徐佳瑛 楊麗麗 馬 超 陳啟林

口腔癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高［1］，近年來在東亞國家及地區(qū)均有上升的趨勢?？谇话┤菀讖桶l(fā)，復發(fā)率為20% ～48%，5年生存率約60%，且部分患者發(fā)病年齡較低，有年輕化趨勢。近年來研究發(fā)現(xiàn)炎性因子可通過改變局部微環(huán)境而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，而環(huán)氧化酶-2(COX-2)與細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等密切相關(guān)［2］。本研究通過觀察白介素-17(IL-17)與COX-2在口腔扁平苔蘚、口腔鱗狀細胞癌中的表達情況，分析兩者的關(guān)系和臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2009年1月至2012年1月我科初診的20例口腔扁平苔蘚和20例口腔鱗癌患者的病理組織為研究對象，分別納入扁平苔蘚組和鱗癌組。所有病理組織均取自手術(shù)切除并經(jīng)石蠟包埋處理，術(shù)前未進行免疫、激素、放療、化療等相關(guān)治療，患者本身未合并其他自身免疫性疾病。選取20例正?？谇火つそM織作為對照組，均取自口腔外傷患者，排除口腔黏膜疾病或全身免疫系統(tǒng)疾病，鏡下組織表現(xiàn)為復層鱗狀上皮，包括基底層、棘細胞層、顆粒層、角化層。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 超凈工作臺，微型常溫離心機，超純水及除菌系統(tǒng)，電冰箱，OLYMPUS光學顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)等。兔抗人IL-17單克隆抗體，購自北京博奧森生物有限公司;抗COX-2多克隆抗體購自美國SantaCruz公司;SP免疫組化試劑盒以及DAB顯色試劑盒購自北京中山生物有限公司。

1.2.2 試驗步驟 切片機連續(xù)切片，厚度取4 μm，并置于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上。常規(guī)脫蠟水洗后置于3%雙氧水中約10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶。室溫下采用檸檬酸緩沖液，微波加熱修復抗原，并以正常羊血清封閉20 min，蒸餾水沖洗后將載玻片上的水漬擦干。滴加一抗，37℃下孵育1 h，滴加山羊抗小鼠IgG，37℃下靜置30 min，然后滴加SP復合物，靜置30 min，DAB濃縮試劑盒顯色，顯微鏡下控制顯色時間，沖洗后蘇木精復染，然后脫水、透明、封片。所有實驗步驟及操作嚴格按試劑盒說明進行，設(shè)立陰性對照并將PBS代替一抗重復操作。

1.3 評價標準

所有切片均在鏡下隨機選取5個以上高倍視野(×400)觀察，淺黃色-棕褐色細顆粒狀為陽性表現(xiàn)，計算陽性細胞百分比。按陽性細胞所占的百分比進行分級，陽性細胞表達率＜10%為陰性(-)，≥10% ～20%為弱陽性(+)，＞20% ～50%為陽性 (++)，＞50%為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學處理

研究數(shù)據(jù)均由SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，雙側(cè)檢驗水準 α=0.05，以 P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-17在正?？谇火つ?，口腔扁平苔蘚及口腔鱗癌組織中的表達

對照組中14例(70.0%)呈不同程度的陽性表達，主要位于胞質(zhì)，分布于顆粒層、角化層、部分棘細胞層，間質(zhì)細胞中可見少量陽性表達;扁平苔蘚組19例(95.0%)呈陽性表達，主要在固有層淺層上皮細胞內(nèi)表達。鱗癌組中均有陽性表達，腫瘤細胞及周圍間質(zhì)細胞均可見陽性表達。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在扁平苔蘚組與鱗癌組中的陽性表達率均顯著高于對照組(P＜0.05)，但扁平苔蘚組與鱗癌組IL-17陽性率無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05)，見表1。

表1 IL-17在正?？谇火つ?，口腔扁平苔蘚及口腔鱗癌組織中的表達(例)

2.2 COX-2在正?？谇火つぃ谇槐馄教μ\及口腔鱗癌組織中的表達

對照組中未見COX-2陽性表達，扁平苔蘚組中10例(50.0%)陽性表達，以細胞胞質(zhì)或核膜為主，多見于上皮棘細胞層、顆粒層以及角化層，基底細胞未見陽性表達;在鱗癌組中16例(80.0%)陽性表達，鱗狀癌細胞中呈強陽性表達。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，COX-2在扁平苔蘚組與鱗癌組中的陽性表達率均顯著高于對照組(P＜0.05)，且鱗癌組高于扁平苔蘚組(P ＜0.05)，見表2。

表2 COX-2在正?？谇火つ?，口腔扁平苔蘚及口腔鱗癌組織中的表達(例)

3 討論

口腔扁平苔蘚是口腔黏膜的慢性非感染性炎性疾病，Th1/Th2失衡等免疫因素在疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。因口腔扁平苔蘚具有癌變潛能，故WHO將其列入潛在惡性病變范疇。大量研究發(fā)現(xiàn)，口腔扁平苔蘚病損區(qū)以T淋巴細胞聚集為主，包括輔助性和抑制性T細胞，而B細胞、自然殺傷細胞卻相對少見?；罨腡淋巴細胞可產(chǎn)生多種炎性因子來調(diào)控、促進免疫反應(yīng)過程，引起大量活化的T淋巴細胞在局部組織浸潤［3］。部分 T淋巴細胞可分泌 IL-17(Th17亞群)，并可促進炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，促進炎細胞因子分泌，在自身免疫性疾病中具有重要作用［4］。

口腔扁平苔蘚具有慢性持續(xù)性、免疫抑制功能降低，病變區(qū)可見毒性T細胞克隆等自身免疫性疾病的特征。目前在實體瘤與周圍間質(zhì)關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥過程中細胞因子的變化可影響局部微環(huán)境，進而改變正常細胞的存活、增殖、分化周期，是腫瘤起始、進展并具有侵襲性和轉(zhuǎn)移能力的關(guān)鍵因素之一［5］。在胃癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、肝癌、腸癌、乳腺癌惡性腫瘤中均可發(fā)現(xiàn)Th17細胞及IL-17;進一步研究局部微環(huán)境，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤細胞可分泌MCP-1、促炎因子等，促進Th17細胞分化并維持其生長過程［6］。本次研究發(fā)現(xiàn)，約30%的正常口腔黏膜組織不表達IL-17，70%陽性表達于胞質(zhì)，包括顆粒層、角化層、部分棘細胞層以及間質(zhì)細胞。95%扁平苔蘚組織IL-17呈陽性表達，多見于固有層淺層上皮細胞，而鱗癌組織中均有陽性表達，腫瘤細胞及周圍間質(zhì)細胞均可見陽性表達。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達率均顯著高于對照組，扁平苔蘚組與鱗癌組IL-17陽性率無顯著差異，但鱗癌組強陽性表達率顯著高于扁平苔蘚組。IL-17在口腔扁平苔蘚、口腔鱗癌中均有高度表達，提示口腔扁平苔蘚上皮長期受炎癥細胞浸潤，隨著局部細胞因子水平改變，炎性因子網(wǎng)絡(luò)化激活可能促進口腔鱗癌的發(fā)生。但也有學者認為，IL-17高表達是非霍奇金淋巴瘤預(yù)后較好的指標之一［7］。因此，IL-17在癌前病變及鱗癌中的表達水平與預(yù)后的關(guān)系尚需進一步深入研究。

COX-2屬于誘導型酶，在大多數(shù)正常組織中不表達，在炎性因素等刺激下可誘導性表達，有學者發(fā)現(xiàn)其在癌基因、生長因子的作用下也可表達。COX-2的過度表達在癌前病變組織中較早出現(xiàn)，甚至早于細胞凋亡周期改變。有學者研究發(fā)現(xiàn)舌鱗狀細胞癌中COX-2表達水平與腫瘤侵襲性、轉(zhuǎn)移能力、預(yù)后等相關(guān)［8］。近年來對腫瘤微環(huán)境及發(fā)生、發(fā)展的研究發(fā)現(xiàn)，COX-2表達水平上升與腫瘤血管形成關(guān)系密切［9-10］。本次研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在正?？谇火つぜ毎袔缀醪槐磉_，50.0%的扁平苔蘚陽性表達，80.0%鱗癌陽性表達。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，COX-2在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達率均顯著高于對照組，且鱗癌組陽性率高于扁平苔蘚組，與其他學者研究結(jié)果相近。Pandey等研究發(fā)現(xiàn)COX-2在正?？谇火つぁ┣安∽?、口腔鱗癌中表達水平逐漸增高［11］。

口腔黏膜癌變的機制是臨床研究的熱點之一，特別是癌前病變進展為腫瘤的過程，例如局部微環(huán)境的變化，細胞因子間的正、負反饋網(wǎng)絡(luò)，多種因子共同作用引起細胞生長周期變化，刺激腫瘤血管生成等等［12］。本次研究初步發(fā)現(xiàn)IL-17與COX-2在口腔扁平苔蘚及鱗癌中均有不同程度的表達，但具體機制及對腫瘤微環(huán)境的影響尚需進一步深入研究，例如動態(tài)觀察腫瘤的發(fā)生與發(fā)展與IL-17、COX-2的關(guān)系，從而為臨床治療、預(yù)后評估提供參考。

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