■榮 磊 格根圖 尹 強 賈玉山

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)環(huán)境學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010019）

畜牧業(yè)生產(chǎn)中，牧草的收獲與保存是重要的環(huán)節(jié)。將牧草從旺季貯藏到淡季，可保證全年供應(yīng)平衡。保持牧草質(zhì)量，可提高家畜飼養(yǎng)效率和生產(chǎn)性能。隨著我國畜牧業(yè)發(fā)展，我國面臨的突出問題是缺乏蛋白飼料。目前國內(nèi)苜蓿干草是食草家畜最重要最普遍的越冬飼料。由于其方便加工、貯藏及運輸。在美國，干草總量的60%是苜蓿干草，80%的苜蓿都是收獲打捆貯藏的。

苜蓿在整個收獲貯藏期間營養(yǎng)損失很大，Rassmussen(1969)提出，加拿大牧草在田間和貯藏過程中有25%的物質(zhì)損失。Brandt（1984）曾提出，不經(jīng)任何處理，對苜蓿高水分打捆貯藏，營養(yǎng)成分的降解率和消化能均有所下降。因此，對苜蓿草捆進(jìn)行合理的處理可有效保證牧草品質(zhì)。

本文以此為基點，對寧夏地區(qū)苜蓿草捆進(jìn)行不同水分、不同密度、不同防霉劑添加量組合處理，根據(jù)不同處理草捆貯藏期內(nèi)霉菌種群變化規(guī)律，探索出一種最佳貯藏方式，以期為當(dāng)?shù)剀俎０踩a(chǎn)提供可靠的理論依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗地點及概況

本試驗主要在國家牧草產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系寧夏鹽池綜合試驗站開展。寧夏鹽池綜合試驗站試驗基地位于寧夏回族自治區(qū)銀川市，地處東經(jīng)105°49′～106°53′,北緯37°29′～38°53′。

1.2 試驗材料

1.2.1 試驗原料

本試驗所選用的試驗材料均為寧夏鹽池綜合試驗站試驗基地第二茬紫花苜蓿（Medicago sativa Linn.），品種為金皇后(Golden Empress)。

1.2.2 主要儀器設(shè)備與化學(xué)試劑

主要儀器設(shè)備有超凈工作臺、滅菌鍋、錐形瓶（150、250 ml）、試管、酒精燈。Daisy II 體外模擬培養(yǎng)箱、過濾裝置（ANKOM F57濾袋）、封口機、量筒（1 L&500 ml）、熱水瓶2個、過濾用奶酪布 。

主要試劑有葡萄糖、瓊脂粉、蒸餾水。緩沖溶液 A：KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、CaCl2·2H2O、尿素(試劑級)；緩沖溶液B：Na2CO3、Na2S·9H2O。

1.3 試驗方法

1.3.1 正交試驗設(shè)計

本試驗所選用的紫花苜蓿均在初花期刈割，選擇含水量、打捆密度、CaO添加量三個因素，各取三個水平；以霉菌數(shù)量為考察指標(biāo)，利用L9（33）進(jìn)行正交試驗。正交試驗設(shè)計因素和水平設(shè)計見表1。

表1 正交試驗設(shè)計因素和水平設(shè)計

1.3.2 樣品的采集

分別在草捆貯藏360 d時，用取樣器在各處理草捆4周及中間部分取樣，混合均勻制成重500 g樣本，裝入自封袋中，以待測定霉菌數(shù)量。

1.3.3 霉菌的測定

1.3.3.1 PDA培養(yǎng)基的制備

制1 000 ml PDA培養(yǎng)基需蒸餾水1 000 ml，瓊脂20 g，新鮮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g。高溫高壓滅菌30 min。

1.3.3.2 真菌的分離

稱取10 g樣品，放于100 ml無菌水（無菌水中事先加入了分散劑1～2滴，分散劑可以是吐溫，OP-10，用來分散菌團(tuán)）的三角瓶中，上旋轉(zhuǎn)式搖床(200 r/min)充分振蕩(60 min),即成母液菌懸液（基礎(chǔ)液）。用移液槍分別吸取1 ml上述母液菌懸液加入9 ml無菌水中，按1∶10進(jìn)行系列稀釋，分別得到10-1、10-2、10-3三個稀釋度，在事先倒好的PDA培養(yǎng)基上均勻涂板，每個稀釋度重復(fù)3次，同時以空白作對照，于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)約4～5 d，待長出白色小點狀菌落時開始記數(shù)（注：空白對照培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落數(shù)時，結(jié)果無效，應(yīng)重做）。

1.3.3.3 霉菌數(shù)的計算

選擇菌落數(shù)均勻的培養(yǎng)皿進(jìn)行計算，同稀釋度的2個培養(yǎng)皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即每克樣品中含有的霉菌數(shù)。

1.3.4 體外培養(yǎng)消化試驗

1.3.4.1 試驗動物

本試驗選擇3只體重、年齡相近，健康無疾病，且裝有永久性瘤胃瘺管的成年山羊作為瘤胃液的供給體。瘤胃瘺管內(nèi)徑為45 mm，每只羊體重為(25±1)kg左右。

1.3.4.2 干物質(zhì)降解率測定方法

1.3.4.2.1 濾袋和樣品準(zhǔn)備

①將F57濾袋在丙酮中浸泡3～5 min，然后放在通風(fēng)櫥中自然干燥。用丙酮浸泡的目的是除掉表面劑，否則會影響微生物消化。對每個F57濾袋稱重，記錄質(zhì)量(m1)。將天平歸零，并向濾袋中直接稱取0.25 g樣品(m)。

②將每個濾袋封口，并放入Daisy II體外模擬培養(yǎng)箱消化罐中(每個罐中最多可以放25個樣品)。樣品應(yīng)平衡分布在消化罐分隔的兩邊。同時至少包括一個空白濾袋，用于確定測定結(jié)果校正因子(C1)。

1.3.4.2.2 混合緩沖溶液準(zhǔn)備(每個消化罐)

①將緩沖溶液A和B進(jìn)行預(yù)熱(39℃)。在容器中先加緩沖溶液A 1 330 ml，然后向其中加266 ml緩沖溶液B（比例為1∶5)。 緩沖溶液A和B的用量要準(zhǔn)確，以確保39℃混合溶液的pH值為6.8。向每個裝有樣品濾袋的消化罐中加1 600 ml混合緩沖溶液。

②將裝有樣品和緩沖溶液的消化罐放入Dai?sy II體外模擬培養(yǎng)箱，加熱和攪拌。讓消化罐溫度平衡至少20～30 min。同時準(zhǔn)備瘤胃接種物。

1.3.4.2.3 接種物準(zhǔn)備與培養(yǎng)（所有的玻璃器皿要保持在39℃)

①向2個熱水瓶中加入39℃水對其進(jìn)行預(yù)熱。在收集瘤胃液前將熱水倒掉。采用適宜的采集步驟，取至少2 000 ml瘤胃液，放入熱水瓶中。

②將瘤胃液從熱水瓶中倒出，放到混合器中。向混合器內(nèi)沖入CO2氣體并快速混合30 s?；旌系哪康氖欠乐刮⑸镳じ剑_保用于體外消化微生物的活性。將混合好的瘤胃液用4層奶酪布過濾到5 L容量瓶中(預(yù)熱39℃)。用4層新的奶酪布過濾將其他熱水瓶中的瘤胃液過濾到同一個5 L容量瓶中。容量瓶要持續(xù)充CO2。

③用量筒量取400 ml瘤胃培養(yǎng)物。從Daisy II體外模擬培養(yǎng)箱中取出一個消化罐，向緩沖溶液和樣品中加入量取好的400 ml培養(yǎng)物。然后向消化罐中充CO2氣體30 s，蓋好蓋子。

④所有用到的消化罐都按照上述步驟重復(fù)操作。注意：不要讓CO2氣體通過緩沖后的培養(yǎng)物鼓泡，而是利用CO2在消化罐上方形成氣體層。

⑤培養(yǎng)（確保加熱和攪拌開關(guān)已經(jīng)打開）48 h后測定體外真降解率結(jié)果。Daisy II體外模擬培養(yǎng)箱將始終保持溫度(39.5±0.5)℃。

⑥培養(yǎng)結(jié)束，取出消化罐，排干液體。用冷自來水沖洗至水澄清。記錄體外消化后濾袋+殘渣質(zhì)量（m2）。

1.3.4.3 計算

式中：m1——濾袋質(zhì)量(g)；

m——樣品質(zhì)量(g)；

m2——體外消化后濾袋+殘渣質(zhì)量(g)；

C1——空白袋校正系數(shù)(烘箱干燥后質(zhì)量/開始空白濾袋質(zhì)量)。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理

本論文中數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 苜蓿草捆貯藏過程霉菌數(shù)量分析

本試驗將不同處理的苜蓿草捆放在貯草棚中進(jìn)行貯藏，在貯藏360 d時，對各處理苜蓿草捆進(jìn)行取樣并對其霉菌進(jìn)行測定，比較分析不同貯藏因素對霉菌數(shù)量變化影響，從而確定苜蓿最佳貯藏方式。

由表2可知，不同處理苜蓿草捆中霉菌數(shù)量不同，其中處理5中霉菌數(shù)量最少。水分含量越大的處理越容易發(fā)霉；對于密度因素來說，密度太大或太小均不太理想，只有打捆密度為150 kg/m3時效果最好；CaO的添加可有效抑制霉菌的生長，隨著劑量的增大，霉菌數(shù)量顯著減少。從極差R值上看，CaO添加量對貯藏期內(nèi)苜蓿草捆影響較顯著，霉菌數(shù)量越少，飼草品質(zhì)越好，所以含水量20%，密度為150 kg/m3，CaO添加量為2%為最佳處理。

表2 苜蓿草捆中霉菌變化

2.2 體外消化特性研究

為了進(jìn)一步評價飼草品質(zhì)，將霉菌試驗中霉菌數(shù)量較少的處理挑出，測定其降解率。降解率是指飼草料被動物采食，消化吸收的部分占采食飼草總量的百分比。通常我們以體外降解率來衡量飼草的好壞。干物質(zhì)降解率越高，牧草品質(zhì)越好。苜蓿草捆在貯藏過程中，受諸多因素的影響，其中營養(yǎng)成分會發(fā)生很大變化，不同處理的草捆，貯藏一段時間后，品質(zhì)差異性顯著，并且體外消化特性會隨著品質(zhì)的不同而產(chǎn)生變化，因此，對于體外消化特性的深入了解，可以從不同角度來評定草捆品質(zhì)優(yōu)劣。

本試驗將這些處理樣品進(jìn)行體外降解率48 h動態(tài)測定，經(jīng)公式(1)計算得到結(jié)果，從而更加全面地分析評價飼草品質(zhì)。

圖1 不同處理貯藏360 d時干物質(zhì)降解率動態(tài)變化

如圖1所示，選擇處理3、處理4、處理5、處理9四個處理貯藏360 d時樣品為測定對象。培養(yǎng)1～3 h期間，各處理上升趨勢較為平緩，且各處理間差異并不顯著。3 h后，四個處理明顯呈現(xiàn)兩種變化趨勢，處理5與處理9在3～12 h期間總體呈現(xiàn)上升趨勢，其中3～6 h期間變化幅度增大，而在6～12 h期間變化幅度稍有減緩；處理3與處理4變化較為相似，均呈現(xiàn)直線上升趨勢，但幅度小于處理5與處理9。培養(yǎng)12 h后，處理3、處理4、處理5、處理9四個處理呈現(xiàn)出不同變化趨勢，此時，處理4、處理5、處理9三個處理變化幅度均大于處理3。培養(yǎng)48 h后，4個處理降解率均達(dá)到最大值，此時，降解率大小順序為：處理5＞處理9＞處理4＞處理3。

綜上所述，對于處理3、處理4、處理5、處理9四個不同貯藏期樣品而言，品質(zhì)的差異直接導(dǎo)致體外降解率變化趨勢的不同。各處理樣品，分別在培養(yǎng)3 h，12 h后呈現(xiàn)降解率升高，這是由于動物對飼草中不同物質(zhì)消化特性不同，且各處理均在培養(yǎng)48 h后，降解率達(dá)到最大值。

3 討論

3.1 苜蓿草捆中微生物變化規(guī)律

苜蓿刈割時，一般正處在高溫高濕的季節(jié)，極易導(dǎo)致苜蓿的發(fā)霉變質(zhì)。飼草料中微生物的存在一定意義上降低了其品質(zhì)。霉菌數(shù)量的多少可以反映飼草料的霉變程度，在適宜的溫濕度條件下，微生物可大量繁殖。霉菌具有產(chǎn)孢量大和傳播速度快等特點。當(dāng)苜蓿草捆中霉菌數(shù)量增多時，會產(chǎn)生大量的熱，熱量積聚溫度升高使得苜蓿中水分散失速度加快和霉菌孢子失活；霉菌繁殖到一定階段，其數(shù)量會呈現(xiàn)減少趨勢。

3.2 防霉劑的應(yīng)用效果分析

飼草料中存在的霉菌，不僅分解其營養(yǎng)成分，降低飼料飼用價值，而且霉菌自身所產(chǎn)生的一些代謝產(chǎn)物會嚴(yán)重影響人畜健康。為了解決防霉這一難題，各種防霉劑的應(yīng)用成為飼料行業(yè)研究的熱點。天然防霉劑與其他防霉劑相比，具有環(huán)保低污染、廣譜殺菌力強等特點。因此，在全球倡導(dǎo)綠色環(huán)保的大背景下，開發(fā)低毒高效且廉價的防霉劑變得尤為重要。本試驗所選用CaO為防霉劑，其優(yōu)質(zhì)廉價，易于購得。如果配合適宜的打捆密度及含水量可有效降低草捆中霉菌的數(shù)量，提高營養(yǎng)品質(zhì)。試驗表明，添加CaO處理的苜蓿草捆較未添加CaO處理的苜蓿草捆，霉菌數(shù)量得到有效抑制。其中，添加2%CaO處理的苜蓿草捆，防霉效果最好。

3.3 苜蓿草捆體外消化特性研究

DM降解率反映了飼草料在瘤胃中消化的難易程度，它與飼料蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉降解率都存在一定的相關(guān)性。試驗發(fā)現(xiàn)，適宜的含水量、打捆密度配合添加CaO進(jìn)行打捆貯藏，能夠有效保存草捆營養(yǎng)成分，提高DM降解率。其中以含水量為20%，打捆密度為150 kg/m3，添加2%CaO處理DM降解率最高。

4 結(jié)論

本論文通過試驗分析，得出以下結(jié)論：

①苜蓿草捆經(jīng)CaO處理后進(jìn)行貯藏，可顯著降低草捆中霉菌數(shù)量，其中添加2%CaO處理的苜蓿草捆效果最好。

②苜蓿草捆含水量為20%，打捆密度為150 kg/m3，2%CaO的處理，消化特性較好。

（參考文獻(xiàn)若干篇，刊略，需者可函索）