孫 奇

（遼寧省中醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032）

HPLC法測定腎石通顆粒(無糖型)中延胡索乙素的含量

孫 奇

（遼寧省中醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032）

目的 建立腎石通顆粒（無糖型）中延胡索乙素的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法。色譜條件：色譜柱：Diamonsil?(鉆石)C18（5μm，250×4.6mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH6.0）（55∶45）；檢測波長：280nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL/min；理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算不低于3000。結(jié)果 延胡索乙素在0.1～0.6μg之間線性關(guān)系良好，r=0.9996。延胡索乙素平均回收率為99.3%，RSD=0.83%。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于腎石通顆粒（無糖型）的質(zhì)量控制。

腎石通顆粒（無糖型）；延胡索乙素；HPLC法；含量測定

腎石通顆粒(無糖型)具有清熱利濕，活血止痛，化石，排石的功效，用于治療腎結(jié)石，腎盂結(jié)石，膀胱結(jié)石，輸尿管結(jié)石，由金錢草、王不留行（炒）、萹蓄、延胡索（醋制）、雞內(nèi)金（燙）、丹參、木香、瞿麥、牛膝、海金沙10味中藥組成。該中成藥收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二冊[1]，標(biāo)準(zhǔn)中無定量指標(biāo)，不能有效控制其質(zhì)量。延胡索為方中的臣藥，其主要成分為延胡索乙素，我們采用HPLC法[2]對方中延胡索乙素進(jìn)行含量測定。方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀（泵LC-10Atvp、檢測器SPD-10Avp）；Class-vp工作站；GR-202型十萬分之一電子天平（日本AND公司）；BS1245萬分之一電子天平（賽多利斯）；甲醇（色譜純）、磷酸（AR）、三乙胺（AR）、乙醚（AR）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil?(鉆石)C18（5μm，250×4.6mm）；甲醇-0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH6.0）（55∶45）作為流動相；流速為每分鐘1.0mL，柱溫40℃。檢測波長280nm。理論板數(shù)按延胡索乙素計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1mL含12.5μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取腎石通顆粒（無糖型）10g，精密稱定，加水50mL，稱重，加入氨水調(diào)節(jié)pH至9～10，超聲處理30min（功率250W，頻率33KHz），放冷，補(bǔ)重，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，用乙醚萃取5次，每次30mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，殘渣加少量甲醇洗滌，合并洗液置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系試驗

分別精密稱取延胡索乙素適量，用甲醇稀釋配制成如下

濃度的溶液：5.104μg/mL、10.208μg/mL、12.76μg/mL、20.416μg/mL、30.624μg/mL。分別定量進(jìn)樣20μL，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y = 521196.96 X+1570.66（r = 0.9996），結(jié)果表明，延胡索乙素在0.1～0.6μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 陰性對照樣品溶液的制備

按處方比例配制不含延胡索的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備。精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20μL，按照2.1項下的色譜條件，測定，試驗結(jié)果表明，陰性對照樣品溶液在延胡索乙素對照品位置處無吸收峰，本方法專屬性良好。

2.6 精密度試驗

分別取腎石通顆粒（無糖型）060902批的供試品溶液20μL，按正文含量測定項下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，結(jié)果平均峰面積為263660，RSD=0.964%。試驗結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取腎石通顆粒（無糖型）批號：060902的供試品溶液，于0、4、8、16、24h測定延胡索乙素峰面積，測得其峰面積的平均值為264251，RSD為0.831%，表明供試品溶液在室溫條件下放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗

取腎石通顆粒（無糖型）批號：060902，精密稱定6份，按含量測定項下的方法操作，制備供試品溶液，測定樣品中延胡索乙素的含量，結(jié)果平均含量為10.85μg/g，RSD=0.17%。

2.9 回收率試驗

取同一份腎石通顆粒（無糖型）樣品6份，精密加入50mL水，加入氨水調(diào)節(jié)pH至9～10，超聲處理30min（功率250W，頻率33KHz），放冷，補(bǔ)重，溶液轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，用乙醚萃取5次，每次30mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，殘渣加少量甲醇洗滌，合并洗液置5mL量瓶中，依次每份精密加入延胡索乙素對照品溶液1mL（對照品溶液為CR =115.76μg/mL，即每組分別加入對照品115.76μg），加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液，定量進(jìn)樣20μL，計算平均回收率為99.3%，RSD為0.83%。

2.10 樣品含量測定

按本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項下方法操作，制備供試品溶液，測定3批腎石通顆粒（無糖型）（批號：060901、060902、060903）樣品中延胡索乙素的含量，測定結(jié)果分別為54.2，54.3，54.3μg/袋。

3 討 論

流動相的篩選與確定，曾采用不同比例的甲醇-0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH6.0），甲醇-水為流動相，進(jìn)行了試驗，結(jié)果甲醇-0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH6.0）體積比為55∶45時，供試品中延胡索乙素與相鄰組分分離度良好，故確定為含量測定項下色譜條件。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑(第二冊)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 1990.

[2] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010.

R917

B

1671-8194（2013）23-0065-01