林春蕾 郭傳勇

同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院消化科，上海 200072

原發(fā)性肝癌或肝細(xì)胞癌是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一，死亡率高，預(yù)后較差。其發(fā)生發(fā)展是一系列多基因參與、多步驟協(xié)同的復(fù)雜過程，目前已在DNA、miRNA、信號(hào)通路、蛋白等多個(gè)層面研究其防治措施。肝癌的發(fā)生機(jī)制目前尚未完全闡明，公認(rèn)的機(jī)制主要有：癌變由肝臟干細(xì)胞異常分化引起；癌變由成熟肝細(xì)胞去分化而致。其中涉及到癌基因的激活，抑癌基因的抑制及多種信號(hào)通路、蛋白的激活與抑制等。

白藜蘆醇（3，5，4′-trihy-droxy-trails-stilbene）是一種自然產(chǎn)生的含有芪類結(jié)構(gòu)非黃酮類多酚化合物，主要在紅葡萄酒、花生中發(fā)現(xiàn)[1]。在過去的研究中發(fā)現(xiàn)Res 具有抗氧化[2]、抗炎[3]、抗衰老[4]、抗病毒[5]、降血糖[6]、止痛、平喘[7]等作用。有報(bào)道表明，Res對(duì)于青光眼[8]、胰腺炎[9]、骨關(guān)節(jié)炎[10]等疾病具有保護(hù)作用。它可以防止和治療心血管疾病[11]，對(duì)癌癥亦有防治作用，例如肝癌[12]。以下就近年來Res對(duì)肝臟腫瘤的防治的相關(guān)研究做一綜述。

1 體外研究

Res 已被證明能抑制人的多種肝癌細(xì)胞，例如HepG2[13-14]、Hep3B[13]、H22[15]、大鼠肝癌細(xì)胞 FAO[16]、H4IIE[17]、大鼠腹水肝癌細(xì)胞AH109A[18]等。Res 抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期有關(guān)。Sun等[15]證實(shí)Res對(duì)H22的生長(zhǎng)抑制作用是由于細(xì)胞凋亡，也可以通過激活半胱氨酸蛋白酶從而誘導(dǎo)H4IIE 細(xì)胞凋亡[17]。Kuo等[13]研究表明，T-Res 在濃度為 40～80 μmol/L時(shí)可以抑制p53 陽性的HepG2 細(xì)胞的生長(zhǎng)，但對(duì)于p53 陰性的Hep3B的生長(zhǎng)無明顯影響，這表明RES 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是依賴于p53 信號(hào)通路。此實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被阻滯于G1期時(shí)，凋亡相關(guān)蛋白P21的表達(dá)明顯增加。Notas等[19]則認(rèn)為T-Res 在0.1 μmol/L時(shí)可以通過對(duì)細(xì)胞周期G1和G2/M的阻滯而誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡。在相似的實(shí)驗(yàn)研究中，認(rèn)為Res通過其抗氧化作用，抑制肝癌細(xì)胞增殖。T-Res 在納摩爾濃度和匹摩爾濃度時(shí)，通過調(diào)節(jié)NO/NOS 系統(tǒng)，增加iNOS 和eNOS的表達(dá)，激活NOS，增加NO的表達(dá)，抑制NOS 酶從而起抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。在Res 誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡中的另一個(gè)重要的角色是微囊蛋白-1（CAV-1）。CAV-1是微囊家族的成員，在大多數(shù)人類腫瘤細(xì)胞中不表達(dá)或表達(dá)減少。CAV-1過表達(dá)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長(zhǎng)收到抑制[20]。Yang等[21]研究發(fā)現(xiàn)CAV-1 可以通過其膽固醇相關(guān)系統(tǒng)提高HepG2對(duì)Res的吸收，增加其抗增殖和促凋亡的作用。經(jīng)100 μmol/L Res 預(yù)處理的HepG2 細(xì)胞中CAV-1的表達(dá)增加，而CAV-1 可以負(fù)反饋提高Res的吸收，通過p38 絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路和caspase-3表達(dá)從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。經(jīng)100 μmol/L Res 處理后的細(xì)胞與未處理組相比，72 h后其凋亡明顯增加。此外，有報(bào)道表明，Res 在高濃度（100～200 μmol/L）時(shí)可以減少S 期的HepG2 細(xì)胞，但在低濃度（10～50 μmol/L）時(shí)可以增加S 期的HepG2 細(xì)胞[22]。徐凌等[23]研究發(fā)現(xiàn)Res能以劑量依賴方式拮抗肝細(xì)胞癌HepG2 細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步的研究提示Res 能顯著下調(diào)miR-151 和FAK mRNA表達(dá)，而miR-151 能促進(jìn)肝癌細(xì)胞的周期轉(zhuǎn)換，使肝癌細(xì)胞周期進(jìn)程明顯加快。Parekh等[24]研究發(fā)現(xiàn)，Res 可以通過減少細(xì)胞周期蛋白D1，調(diào)控P38MAPK、Akt 和Pak1的表達(dá)、活化等抑制HepG2 細(xì)胞的生長(zhǎng)。De L édinghen等[25]認(rèn)為Res 抑制肝癌細(xì)胞HepG2 增殖的作用機(jī)制涉及到受體后機(jī)制，與其細(xì)胞毒性或促凋亡作用無關(guān)。

此外，白藜蘆醇的化學(xué)防癌活動(dòng)可能涉及到細(xì)胞色素P450（CYP450）酶的抑制[26]。CYP450 在化學(xué)致癌的激活中發(fā)揮著重要作用。例如，在100 μmol/L時(shí)Res 可以通過與芳香烴受體結(jié)合，從而抑制小鼠肝癌HEPA 1c1c7 細(xì)胞中特丁基對(duì)苯二酚誘導(dǎo)的CYP1A1的活性。在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)Res對(duì)肝癌細(xì)胞株的侵襲性起抑制作用。Kozuki等[18]發(fā)現(xiàn)在低濃度時(shí)Res 能抑制大鼠腹水肝癌細(xì)胞AH109A的侵襲入侵，但在高濃度（25～200 μmol/L）時(shí)起抑制增殖作用。這一機(jī)制與其抗氧化作用有關(guān)，與其抗增殖作用相關(guān)性不大。Res的防癌的另一機(jī)制與其抗血管生成作用有關(guān)。例如，Zhang等[27]研究證實(shí)Res 在缺氧條件下可以抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，通過缺氧誘導(dǎo)因子-1A來抑制HepG2 細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2 體內(nèi)研究

目前許多研究表明Res 在動(dòng)物模型中起預(yù)防腫瘤的作用。Khanduja等[28]發(fā)現(xiàn)經(jīng)2.5 mg/kg Res 處理2周后給予二乙亞硝胺誘導(dǎo)的小鼠模型，其肝臟中的鳥氨酸脫羧酶（ODC）及環(huán)氧合酶較未經(jīng)Res 處理的小鼠模型明顯減少。ODC是多胺生物合成途徑中的限速酶，與細(xì)胞增殖和癌變密切相關(guān)[29]。而環(huán)氧合酶主要與炎癥反應(yīng)中前列腺素的形成、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、血管生成等有關(guān)[30]。Bishayee等[31]研究表明，按50～300 mg/kg的劑量連續(xù)口服白藜蘆醇20周后，與未處理組相比，二乙基亞硝胺及苯巴比妥誘導(dǎo)的大鼠的肝細(xì)胞結(jié)節(jié)的發(fā)生、數(shù)量及種類等明顯減少。Res通過上調(diào)促凋亡蛋白Bax 和下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2 起抗癌作用。Res的化學(xué)防癌作用也涉及降低氧化應(yīng)激，抑制炎癥反應(yīng)介導(dǎo)的核因子E2相關(guān)因子（Nrf2）[32]、熱休克蛋白（HSP70）、COX-2 和 NF-κB[33]等。但有實(shí)驗(yàn)表明，Res 處理后并不能阻止多氯聯(lián)苯（PCBs）誘導(dǎo)的大鼠肝臟腫瘤[34]。如上所述，體外實(shí)驗(yàn)研究表明Res是CYP450 酶抑制劑。Canistro等[35]研究Res 經(jīng)腹腔注射（50 mg/kg 連續(xù)7d）對(duì)小鼠肝外源性代謝酶的影響發(fā)現(xiàn)Res 可以抑制CYP450 酶，但對(duì)于肝臟解毒的代謝酶，起相反作用，誘導(dǎo)UDP-葡萄糖醛酸活性增強(qiáng)，同時(shí)減弱谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性。有學(xué)者對(duì)二乙亞硝胺誘導(dǎo)動(dòng)物肝癌實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，Res 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的途徑之一可能是上調(diào)Nrf2 核轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的蛋白及mRNA的表達(dá)。部分文獻(xiàn)表明，Res 除了化學(xué)防癌作用外尚可作為化療藥物運(yùn)用。Delmas等[36]用Res 作用肝癌小鼠模型，發(fā)現(xiàn)其通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶（cyclin dependent kinase，CDK）抑制蛋白的產(chǎn)生，降低 CDK蛋白表達(dá)和活性，使肝癌細(xì)胞阻滯于S 期和G2/M 期，從而抑制肝癌細(xì)胞增殖，并且這種抑制作用存在時(shí)間和劑量的依賴性，白藜蘆醇短期作用結(jié)果顯示，能以濃度依賴的方式阻礙腫瘤細(xì)胞DNA 合成及隨后的增殖；而當(dāng)時(shí)間延長(zhǎng)至24 h，白藜蘆醇則對(duì)細(xì)胞周期作用方式略顯不同，在低濃度（20 μmol/L）范圍內(nèi)減慢細(xì)胞周期進(jìn)程循環(huán)速度，在高濃度（40～80 μmol/L）下則導(dǎo)致細(xì)胞周期某特定時(shí)相的阻滯。經(jīng)白藜蘆醇處理過的細(xì)胞除了在相應(yīng)細(xì)胞周期時(shí)相受影響外，同時(shí)還伴有細(xì)胞核增大，核粒度增多。

3 總結(jié)與展望

研究證實(shí)，Res 可以通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、阻滯細(xì)胞周期、介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌、拮抗腫瘤血管生成影響腫瘤的發(fā)生過程。但目前缺乏有效的臨床或流行病學(xué)研究證實(shí)Res對(duì)肝癌的化學(xué)預(yù)防作用。雖然目前有兩個(gè)臨床試驗(yàn)表明連續(xù)29 d 給予2.5 g/d T-Res后，檢測(cè)血漿中胰島素樣生長(zhǎng)因子1 和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3水平，與未給藥組相比明顯降低，表明了其潛在的癌癥預(yù)防作用[37]。0.5 g/d 和1.0 g/d的T-Res 連續(xù)給藥29 d后結(jié)腸癌組織中的細(xì)胞增殖明顯受抑[38]。目前HCC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未明確，但作為植物抗毒素Res 可以通過多方面作用對(duì)部分HCC 起到一定的防治作用，定能在將來的肝癌治療中占一席之地。

[1]Jeandet P，Douillet Breuil AC，Bessis R，et al.Phytoalexins from the Vitaceae：biosynthesis，phytoalexin gene expression intransgenic plants，antifungal activity，and metabolism[J].Agric Food Chem，2002，50（10）：2731-2741.

[2]Venturini CD，Merlo S，Souto AA，et al.Resveratrol and red wine function as antioxidants in the nervous system without cellular proliferative effects during experimental diabetes[J].Oxid Med Cell Longev，2010，3（6）：434-441.

[3]Kovacic P，Somanathan R.Multifaceted approach to resveratrol bioactivity：focus on antioxidant action，cell signaling and safety[J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2010，3（2）：86-100.

[4]Queen BL，Tollefsbol TO.Polyphenols and aging[J].Curr Aging Sci，2010，3（1）：34-42.

[5]Campagna M，Rivas C.Antiviral activity of resveratrol[J].Biochem Soc Trans，2010，38（1）：50-53.

[6]Palsamy P，Subramanian S.Modulatory effects of resveratrol on attenuating the key enzymes activities of carbohydrate metabolism in streptozotocin-nicotinamide-induced diabetic Rats[J].Chem Biol Interact，2009，179（2-3）：356-362.

[7]Lee M，Kim S，Kwon OK，et al.Anti-inflammatory and anti-asthmatic effects of resveratrol，a polyphenolic stilbene， in a mouse model of allergic asthma[J].Int Immunopharmacol，2009，9（4）：418-424.

[8]Luna C，Li G，Liton PB，et al.Resveratrol prevents the expression of glaucoma markers induced by chronic oxidative stress in trabecular meshwork cells[J].Food Chem Toxicol，2009，47（1）：198-204.

[9]Li ZD，Ma QY，Wang CA.Effect of resveratrol on pancreatic oxygen free radicals in rats with severe acute pancreatitis[J].World Journal of Gastroenterology，2006，12（1）：137-140.

[10]Shakibaei M，Csaki C，Nebrich S，et al.Resveratrol suppresses interleukin-1beta-induced inflammatory signaling and apoptosis in human articular chondrocytes：potential for use as a novel nutraceutical for the treatment of osteoarthritis[J].Biochem Pharmacol，2008，76（11）：1426-1439.

[11]Shukla SK，Gupta S，Ojha SK，et al.Cardiovascular friendly natural products：a promising approach in the management of CVD[J].Nat Prod Res，2010，24（9）：873-898.

[12]Kundu JK，Surh YJ.Cancer chemopreventive and therapeutic potential of resveratrol：mechanistic perspectives[J].Cancer Lett，2008，269（2）：243-261.

[13]Kuo PL，Chiang LC，Lin CC.Resveratrol-induced apoptosis is mediated by p53-dependent pathway in Hep G2 cells[J].Life Sci，2002，72（1）：23-34.

[14]Stervbo U，Vang O，Bonnesen C.Time-and concentration-dependent effects of resveratrol in HL-60 and HepG2 cells [J].Cell Prolif，2006，39（6）：479-493.

[15]Sun ZJ，Pan CE，Liu HS，et al.Anti-hepatoma activity of resveratrol in vitro[J].World J Gastroenterol，2002，8（1）：79-81.

[16]Delmas D，Jannin B，Cherkaoui Malki M，et al.Inhibitory effect of resveratrol on the proliferation of human and rat hepatic derived cell lines[J].Oncol Rep，2000，7（4）：847-852.

[17]Michels G，W tjen W，Weber N，et al.Resveratrol induces apoptotic cell death in rat H4IIE hepatoma cells but necrosis in C6 glioma cells[J].Toxicology，2006，225（2-3）：173-182.

[18]Kozuki Y，Miura Y，Yagasaki K.Resveratrol suppresses hepatoma cell invasion independently of its anti-proliferative action [J].Cancer Lett，2001，167（2）：151-156.

[19]Notas G，Nifli AP，Kampa M，et al.Resveratrol exerts its antiproliferative effect on HepG2 hepatocellular carcinoma cells，by inducing cell cycle arrest，and NOS activation [J].Biochim Biophys Acta，2006，1760（11）：1657-1666.

[20]Chidlow JH Jr，Sessa WC.Caveolae，caveolins，and cavins：complex control of cellular signalling and inflammation [J].Cardiovasc Res，2010，86（2）：219-225.

[21]Yang HL，Chen WQ，Cao X，et al.Caveolin-1 enhances resveratrolmediated cytotoxicity and transport in a hepatocellular carcinoma model[J].J Transl Med，2009，7：22.

[22]Kocsis Z，Marcsek ZL，Jakab MG，et al.Chemopreventive properties of trans-resveratrol against the cytotoxicity of chloroacetanilide herbicides in vitro[J].Int J Hyg Environ Health，2005，208（3）：211-218.

[23]徐凌，王鋒，徐選福，等.白藜蘆醇通過下調(diào)microRNA-151表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞株HepG2 細(xì)胞活性的研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，30（7）：774-778.

[24]Parekh P，Motiwale L，Naik N，et al.Downregulation of cyclin D1 is associated with decreased levels of p38 MAP kinases，Akt/PKB and Pak1 during chemopreventive effects of resveratrol in liver cancer cells[J].Exp Toxicol Pathol，2011，63（1-2）：167-173.

[25]De L édinghen V，Monvoisin A，Neaud V，et al.Trans-resveratrol，a grapevine-derived polyphenol，blocks hepatocyte growth factor-induced invasion of hepatocellular carcinoma cells [J].Int J Oncol，2001，19（1）：83-88.

[26]Gharavi N，El-Kadi AO.Tert-Butylhydroquinone is a novel aryl hydrocarbon receptor ligand [J].Drug Metab Dispos， 2005，33（3）：365-372.

[27]Zhang Q，Tang X，Lu QY，et al.Resveratrol inhibits hypoxia-induced accumulation of hypoxia-inducible factor-1alpha and VEGF expression in human tongue squamous cell carcinoma and hepatoma cells[J].Mol Cancer Ther，2005，4（10）：1465-1474.

[28]Khanduja KL，Bhardwaj A，Kaushik G.Resveratrol inhibits N-nitrosodiethylamine-induced ornithine decarboxylase and cyclooxygenase in mice[J].J Nutr Sci Vitaminol（Tokyo），2004，50（1）：61-65.

[29]Wolter F，Ulrich S，Stein J.Molecular mechanisms of the chemopreventive effects of resveratrol and its analogs in colorectal cancer：key role of polyamines?[J].J Nutr，2004，134（12）：3219-3222.

[30]Wu BW，Li DF，Ke ZF，et al.Expression characteristics of heparanase in colon carcinoma and its close relationship with cyclooxygenase-2 and angiogenesis [J].Hepatogastroenterology，2010，57（104）：1510-1514.

[31]Bishayee A，Dhir N.Resveratrol-mediated chemoprevention of diethylnitrosamine-initiated hepatocarcinogenesis：inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis [J].Chem Biol Interact，2009，179（2-3）：131-144.

[32]Bishayee A，Barnes KF，Bhatia D，et al.Resveratrol suppresses oxidative stress and inflammatory response in diethylnitrosamine-initiated rat hepatocarcinogenesis[J].Cancer Prev Res（Phila），2010，3（6）：753-763.

[33]Bishayee A，Waghray A，Barnes KF，et al.Suppression of the inflammatory cascade is implicated in resveratrol chemoprevention of experimental hepatocarcinogenesis[J].Pharm Res，2010，27（6）：1080-1091.

[34]Tharappel JC，Lehmler HJ，Srinivasan C，et al.Effect of antioxidant phytochemicals on the hepatic tumor promoting activity of 3，3'，4，4'-tetrachlorobiphenyl（PCB-77）[J].Food Chem Toxicol，2008，46（11）：3467-3474.

[35]Canistro D，Bonamassa B，Pozzetti L，et al.Alteration of xenobiotic metabolizing enzymes by resveratrol in liver and lung of CD1 mice[J].Food Chem Toxicol，2009，47（2）：454-461.

[36]Delmas D，R éb é C，Lacour S，et al.Resveratrol-induced apoptosis is associated with Fas redistribution in the rafts and the formation of a death-inducing signaling complex in colon cancer cells [J].J Biol Chem，2003，278（42）：41482-41490.

[37]Brown VA，Patel KR，Viskaduraki M，et al.Repeat dose study of the cancer chemopreventive agent resveratrol in healthy volunteers：safety，pharmacokinetics，and effect on the insulin-like growth factor axis[J].Cancer Res，2010，70（22）：9003-9011.

[38]Patel KR，Brown VA，Jones DJ，et al.Clinical pharmacology of resveratrol and its metabolites in colorectal cancer patients[J].Cancer Res，2010，70（19）：7392-7399.