，得到的敏感度為90%，陽性預(yù)測值為96.4%，假陽性率為5.6%。這些研究證實適當應(yīng)用CA125，可以幫助癌癥專家檢測OC的早期復(fù)發(fā)。

2.2 人附睪蛋白4人附睪蛋白4(Human epididymis 4,HE4)是一種低分子量的糖蛋白，一種人附睪蛋白的前身，且是穩(wěn)定的4-二硫化物家族的一個成員。HE4主要在正常婦女生殖組織上皮細胞中表達，在嚴重OC病人中過表達者為93%，子宮內(nèi)膜樣癌為100%，透明細胞癌中為50%，但是

在黏液型或OC的生殖細胞中不表達[8]。Escudero等[9]在127例OC病人、292例良性婦科疾病病人及101例健康對照中研究了HE4和CA125的表達。以CA125界值35U/ml，HE4界值140nmol/ml作為判斷標準，結(jié)果顯示：在健康人，HE4結(jié)果異常者有1.1%，CA125有9.9%；在良性婦科疾病的病人中，HE4異常者有12.3%，CA125有37%，HE4增加的良性婦科疾病病中，腎衰竭是最普通的原因，與其他良性婦科病人比較，有顯著差別(P= 0.001)。在OC同婦科良性疾病的鑒別診斷中，HE4的ROC曲線下面積比CA125顯著增加(0.874比0.722)，因此認為HE4對OC的診斷特異性比CA125顯著高一些，而聯(lián)合檢測HE4和CA125，可顯著改善所有階段及組織型OC的診斷效率，由Anastasi等[10]的一份研究顯示，在OC復(fù)發(fā)的病人中，在CA125之前5～8個月，HE4已增加，表明HE4對于監(jiān)測OC復(fù)發(fā)可能是一個較好的新的早期標志物。

2.3 巢蛋白-2巢蛋白-2(Nidogen-2)是一種基底膜蛋白質(zhì)，在基底膜成份中，巢蛋白家族有兩個已知的基底膜蛋白質(zhì)在細胞外基質(zhì)中有重要的作用。在人類，已經(jīng)鑒定出兩種巢蛋白，巢蛋白-1(分子量150KDa)和巢蛋白-2(200KDa)，兩種蛋白質(zhì)有46%主要序列完全相同。2010年，Kuk等[11]首先報告巢蛋白-2是OC的一種新的血清生物標志物，可用于早期診斷。研究包括100例OC病人、100例良性婦科疾病病人和100例健康對照。上述血清標本同時用Roche商品免疫試驗測定CA125和非競爭Sandwich ELISA測定巢蛋白-2濃度。結(jié)果顯示：正常對照組和良性婦科疾病組血清巢蛋白-2濃度平均值分別為13.2mg/L和12.1mg/L，兩組之間無顯著差異。然而，OC病人組血清巢蛋白-2濃度則升高，平均值為18.6mg/L，與正常對照組或良性婦科疾病組比較有顯著差異(P＜0.001)。在所有樣本中發(fā)現(xiàn)CA125和巢蛋白-2濃度密切相關(guān)(P＜0.001)。提示血清巢蛋白-2可能是OC的一個新血清標志物。

除了上述幾種重要的生物標志物外，已報道的與OC有關(guān)的血清標志物還有很多，下面摘幾種主要的(見表1)，它們主要同其他生物標志物組合，聯(lián)合測定用于OC的早期篩查，可以改善OC檢測的敏感度和特異性。

表1 同OC有關(guān)的重要血清標志物

3 多標志物組合用于OC的診斷

由于OC標志物的敏感度和特異性有限，當前尚沒有單一的標志物被FDA批準用于OC的早期診斷。假陽性結(jié)果將導(dǎo)致不必要的手術(shù)和治療，因此，過篩試驗的特異性是極為重要的。由于單一標志物未成功地用于OC的早期診斷，研究轉(zhuǎn)向聯(lián)合多種生物標志物組合在一起用于OC的早期診斷。

Yurkovetsky等[2]研究了35種生物標志物，分別組合成4標志物的檢測板，用于檢測早期OC可增加敏感度，如一種檢測板包括CA125、HE4、CEA和VCAM-1(血管細胞黏附分子-1)。此板有較好的檢測效果，用于早期OC得到的敏感度為86%，特異性為93%；用于晚期OC特異性為98%。當前，大量研究已表明，多標志物平臺比單用CA125改善了診斷效力，隨后，有報告用5種和7種生物標志物組合一種檢測板，用于篩查早期OC，現(xiàn)摘要于表2[12]。

多標志物組合進行聯(lián)合檢測，提升了對數(shù)學(xué)技術(shù)的需要，它不是以單個標志物在聯(lián)合檢測中的測定值來解釋結(jié)果，而是將測定值經(jīng)過數(shù)學(xué)處理，得來各種組合指數(shù)(Composite Index)進行評價。Zhang等[13]在研究中設(shè)計了一種人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(Artificial neural network)模擬工具，將聯(lián)合測定中各標志物值輸入計算出組合指數(shù)，顯著改善了Ⅰ期

上皮細胞卵巢癌病人同健康婦女的鑒別診斷難度，提高了早期OC的診斷效率。

Gorelik等[14]用Sandwich免疫試驗和玻璃微珠技術(shù)研究了細胞因子作為新的一組腫瘤標志物在OC診斷中的作用，共研究了24種細胞因子(包括細胞因子、化學(xué)趨化因子、生長因子和血管生成因子)。發(fā)現(xiàn)IL-6、IL-8、EGF、VEGF、MCP-1和CA125六種標志物組合的檢測板，通過LabMAP(自動控制領(lǐng)域的一種軟件中間件)技術(shù)分析，能很好地鑒別OC和健康對照，可以代表一個有希望的手段用于OC的早期檢測。

表2 多標志物板用于檢測OC的敏感度和特異性

4 小結(jié)

對于OC早期診斷的挑戰(zhàn)仍然存在，雖然已發(fā)現(xiàn)數(shù)百個生物標志物同OC有關(guān)，它們對早期診斷的用途至今尚未確定。用新的技術(shù)，如質(zhì)譜法，預(yù)料將會發(fā)現(xiàn)同OC有關(guān)的另外的新的生物標志物，這時的義務(wù)將是發(fā)展多元的試驗，它有可能在一個單一的檢測板上同時測定多種生物標志物。聯(lián)合使用多種生物標志物，包括CA125、HE4及其他生物標志物組合在一起對于OC的早期診斷、治療反應(yīng)的監(jiān)測及預(yù)測疾病的復(fù)發(fā)是今后的一個研究方向。

[1]Lokshin AE.The quest for ovarian cancer screening biomarkers: are we on the right road?[J].Int J Gynecol Cancer,2012 22(suppl 1):S35-40.

[2]Yurkovetsky Z,Skates S,Lomakin A,et al.Development of a multimarker assay for early detection of ovarian cancer[J].J Clin Oncol, 2010,28(13):2159-2166.

[3]Chen VW,Ruiz B,Killeen JL,et al.Pathology and classification of ovarian tumors[J].Cancer,2003,97(10 suppl):2631-2642.

[4]Cramer DW,Bast Jr RC,Berg CD,et al.Ovarian cancer biomarker performaceinprostate,lungcolorectalandovariancancer screening trial specimens[J].Cancer Prev Res(Phila)2011,4(3): 365-374.

[5]Lutz AM,Willmann JK,Drescher CW,et al.Early diagnosis of ovarian carcinoma:is a solution in sight?[J].Radiology 2011,259 (2):329-345.

[6]Rustin GJ,Vergote I,Eisenhauer E,et al.Definition for response and progression in ovarian cancer clinical trials incorporating RECIST 1.1 and CA125 agreed by the Gynecological Cancer Intergroup(GCIG)[J].Int J Gynecol Cancer,2011,21(2):419-423.

[7]Prat A,Parera M,Peralta S,et al.Nadir CA125 concentration in the normal range as an independent prognostic factor for optimally treated advanced epithelial ovarian cancer[J].Ann Oncol,2008, 19(2):327-331.

[8]Drapkin R,von Horsten HH,Lin Y,et al.Human epididymis protein 4(HE4)is a secreted glycoprotein that is overexpressed by serous and endometrioid ovarian carcinomas[J].Cancer Res, 2005,65(6):2162-2169.

[9]Escudero JM,Auge JM,Filella X,et al.Comparison of serum human epididymis protein 4with cancer antigen 125 as a tumor marker in patients with malignant and nonmalignant diseases[J].Clin Chem,2011,57(11):1534-1544.

[10]Anastasi E,Marchei GG,Viggiani V,et al.HE4:a new potential early biomarker for the recurrence of ovarian cancer[J].Tumour Biol,2010,31(2):113-119.

[11]Kuk C,Gunawardana CG,Soosaipillai A,et al.Nidogen-2:A new serum biomarker for ovarian cancer[J].Clin Biochem,2010,43(4～5):355-361.

[12]Zengliu Su,Whitney SG,Yusheng Zhu.Detection and monitoring of ovarian cancer[J].Clin Chim Acta,2013,415:341-345.

[13]Zhang Z,Yu Y,Xu F,et al.Combining multiple serum tumor markers improves detection of stage 1 epithelial ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol,2007,107(3):526-531.

[14]Gorelik E,Landsittel DP,Marrangoni AM,et al.Multiplexed immunobead-based cytokine profiling for early detection of ovarian cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2005,14(4):981-987.

R737.31,R730.43

A

1674-1129(2013)06-0515-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.06.001

王繼貴，男，1937年生，湘雅二醫(yī)院檢驗科原主任，主任檢驗師，研究方向為臨床生物化學(xué)。