劉愛(ài)華

RRM1在宮頸癌中的表達(dá)及意義

劉愛(ài)華

目的 探討RRM1在宮頸癌組織中的表達(dá)水平與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法 用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)35例宮頸癌組織、28例宮頸上皮內(nèi)瘤變組織(CIN)和10例正常宮頸組織中RRM1 mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 宮頸癌組織中RRM1 mRNA的表達(dá)顯著高于正常宮頸和CIN組織(P＜0.05)。宮頸癌組織中RRM1的表達(dá)水平與分化程度相關(guān), 隨著宮頸癌組織分化程度的降低RRM1的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 RRM1在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,有望成為宮頸癌新的早期診斷指標(biāo)。

宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；RRM1

在女性的惡性腫瘤中, 宮頸癌為女性生殖道腫瘤的首位。目前認(rèn)為, 腫瘤的發(fā)生與DNA修復(fù)基因的修復(fù)能力下降密切相關(guān)。RRM1基因?qū)儆谛陆l(fā)現(xiàn)的DNA修復(fù)基因, 它為DNA修復(fù)提供必須的前體。因此研究RRM1的表達(dá)水平與宮頸癌的發(fā)生、預(yù)后的關(guān)系有重要的臨床意義。作者收集宮頸癌患者手術(shù)切除的標(biāo)本, 同時(shí)收集正常宮頸組織及不典型增生組織(CIN)作為對(duì)照, 通過(guò)RT-PCR方法在mRNA水平上了解RRM1在宮頸癌組織中的表達(dá)情況, 探討其與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 RT-PCR標(biāo)本：35例新鮮宮頸癌組織標(biāo)本取自青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科2009年1月至2010年7月因?qū)m頸癌行手術(shù)治療的患者, 臨床分期按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000 年修訂的標(biāo)準(zhǔn), I期15例, II期12例, III期8例。宮頸癌病理分級(jí)按WHO的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn), 高分化11例, 中分化11例, 低分化13例。另取宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)標(biāo)本28例(其中CIN I 5例, CIN II 11例, CIN III 12例), 因子宮肌瘤行宮頸切除手術(shù)患者的正常宮頸組織10例, 新鮮標(biāo)本凍存于-80℃超低溫冰箱備用。

1.2 主要試劑 Trizol為Gibico公司產(chǎn)品, 反轉(zhuǎn)錄試劑盒為Fermentas公司產(chǎn)品。引物序列：RRM1(265bp)：上游引物(5’-TGT GGA GAT GGC TGT GAC-3’), 下游引物(5’- CAG GAT CCA CAC ATC AGA CA -3’)； β-actin(229 bp)：上游引物(5’-GGA CTT CGA GCA AGA GAT GG-3’), 下游引物(5’-TGT GTT GGC GTA CAG GTC TTT G-3’)。 引物由北京賽百盛基因技術(shù)有限公司合成。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 RNA提取和RT-PCR：取新鮮宮頸鱗癌組織80～100 mg 于液氮中速凍、玻璃勻漿器徹底勻漿, 按Trizol試劑盒說(shuō)明書(shū)裂解抽提總RNA、異丙醇沉淀、DEPC水溶解、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR反應(yīng)條件為：預(yù)變性94℃ 5 min；擴(kuò)增反應(yīng)變性94℃, 30 s, 退火溫度RRM1為55℃, β-actin為58℃, 45 s, 延伸72℃, 45 s, 共30個(gè)循環(huán)；最后延伸72℃, 5 min。取5 μl PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于含5 mg/l溴化乙啶(EB)的1.8%瓊脂糖凝膠電泳, 凝膠圖形分析儀計(jì)算平均熒光強(qiáng)度, 以β-actin作內(nèi)參照, 計(jì)算相對(duì)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0分析軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。采用方差分析、Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)及Fisher精確檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RRM1 mRNA在正常宮頸上皮、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá) 宮頸癌組織中RRM1 mRNA的表達(dá)水平(0.65±0.37)明顯高于正常宮頸組織(0.28±0.13)和CIN組織(0.47±0.21)； CIN組織中mRNA表達(dá)水平也高于正常宮頸組織；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 RRM1 mRNA表達(dá)與CIN分級(jí)的關(guān)系 RRM1 mRNA在CIN I級(jí)組織中僅有弱陽(yáng)性表達(dá)(2/10, 20.0%), 在CIN II級(jí)和CIN III級(jí)組織中既有弱陽(yáng)性表達(dá)也有陽(yáng)性表達(dá), RRM1 mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率分別為41.7%(5/12, CIN II級(jí))和71.4%(10/14, CIN III級(jí))。隨著CIN組織分級(jí)的增加, RRM1 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度也增加；不同分級(jí)的CIN組織中RRM1 mRNA表達(dá)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

近年來(lái), 人們發(fā)現(xiàn)DNA修復(fù)和復(fù)制的缺陷是細(xì)胞發(fā)生癌變的重要機(jī)制［1］。如果核苷酸損傷未得到及時(shí)、有效的修復(fù)可引起基因不穩(wěn)定性的增加, 進(jìn)而引起腫瘤的發(fā)生, 故可以推斷DNA損傷修復(fù)能力與癌癥發(fā)生之間存在一定的關(guān)系。RRM1是最近被廣泛關(guān)注的一個(gè)基因, 作為核糖核苷酸還原酶的其中一個(gè)亞單位, 在DNA修復(fù)、細(xì)胞的增殖、惡性腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移等眾多細(xì)胞活動(dòng)中扮演著重要角色［2］。

本研究采用RT-PCR方法檢測(cè)RRM1在宮頸癌中的表達(dá), 結(jié)果顯示, RRM1 mRNA在正常宮頸上皮、CIN 組織中和宮頸癌中的表達(dá)程度呈進(jìn)行性的增加, 表明宮頸癌組織中存在基因損傷使DNA修復(fù)基因的表達(dá)增加, 這一結(jié)果符合癌變模型假設(shè), 認(rèn)為癌是由于進(jìn)行性基因損傷在上皮細(xì)胞內(nèi)積聚的結(jié)果。因此, 本研究提示RRM1表達(dá)的增多與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。RRM1在CIN組織中的表達(dá)與CIN的分級(jí)有關(guān), CIN組織分級(jí)越高, RRM1的表達(dá)越多, 說(shuō)明RRM1參與了宮頸癌的早期發(fā)展過(guò)程, 提示其有可能成為較好的宮頸癌早期診斷的分子標(biāo)記物。

［1］ Burton TR, Kashour T, Wright JA, et al.Cellular signaling pathways affect the function of ribonucleotide reductase mRNA binding proteins: mRNA stabilization, drug resistance, and malignancy (Review) .Int J Oncol, 2003, 22(1):21-31.

［2］ Jordan A, Reichard P.Ribonucleotide reductases .Annu Rev Biochem.1998(67):71-98.

265600 山東省蓬萊市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科