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(青島大學醫(yī)學院病原生物學實驗室，山東 青島 266071)

乙型肝炎病毒(HBV)可通過血源、性和母嬰垂直途徑等傳播，其中母嬰垂直傳播約占我國HBV感染者的30%～50%，每年約有80萬新生兒通過母嬰傳播成為HBV表面抗原(HBsAg)攜帶者。HBV母嬰垂直傳播可發(fā)生于產前、產時和產后等，其中，在妊娠期間病毒通過胎盤屏障引起胎兒宮內感染是母嬰垂直傳播最重要的方式。如果出生的嬰兒為女性， 未來會以同樣的方式使其后代獲得感染，這可能是我國人群HBV感染率居高不下的重要原因之一。 因此， 研究HBV感染孕婦發(fā)生宮內感染的風險度及其對胎兒的危害，對采取有效的干預措施阻斷HBV宮內感染或減輕損傷具有重要的意義。本文選取83例HBV感染孕婦，檢測其新生兒臍帶血中HBsAg, 并同時檢測臍帶血淋巴細胞染色體畸變情況，旨在探討HBV宮內感染與新生兒臍帶血淋巴細胞染色體畸變的相關性。 現將結果報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

取淄博市婦幼保健院住院分娩HBV感染孕產婦83例，年齡22～40歲，其中HBsAg單項陽性者12例，HBsAg、抗-HBc雙項陽性者8例，HBsAg、HBeAg雙項陽性者24例，HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項陽性者27例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性者12例；1年內無X線內外照射史及化學物質接觸史。共分娩出新生兒83例，男43例，女40例。對照組為隨機選取的20例無HBV感染的孕產婦及其所生新生兒。

1.2 臍帶血采集與處理

胎兒娩出后，對臍帶進行常規(guī)消毒，用一次性注射器取臍靜脈血3 mL，立即接種入1640培養(yǎng)基，并同時保留抗凝血送檢。

1.3 檢測方法

1.3.1新生兒臍帶血HBsAg檢測 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測新生兒臍帶血HBsAg，診斷試劑盒由英科新創(chuàng)科技有限公司生產。操作步驟與結果判斷嚴格參照說明書的要求。以新生兒臍帶血中HBsAg陽性作為宮內感染診斷標準。

1.3.2外周血淋巴細胞染色體制備 采用廣州一生駿1640培養(yǎng)基與廣州達暉1640培養(yǎng)基兩線培養(yǎng)。臍帶血接種后置37 ℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)69～72 h，加50 mg/L的秋水仙素40 μL搖勻，再培養(yǎng)30 min后收獲。常規(guī)低滲、預固定、固定、制片、染色。

1.4 染色體畸變的判斷標準

顯微鏡下每例標本每線各計數50個中期細胞分裂象，觀察、記錄其染色體畸變情況，并進行統計學分析。

2 結 果

本文83例HBV感染產婦新生兒臍帶血中共檢出宮內感染41例，感染率為49.4%；對照組20例新生兒中，未檢出HBV宮內感染。12例HBsAg單項陽性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽性者2例，占16.7%；8例HBsAg、抗-HBc雙項陽性孕婦的新生兒中，未檢出HBsAg陽性者；24例HBsAg、HBeAg雙項陽性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽性者12例，占50.0%；27例HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項陽性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽性者20例，占74%；12例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性孕婦所生的新生兒中，檢出HBsAg陽性者7例，占58.3%。

將83例新生兒分為宮內感染組和未感染組，宮內感染組41例臍帶血淋巴細胞均觀察到染色體畸變，6例染色體畸變率<3%，24例染色體畸變率為3%～5%，11例染色體畸變率>5%，其中1例染色體數目異常；未感染組29例發(fā)生染色體畸變者占69%，3例染色體畸變率<3%，19例染色體畸變率為3%～5%，7例染色體畸變率>5%；對照組14例發(fā)現為3%～5%畸變(70%)，其畸變率均<3%。感染組臍帶血淋巴細胞染色體畸變風險高于非感染組及對照組(χ2=27.03,P<0.01)。

3 討 論

目前，臨床常用HBV感染的實驗室診斷的指標仍為“兩對半”，由于其中的3種抗體(抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe)均為IgG，可通過胎盤，故臍帶血HBsAg陽性是診斷胎兒宮內感染的一個重要指標[1]。刁奇志等[2]的研究結果進一步證實，臍帶血HBsAg陽性新生兒外周血HBV DNA均為陽性，并且臍帶血采集簡單，對新生兒無創(chuàng)傷，因此，用臍帶血HBV標志物作為篩查胎兒宮內感染指標已得到廣泛認可。本研究結果顯示，HBV感染孕婦胎兒獲得先天性感染的概率可高達近50%，與部分文獻報道的結果一致。HBV先天性感染的嬰兒治愈率非常低，其成年后一旦發(fā)病，90%左右都呈慢性病程，愈后較差，與成年人HBV感染大多呈急性病程形成鮮明的反差。因此，我國防治乙型肝炎的重點在于有效阻斷母嬰垂直傳播，包括新生兒強制接種乙型肝炎疫苗及高效價HBV抗血清的應用等。

核型分析結果顯示， 41例先天性感染的新生兒，其臍帶血淋巴細胞染色體畸變發(fā)生率為100%，高于未感染組的69%，統計學分析有顯著差異,未感染組與對照組染色體畸變發(fā)生率無顯著差異；但是對照組染色體畸變率在1%～3%之間，感染組臍帶血染色體畸變率>3%的構成比高于未感染組; 并且感染組中有1例發(fā)生染色體數目異常, 表明臍帶血染色體畸變的發(fā)生與HBV宮內感染密切相關。 HBV導致染色體畸變可能機制如下。①患有乙肝的孕婦可以通過胎盤將HBV傳給胎兒，HBV通過抑制和干擾胎兒細胞 DNA的合成而導致某些染色體發(fā)生斷裂、重接或缺失等畸變。②基因性傳播，即在受精卵形成之前，孕婦體內的HBV DNA已整合到卵細胞的DNA上，并使受精卵的染色體受到損害，也可能HBV在生殖細胞分裂過程中介入，由此導致新生兒的染色體發(fā)生畸變甚至形成嵌合型或者純合型染色體畸變(包括結構異常和數目異常)。

本文結果顯示，未感染組臍血淋巴細胞的畸變構成比與對照組相似，但畸變率明顯增高，其原因為：雖然卵細胞未整合HBV DNA，但是HBV感染孕婦卵細胞質量下降，使受精卵在分裂過程中出現各種類型的畸變，具體原因有待進一步探討。

正常人淋巴細胞染色體畸變率較低，大約為0.55%～ 0.58%，在受到射線、化學物質、病毒等因素刺激后會引發(fā)染色體畸變，使畸變率增加[3]；也有報道新生兒臍帶血淋巴細胞染色體畸變率可達到1%左右[4]。本研究結果顯示，對照組新生兒臍帶血淋巴細胞染色體畸變率為1%～3%，高于文獻報道的結果，分析其原因可能為：①本研究僅以孕婦有無HBV感染為分組依據，未考慮其他導致染色體損傷的理化因素；②不同實驗室判斷標準略有差異，有一定的主觀性。有待進一步研究探討。

[1] 趙澄泉,戴淑真,邵濟鈞. 先天性巨細胞病毒、乙型肝炎病毒和弓形體感染的研究[J]. 青島醫(yī)學院學報, 1991,27(2):133-137.

[2] 刁奇志,張丹,王代永. 臍帶血乙型肝炎標志物篩查乙型肝炎病毒宮內感染的探討[J]. 中國病原生物學雜志, 2009,4(1):14-15.

[3] 周煥庚,夏家輝,張思仲. 人類染色體[M]. 北京:科學出版社, 1987:369-371.

[5] 林寶寧,趙玲玲,畢風華. 2 269例新生兒臍帶血染色體分析[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 1997,4:35-36.