林 清，田萬(wàn)強(qiáng)，雷初朝，曹 暉，湯懷斌，昝林森，陳 宏＊

1 種公牛飼養(yǎng)管理

公牛是養(yǎng)在牛舍的單間，還有一個(gè)32m2的運(yùn)動(dòng)場(chǎng)。牛舍建得較高，上面有氣流通道，下層有通風(fēng)口，牛床保持柔軟墊草30cm，并保持干燥，這樣可使舍內(nèi)小氣候冬暖夏涼。冬季，密閉的牛舍可通過(guò)排氣孔換氣。成年采精公牛一般不需飼養(yǎng)人員牽引運(yùn)動(dòng)。用電動(dòng)轉(zhuǎn)盤(pán)每天運(yùn)動(dòng)一次，每次1h，以保證使用后能順利采精。

通過(guò)全價(jià)飼養(yǎng)控制公牛膘情，以生產(chǎn)出活力好的精液成年公牛每天喂干草13kg、精料3kg、大蒜風(fēng)干片30g、含蒜20% 的大蒜草粉100g、礦物質(zhì)添加劑50g、海藻粉100g。

每千克公牛用礦物質(zhì)添加劑含維生素A、D330萬(wàn)和60萬(wàn)國(guó)際單位，維生素E、K3、B1分別為200、150、300mg。酵母50g、海藻100g、食鹽50g、鎂6.03g。鐵2.01g、鋅1.14g、錳1.06g、銅0.51g、鉆24mg、磷19.98g，鈣287.87g。

保持種公牛健康無(wú)病，每年經(jīng)過(guò)兩次檢疫達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。每天保證運(yùn)動(dòng)量在2h以上。采精期間每天補(bǔ)充雞蛋5～8個(gè)，紅蘿卜500g以上。采精頻度以每周2次為宜，每次采精時(shí)間間隔30min為宜。

2 采精及凍精細(xì)管制作

2.1 采精前的準(zhǔn)備

2.1.1 公牛和胎畜 提前準(zhǔn)備好采精胎畜（以發(fā)青母牛為好），清理胎畜后軀污物。種公牛采精前用消毒液清洗下身污物。剪去包皮周?chē)L(zhǎng)毛。使這一區(qū)域保持干凈無(wú)污染。

2.1.2 采精設(shè)備的清洗和消毒 采精設(shè)備中凡是與精液直接接觸的內(nèi)胎（光面）、積精管、溫度計(jì)、玻璃棒、鑷子等先用清水加清洗劑清洗干凈，再用蒸餾水清洗三遍，以?xún)?nèi)胎上面不掛水珠，并有一層水膜均勻附著在上面為好。清洗干凈后晾干，然后再用75%酒精棉球整體擦洗三遍，注意不要有遺漏地方。這項(xiàng)工作需要在采精前12h完成。

2.1.3 采精設(shè)備安裝 安裝人員在安裝前簡(jiǎn)短指甲，并磨光。然后清洗手臂，再用75%酒精棉球消毒手臂。最后再安裝采精器。注意安裝內(nèi)胎以平滑無(wú)皺褶為好。

2.1.4 采精場(chǎng)地 采精場(chǎng)地保持干凈衛(wèi)生，必要時(shí)場(chǎng)地每周消毒一次。采精輔助人員保持自身安全，保持采精場(chǎng)地、安靜、干凈，采精過(guò)程中不要大聲喧嘩。

2.2 采精過(guò)程

采精人員在胎畜和種公牛到位后，需在盡短時(shí)間內(nèi)調(diào)整好采精器溫度38～42℃。潤(rùn)滑劑（凡士林）以?xún)?nèi)胎前1／3～1／2均勻涂抹，不宜過(guò)多。壓力保持適中。等種公牛爬跨后迅速將公牛陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)。等公牛射精后，應(yīng)多停留幾秒時(shí)間等精液完全流進(jìn)積精瓶，切勿立刻退出。注意一定要使積精管內(nèi)溫度保持在35℃。

2.3 采精后檢查

檢查采精量，檢查活力、密度、pH值等各項(xiàng)指標(biāo)，并及時(shí)做好記錄。

2.4 稀釋液的配制

在采精的同時(shí)制備稀釋液配方：基液：乳糖2.5 g、檸檬酸鈉1.4g、葡萄糖1.2g、果糖0.5g，以上各物溶于100mL蒸餾水（雙蒸水）中，充分混合均勻。然后高壓滅菌15min。

A液：基液80mL＋20mL新鮮卵黃，再加青霉素16萬(wàn)單位 鏈霉素10萬(wàn)單位，然后采用磁力攪拌器攪拌，攪拌時(shí)間至少20min，混合均勻。

B液：A液93mL＋7mL甘油，混合均勻。

2.5 稀釋過(guò)程

第一次稀釋?zhuān)喊凑諜z查結(jié)果確定稀釋倍數(shù)，原精液與A液緩慢稀釋?zhuān)⒕鶆蚧旌希♂尩阶詈笙♂尡稊?shù)的一半。這一過(guò)程可以在36℃條件下進(jìn)行。

由36℃條件轉(zhuǎn)入4℃條件也需要緩慢進(jìn)行。這一過(guò)程需要1.5h以上。

第二次稀釋?zhuān)喊凑諜z查結(jié)果確定稀釋倍數(shù)，第一次稀釋后的精液與B液緩慢滴注，稀釋到最后稀釋倍數(shù)。

2.6 平衡過(guò)程

使稀釋后的精液溫度保持4～5℃環(huán)境下，平衡2～4h。然后再次活力檢查。

2.7 分裝和封口

平衡后符合質(zhì)量的精液在2～4h內(nèi)進(jìn)行分裝，每支細(xì)管0.25mL。保持封口端精液距離細(xì)管末端1cm為宜。再用長(zhǎng)柄鑷子在酒精燈上適度考熱封口。這一過(guò)程在4℃條件下進(jìn)行。

2.8 冷凍過(guò)程

熏蒸法：將分裝好的細(xì)管平鋪在自制的網(wǎng)篩上，立即擱置在盛液氮容的泡沫箱內(nèi)，加蓋進(jìn)行熏蒸，初凍溫度在－100～－130℃ 之間，熏蒸7～8min，然后降溫至－160℃ ，再熏蒸4～5min。最后收集在細(xì)管袋中，液氮保存。注意標(biāo)記種公牛號(hào)，制作時(shí)間，解凍方法等。

2.9 保存和檢查

制作好的細(xì)管凍精可長(zhǎng)期保存在液氮灌內(nèi)，定期檢查并及時(shí)加注液氮，20d或一個(gè)月抽樣檢查一次凍精活力。如有質(zhì)量問(wèn)題及時(shí)查找原因，并及時(shí)糾正。

3 活力檢查

3.1 細(xì)管凍精生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1）解凍后精子活力不低于0.3（十級(jí)評(píng)定法）。

2）每支細(xì)管的精子數(shù)量不低于1 500萬(wàn)個(gè)。

3）解凍后精子畸形率不高于2%。

4）解凍后精子存活時(shí)間在37℃下不低于4 h。

3.2 解凍及檢查

用36℃溫水快速解凍進(jìn)行3～5s，并不停搖動(dòng)。精液質(zhì)量檢查項(xiàng)目為活力、畸形精子率、存活時(shí)間。隨機(jī)抽樣5支，按最佳溫區(qū)解凍后，涂片放在保溫38℃顯微鏡下觀(guān)察?；盍υ?.3～0.65為合格，0.3以下為不合格。我們對(duì)制作的325支細(xì)管凍精進(jìn)行了活力檢查，平均活力達(dá)到0.6以上。

3.3 活力檢測(cè)結(jié)果

我們對(duì)這種方法制作的1 200支細(xì)管凍精進(jìn)行了50支抽檢，活力均在0.4～0.5之間。說(shuō)明這種方法在實(shí)踐中是切實(shí)可行的，尤其對(duì)凍精活力有較大提高。