李瑞麗 張穎 吳瑞霞

進(jìn)入21世紀(jì)以后, 我國血液ELISA檢驗逐步由手工操作過渡為更方便、準(zhǔn)確的自動化儀器檢測。但在血液ELISA自動化檢測過程中, 如果一些細(xì)微之處注意不到就可能造成假陽性、假陰性的產(chǎn)生, 影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。作者根據(jù)實際工作經(jīng)驗就ELISA試驗檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差的常見原因進(jìn)行總結(jié)分析, 以確保結(jié)果的準(zhǔn)確, 提高血液檢測質(zhì)量。

1 人員與環(huán)境

1.1 操作人員素質(zhì) 自動化儀器檢測操作人員應(yīng)具備扎實、過硬的血液ELISA檢驗基礎(chǔ)知識和操作技能, 對計算機(jī)、機(jī)械、電子與光電技術(shù)和儀器的工作原理、程序有一定的了解,以便出現(xiàn)問題時及時應(yīng)對。

1.2 熟讀全自動儀器的說明書 徹底了解儀器的工作原理和使用注意事項, 儀器和用戶軟件的使用方法、儀器的維護(hù)程序與方法、使用中可能出現(xiàn)的故障及可能的原因等。

1.3 室溫保證 實驗室需配備空調(diào)、暖氣、加濕器等設(shè)備,保證室溫在規(guī)定的范圍內(nèi), 每天測量并記錄室內(nèi)溫濕度, 以防過冷或過熱造成儀器報警不運(yùn)行。

2 血液標(biāo)本的處理

2.1 ELISA檢驗多用血清(血漿)標(biāo)本, 標(biāo)本的處理直接影響儀器的運(yùn)行和檢測結(jié)果, 應(yīng)控制離心轉(zhuǎn)速和離心時間, 使血清(血漿)標(biāo)本離心分離徹底。

2.2 血液標(biāo)本離心后, 應(yīng)檢查標(biāo)本的離心情況, 防止血凝塊、血細(xì)胞、纖維蛋白懸浮在血清(血漿)中, 避免全自動加樣器向酶標(biāo)板微孔中加入上述物質(zhì), 造成洗板頭的吸液針堵塞而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

2.3 不能立即檢測的血液標(biāo)本放在2～8℃冰箱儲存, 最好使用可監(jiān)控報警的專用冰箱, 以防溫度過高或過低對血液標(biāo)本造成影響。

3 檢驗試劑的準(zhǔn)備

3.1 查看試劑 應(yīng)檢查試劑的包裝是否破損, 污染、潮濕；試劑是否渾濁、變色；試劑是否在有效期。遇到這些情況均應(yīng)重新更換新的試劑。

3.2 試劑平衡 取出試劑盒中的酶標(biāo)板和各組分, 在室溫平衡30 min后, 再開啟酶標(biāo)板和各組分的包裝, 開始使用。試劑是否平衡、平衡時間是否足夠?qū)⒅苯佑绊懺噭θ蹶栃詷?biāo)本的檢出。

3.3 酶標(biāo)板檢查 如果酶標(biāo)板框架不規(guī)整、微孔條不平整,微孔內(nèi)有塑料屑、泡沫屑等異物, 將影響洗板, 導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

3.4 試劑盒清洗 全自動儀器使用的試劑盒應(yīng)每周用刷子刷洗干凈, 蒸餾水沖洗后晾干備用。陰陽對照及質(zhì)控品也要及時更換, 以防時間過久影響實驗結(jié)果。

4 標(biāo)本加樣

4.1 自動化儀器使用的一次性加樣針要把針盒和一次性針放置到位, 要注意檢查一次性針是否變形或不通。

4.2 注意觀察加樣針進(jìn)入酶標(biāo)板微孔的深度和分配速度,保證加樣時液體不濺出、不掛珠, 確保加樣準(zhǔn)確。

4.3 加樣后, 及時檢查酶標(biāo)板的加樣情況, 查看微孔中有無血細(xì)胞、血凝塊、纖維蛋白；標(biāo)本量是否足夠；應(yīng)變色的微孔是否都已變色。如有異常, 應(yīng)手工處理。

5 酶標(biāo)板洗板

5.1 各廠家的洗液是根據(jù)各自試劑的條件配制的, 因此采用不配套的洗液常會得到不正常的反應(yīng)結(jié)果, 包括本底升高,所以不同廠家的洗液不能混用。

5.2 洗液應(yīng)按規(guī)定的倍數(shù)稀釋使用。試劑盒提供的洗液是濃縮的, 過多稀釋洗液, 會影響洗液的效果, 而使反應(yīng)的本底升高。反之造成假陰性。

5.3 稀釋洗液的水應(yīng)該是新鮮的蒸餾水, 如果存放時間過長或受到灰塵等污染, 水中含鈣鎂離子增多使實驗本底增高,灰塵等異物容易堵塞洗板針孔造成花板。

5.4 洗板時, 洗液應(yīng)注滿每孔, 如果加入的洗液液量不夠,極易產(chǎn)生高值陰性和假陽性。不同試劑廠家的酶標(biāo)板孔規(guī)格不一樣, 洗板時一定要選擇配套的板模式進(jìn)行洗板, 以保證洗板效果。

5.5 嚴(yán)格按照說明書規(guī)定的次數(shù), 浸泡時間進(jìn)行洗板。如果次數(shù)少于規(guī)定要求, 沒有按設(shè)洗板浸泡時間, 會使孔內(nèi)多余的抗原(抗體)或酶結(jié)合物不能徹底去除, 引起本底升高和假陽性。

優(yōu)質(zhì)的試劑, 良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試驗檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。實際操作中, 除了選擇的優(yōu)良試劑、保證儀器設(shè)備的正常運(yùn)轉(zhuǎn)外, 必須嚴(yán)格執(zhí)行試劑操作說明, 認(rèn)真做好ELISA實驗的每一步, 掌握影響實驗檢測結(jié)果的各類因素以及解決辦法, 做好儀器設(shè)備的日常維護(hù)保養(yǎng)工作。必須以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)對待每一份檢測標(biāo)本, 才能保證檢測質(zhì)量和血液產(chǎn)品的安全。