劉玖玖

CDC6、MCM7及HPV16E7在宮頸鱗癌中的表達(dá)

劉玖玖

目的 觀察CDC6、MCM7及HPV16E7在宮頸鱗癌中的表達(dá)異常情況和CDC6、MCM7的表達(dá)相關(guān)性。方法 采用免疫組化方法對(duì)12例正常宮頸組織, 44例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN), 32例子宮鱗癌組織進(jìn)行研究。結(jié)果 三者隨著病變的升級(jí)表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高, 且在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ與子宮鱗癌組織相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 且CDC6、MCM7在宮鱗癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.712, P＜0.05)。結(jié)論 通過對(duì)以上3個(gè)因子的檢測(cè), 輔助臨床宮頸癌的診斷與治療, 并對(duì)預(yù)后的評(píng)價(jià)起著重要的指導(dǎo)作用。

CDC6；MCM7；HPV16E7；宮頸鱗癌

目前認(rèn)為宮頸癌及癌前病變是一個(gè)多因素、多步驟的疾病, 而HPV感染是其主要病因, 99.7%以上的宮頸癌合并HPV感染, 其中以HPV16最常見, 占40%～60%。本研究采用免疫組化方法對(duì)不同宮頸組織中三者的表達(dá)情況進(jìn)行研究, 以探討它們?cè)趯m頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本 取自本院婦科2008年1月～2009年8月的住院患者中正常宮頸組織12例和經(jīng)病理證實(shí)的CIN I～Ⅱ12例、CINⅢ32例、子宮鱗癌32例進(jìn)行研究, 鱗癌患者術(shù)前均未經(jīng)化療和放療。

1.2 試劑 均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 免疫組織化學(xué)法采用S-P法, 一抗?jié)舛菴DC6為1：100, MCM7為1：200, HPV16 E7為1：50, 采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 三者陽(yáng)性表達(dá)按著色程度分為：染色與背景相似者為0分, 著色淺、略高于背景者為1分, 中度著色、明顯高于背景者為2分, 強(qiáng)染、著深棕色者為3分。按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量分為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分, 10%～50%為1分, 51%～75%為2分, ＞75%為3分。兩項(xiàng)相加后分4級(jí)：(-)為0～1分, (+)為2分, (+ +)為3～4分, (+ + +)≥5分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 根據(jù)資料類型采用χ2檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CDC6、MCM7、HPVl6E7染色結(jié)果 CDC6、MCM7陽(yáng)性表達(dá)多定位于細(xì)胞漿和/(或)細(xì)胞核, 呈黃色或棕黃色, HPVl6E7 陽(yáng)性細(xì)胞主要彌漫性或散在性分布, 細(xì)胞核染色呈黃色或棕黃色, 較深。

2.2 CDC6、MCM7、HPVl6E7在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ、子宮鱗癌組織中的表達(dá)情況 CDC6的表達(dá)陽(yáng)性率分別為16.7%、41.7%、71.9%、87.5%；MCM7分別為16.7%、50%、78.1%、90.6%；HPV16E7分別為25%、33.3%、81.3%、93.75%。

2.3 CDC6、MCM7在不同宮頸組織中的表達(dá)相關(guān)性 兩者在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ、子宮鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.712, P＜0.05)。

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤, 嚴(yán)重威脅女性的健康和生命, 近年來其發(fā)病率不但上升且有年輕化趨勢(shì)。微小染色體蛋白(MCMs)決定著染色體的復(fù)制能力, MCM7水平的高低直接反映了細(xì)胞的增殖活性, 檢測(cè)它將有助于將不典型性增生細(xì)胞與那些反應(yīng)性改變的細(xì)胞區(qū)分開來。Ohtain等提出MCMs蛋白的表達(dá)調(diào)控主要是通過E2F結(jié)合到啟動(dòng)子的多個(gè)E2F位點(diǎn)。MCM裝載因子CDC6與ATP的結(jié)合和水解對(duì)于DNA的復(fù)制是必需的, 受E2F轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。目前公認(rèn)HPV病毒DNA整合進(jìn)入宿主細(xì)胞基因組中是細(xì)胞發(fā)生惡變的重要步驟, E7蛋白是HPV的主要轉(zhuǎn)化蛋白,與控制細(xì)胞周期有關(guān)的腫瘤抑制蛋白視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(Rb)親和力極高, E7與Rb結(jié)合使Rb-E2F復(fù)合物解離, 導(dǎo)致細(xì)胞周期失控而發(fā)生永生化［1］, 還可使游離的E2F結(jié)合到啟動(dòng)子的多個(gè)E2F位點(diǎn), 又可上調(diào)MCM7、CDC6的表達(dá), 進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)和發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)說明宮頸由正常向浸潤(rùn)癌進(jìn)展的過程中有越來越多的細(xì)胞進(jìn)入增殖周期, 可見MCM7、CDC6、HPV16E7水平的高低直接反映了細(xì)胞的增殖活性, 且三者的高表達(dá)是宮頸癌發(fā)生的早期事件, 與Brake等及Murphy 的研究結(jié)果相似, 同時(shí)也證實(shí)了兩者在不同宮頸組織中的表達(dá)呈正相關(guān), 提示它們?cè)趯m頸炎-癌前病變-宮頸癌的發(fā)展過程中具有協(xié)同作用。因此可將三者作為對(duì)宮頸癌前病變和宮頸癌有診斷價(jià)值的標(biāo)記物, 它們?cè)诜从衬[瘤細(xì)胞的增殖活性方面有一致性, 其聯(lián)合檢測(cè)將有助于進(jìn)一步完善宮頸癌前病變的篩查和診斷。

4 展望

MCM7在評(píng)價(jià)腫瘤增殖和診斷、預(yù)后上是較為可靠和有用的指標(biāo), CDC6作為MCM裝載因子, 通過對(duì)兩者的聯(lián)合檢測(cè), 可以輔助臨床腫瘤疾病的診斷與治療, 并對(duì)預(yù)后的評(píng)價(jià)起著重要的指導(dǎo)作用, E7蛋白可作為發(fā)展HPV16相關(guān)宮頸癌及癌前病變治療性疫苗的理想靶抗原。

［1］ Brake T, Joseph PC,Daniel G, et a1.Comperative analysis of cervical cancer in women and in a human papillomavirus-trans-genic mouse model: identification of minianchromosome maintenance protein7 as an informative biomarker for humman cervical cancer.Cancer Res, 2010, 63:8173-8180.

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