孫躍安

（常德安鄉(xiāng)縣血防醫(yī)院，湖南 常德 415600）

觀察吡喹酮對血吸蟲病肝纖維化的治療作用

孫躍安

（常德安鄉(xiāng)縣血防醫(yī)院，湖南 常德 415600）

目的 觀察吡喹酮對血吸蟲病肝纖維化的治療作用。方法 2010 年 3 月至 9 月，選取健康狀況正常其相同的 60 只小鼠為實驗對象，將其隨機平均分為對照組、模型組以及治療組。對模型組和治療組的小鼠進行腹部皮膚感染血吸蟲誘導(dǎo)肝纖維化，治療組小鼠在感染第八周之后行吡喹酮治療。至第十六周測試三組小鼠血清中 AST 和 ALT；觀察三組小鼠各自的肝臟形態(tài)，以及蟲卵肉芽腫的面積，同時采用HE 染色監(jiān)測肝纖維化病理組織的變化；測定肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達。結(jié)果 吡喹酮可以有效地降低被感染小鼠血清中 AST 和 ALT，以及小鼠的肝臟指數(shù)，可以改善小鼠肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)，降低蟲卵肉芽腫的面積和肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達。結(jié)論 吡喹酮對血吸蟲病肝纖維化有良好的治療效果。

吡喹酮；血吸蟲；肝纖維化

1 材料與方法

1.1 實驗材料

昆明種小鼠60只、雄性、體質(zhì)量19～23g，健康狀況良好，實驗前3d給予自由飲水和喂食。從本省血吸蟲病防治站購陽性釘螺，在實驗溫度24～28℃下，采用常規(guī)方法逸出尾蚴。武漢康銅實際醫(yī)藥有限公司提供的吡喹酮，純度高達99%。AST和ALT試劑盒由南京建成生物技術(shù)公司提供。Ⅰ、Ⅲ型膠原試劑盒由上海銳聰有限公司提供。

1.2 實驗方法

選取健康狀況正常其相同的60只小鼠為實驗對象，將其隨機平均分為對照組、模型組以及治療組。血吸蟲尾蚴感染方法：將小鼠仰臥置于鼠板上，除去小鼠下腹部一小塊皮毛，用生理鹽水擦拭除去皮毛的皮膚。在顯微鏡下放置30條尾蚴于蓋玻片上，將該蓋玻片貼于裸露皮膚處，持續(xù)時間約10min，小鼠裸露皮膚處呈現(xiàn)點狀充血表明血吸蟲感染成功。

對照組：不予以感染血吸蟲尾蚴，常規(guī)飼養(yǎng)16周；模型組：感染血吸蟲尾蚴，常規(guī)飼養(yǎng)16周；治療組：感染血吸蟲尾蚴，第8周后行吡喹酮治療2d，劑量500mg/（kg·d）、0.5mL/d，之后繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)8周。

三組小鼠在第16周末，禁食16h，稱量其體質(zhì)量，取血液中血清，測定血清中的AST和ALT。頸椎脫臼處死小鼠，取肝組織中葉，使用4%多聚甲醛固定，在脫水、包埋、切片、HE染色、封固等一系列操作之后，在顯微鏡下觀察小鼠肝組織的病理變化。

1.3 觀察指標

根據(jù)病情程度可將肝纖維化分為4級。0級：正常；Ⅰ級：膠原纖維包繞肉芽腫且插入其中；Ⅱ級：小葉間有少量的纖維化，匯管區(qū)有大量的纖維化；Ⅲ級：顯微組織較多地延伸到小葉之間。

?《魏書》卷六七《崔光傳》，中華書局1974 年版，第1487 頁;同書卷六〇《韓顯宗傳》，第1342頁。

肝臟Ⅰ、Ⅲ級膠原表達：將肝臟免疫組化染色切片放置于物鏡20倍的視野下，在每組中隨機地選擇20各視野，采用自動彩色圖像分析方法計算細胞內(nèi)棕黃色顆粒的平均吸光度值。

采用3.2分析軟件計算HE染色切片蟲卵肉芽腫面積，并對每一個樣本連續(xù)切片計算的面積取平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

本次所有研究資料均采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理，計量資料采用均數(shù)加減標準差表示（χ—±s），計數(shù)資料采用t檢驗，組間對比采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有顯著性，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察肝臟形態(tài)學(xué)

對照組小鼠的肝臟表面光滑、顏色紅潤、質(zhì)地柔軟、包膜完整、邊緣銳利，并且沒有肝纖維化病理改變的現(xiàn)象。模型組小鼠肝臟腫大、顏色呈現(xiàn)暗褐色、質(zhì)脆、表面分布顆粒狀突起、包膜緊張。治療組小鼠肝臟大小和質(zhì)地相比較模型組有顯著的改善，肝臟呈現(xiàn)褐色，且表面分布顆粒狀突起。

2.2 吡喹酮對AST和ALT含量的影響

對照組、模型組和治療組的AST分別為（51±12）、（143± 12）、（109±13）IU/L；ALT分別為（77±13）、（159±17）、（135±10）IU/L，數(shù)據(jù)表明，小鼠被血吸蟲感染后血清中的AST和ALT含量上升（P＜0.05），同時，治療組血清中的AST和ALT含量相比較于模型組偏低（P＜0.05）。

2.3 肝組織的病理變化

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，對照組小鼠的肝組織沒有發(fā)生病理變化，而模型組和治療組肝組織中發(fā)現(xiàn)較多的慢性蟲卵肉芽腫，蟲卵包繞著梭形細胞和膠原纖維，同時也可以看到一部分急性的蟲卵肉芽腫，匯管區(qū)存在較多的浸潤炎性細胞；小靜脈旁邊膠原纖維束及肉芽腫向小葉周圍延伸。與模型組相比，治療組在病變范圍及病變程度上都較輕（P＜0.05）。根據(jù)肝纖維化評分可得，對照組20例均是0級；模型組Ⅰ級2例、Ⅱ級13例、Ⅲ級15例；治療組Ⅰ級6例、Ⅱ級19例、Ⅲ級5例。

2.4 經(jīng)吡喹酮治療后，小鼠肝臟內(nèi)蟲卵肉芽腫面積變化情況

與模型組相比，治療組小鼠肝臟內(nèi)蟲卵肉芽腫面積降低（P＜0.05）。

2.5 肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達的變化

Ⅰ、Ⅲ型膠原為密集片狀，且呈現(xiàn)棕黃色，其主要分布在匯管區(qū)和蟲卵肉芽腫里面。對照組肝內(nèi)沒有膠原著色，Ⅰ型膠原表達0.08991 ±0.0031、Ⅲ型膠原表達0.0901±0.0021；模型組Ⅰ型膠原表達0.2391 ±0.0211、Ⅲ型膠原表達0.2109±0.0239，模型組的Ⅰ、Ⅲ型膠原表達與對照組相比有不同程度的增加（P＜0.05）。治療組Ⅰ型膠原表達0.2051±0.0216、Ⅲ型膠原表達0.1809±0.0223，與模型組相比偏低（P＜0.05）。

3 討 論

近年來，我國血吸蟲病流行嚴重、分布廣泛、流行因素復(fù)雜，加上國家的退耕還湖政策，血吸蟲感染率有所增加[1]。常見的血吸蟲患者臨床上常表現(xiàn)為肝纖維化，逐步發(fā)展最終會引起肝硬化等。經(jīng)國內(nèi)外肝病學(xué)者臨床經(jīng)驗論證，肝纖維可以逆轉(zhuǎn)，但是肝硬化卻不可逆轉(zhuǎn)，因此如何有效地防止血吸蟲病引起的肝纖維化是當前重要的研究課題[2]。根據(jù)本文實驗發(fā)現(xiàn)感染血吸蟲尾蚴8周后，會出現(xiàn)肝纖維早期病變，同時開始形成慢性的蟲卵肉芽腫，此時患者及時接受治療可以有效地逆轉(zhuǎn)肝纖維化。

本文研究表明短期使用吡喹酮治療，可以縮小蟲卵肉芽腫的面積，同時抑制血吸蟲卵肉芽腫，這可能與吡喹酮促使肝組織可溶性蟲卵抗原減少有密切的關(guān)系。為了明確吡喹酮是否能夠在血吸蟲病肝纖維化早期抑制血吸蟲病肝纖維化[3]，本文采取血吸蟲感染第8周，在慢性蟲卵肉芽腫及肝纖維化形成的早期行吡喹酮治療，之后連續(xù)觀察8周，最后實驗結(jié)果表明，肝功能得到改善，與模型組相比，肝纖維化程度降低，這就表明了血吸蟲病肝纖維化形成后采用吡喹酮進行治療可以有效地減少肉芽腫的面積，降低肝纖維化程度，同時也表現(xiàn)出了獨立的抗肝纖維化的作用，但因為吡喹酮是短期治療，所以不能直接達到抑制肝纖維化的功效，綜上來看，主要還是抑制蟲卵肉嚴重的產(chǎn)生來抑制肝纖維化[4]。

根據(jù)幾十年來的血吸蟲病肝纖維化的防治實踐和科學(xué)研究，當前制訂了防治血吸蟲病的策略和措施，并提出了血吸蟲病防治要因地制宜，綜合治理、科學(xué)防治的方針。吡喹酮作為其中的一種治療方法因吡喹酮的低廉及不良反應(yīng)少等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用，更進一步研究吡喹酮的抗肝纖維化機制具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

[1]畢 紅征,薛 敬 禮,黃國鈞.HG顆 粒 對四氯化 碳 復(fù)合 法 致 肝纖 維化大鼠干膠原纖維及羥脯氨酸含量的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2880, 19(3):660-661.

[2]許永良,李洪軍,黃一心.吡喹酮對血吸蟲卵肉芽腫與肝纖維化作用的研究Ⅱ吡喹酮對小鼠肺部血吸蟲卵肉芽腫內(nèi)細胞的影響[J].中國血吸蟲病防治雜志,2010,22(2):105-111.

[3]王俊杰,吳海燕,段小毛,等.吡喹酮治療血吸蟲病肝纖維化的實驗研究[J].山東醫(yī)藥,2010,50(32):34-36.

[4]田字彬,張琪.肝纖維化大鼠肝組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原表達及氧化苦參堿的干預(yù)作用[J].山東醫(yī)藥,2005,45(4):27-28.

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