徐芳 孫韻 陳峰 李阿中 周華平

●輸血專題

ACP215去甘油洗滌過程的“沖紅”現(xiàn)象的調(diào)查與分析

徐芳 孫韻 陳峰 李阿中 周華平

冰凍紅細(xì)胞是紅細(xì)胞加40%甘油作為保護(hù)劑冰凍后的制品，貯存于-65℃以下，已廣泛用于稀有血型血液的保存。當(dāng)臨床急需時(shí)，冰凍紅細(xì)胞在40℃解凍，通過系列的洗滌而制成解凍紅細(xì)胞應(yīng)用于臨床。目前洗滌的方式有手工洗滌和機(jī)器自動洗滌，國內(nèi)現(xiàn)大多數(shù)采用機(jī)器自動洗滌。我中心近2年采用ACP215洗滌機(jī)自動洗滌，發(fā)現(xiàn)洗滌剛開始廢液顏色為粉紅，繼續(xù)洗滌幾分鐘后廢液顏色突然變?yōu)樯罴t，溶血很明顯，繼續(xù)洗滌廢液顏色會逐漸變淡，這個(gè)現(xiàn)象被稱為“沖紅”，本文對此進(jìn)行原因分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 冰凍紅細(xì)胞、9%氯化鈉溶液和0.9%氯化鈉溶液（上海血液技術(shù)公司）、水浴箱、接管機(jī)和熱合機(jī)（泰爾茂公司）、ACP215洗滌機(jī)（美國血液技術(shù)公司）、HAEMONETICS比色卡。

1.2 方法 將常規(guī)冰凍的紅細(xì)胞20袋，依次40℃循環(huán)水浴融化，融化后即刻取出留樣。然后與235耗材無菌連接，藍(lán)色管連接9%氯化鈉溶液，黃色管接0.9%氯化鈉溶液。根據(jù)機(jī)器程序和細(xì)胞單位數(shù)設(shè)置參數(shù)，1U解凍紅細(xì)胞設(shè)9%氯化鈉溶液80ml，NaCl Dilute Vol 1/2為170ml，NaCl Dilute Vol 2/2為20ml；2U解凍紅細(xì)胞設(shè)9%氯化鈉溶液160ml，NaCl Dilute Vol 1/2為340ml，NaCl Dilute Vol 2/2為400ml；自動洗滌后采用0.9%氯化鈉溶液充當(dāng)保養(yǎng)液。當(dāng)機(jī)器運(yùn)行到屏幕顯示（a）“Dilutie 2 of 2 Filling Bowl”、（b）“Wash 1 of 6”、（c）“Wash 2 of 6”、（d）“Wash 3 of 6”、（e）“Wash 4 of 6”、（f）“Wash 5 of 6”、（g）“Wash 6 of 6”、（h）“Add Preservation 1/1”等8個(gè)階段程序時(shí)，分別取末尾流出的廢液和標(biāo)準(zhǔn)比色卡進(jìn)行對比，找出對應(yīng)游離血紅蛋白接近目視含量（g/L），介于兩個(gè)值之間的取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

20袋血液樣本平均采集量（1.4±0.50）U，最終洗滌完畢后h點(diǎn)各樣本游離血紅蛋白含量均值為（0.49± 0.21）g/L，符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（0.25～1.00g/L）。洗滌液游離血紅蛋白含量在a、b點(diǎn)呈現(xiàn)增高趨勢，大多在c、d點(diǎn)達(dá)到最高值，分別是（6.42±1.44）g/L和（5.60±1.61）g/L，然后開始逐步降低。與e點(diǎn)（3.79±1.25）g/L、f點(diǎn)（2.46±0.93）g/ L、g點(diǎn)（1.24±0.25）g/L和h點(diǎn)（0.49±0.21）g/L比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與洗滌過程中廢液顏色突然變?yōu)樯罴t的時(shí)點(diǎn)相一致。

3 討論

甘油可作為冰凍紅細(xì)胞的保護(hù)劑，添加甘油后紅細(xì)胞制品呈現(xiàn)高滲狀態(tài)，因此冰凍紅細(xì)胞制品必須經(jīng)過洗滌后才能用于臨床使用。本研究采用ACP215洗滌機(jī)，依次加入濃氯化鈉溶液、0.9%氯化鈉溶液對冰凍紅細(xì)胞進(jìn)行自動去甘油洗滌，可分為8個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)。從程序上看，a點(diǎn)之前主要為濃氯化鈉溶液、解凍紅細(xì)胞、甘油和極少量0.9%氯化鈉溶液的混合液。由于該混合液總體上仍處于高滲狀態(tài)，基本上與原冰凍紅細(xì)胞等滲，細(xì)胞未被破壞。a點(diǎn)時(shí)的廢液則是由濃氯化鈉溶液、解凍紅細(xì)胞、甘油和部分0.9%氯化鈉溶液的混合液經(jīng)離心后產(chǎn)生，由于滲透壓下降幅度較少，故紅細(xì)胞破壞少，游離血紅蛋白濃度低，而且此時(shí)總體積相對較大，因此經(jīng)離心流出的廢液顏色較淡。b點(diǎn)開始到h點(diǎn)則邊加0.9%氯化鈉溶液邊洗滌，此時(shí)總體積即固定為275ml，相對前期大大減小，而且滲透壓逐漸下降，導(dǎo)致少量紅細(xì)胞破壞出現(xiàn)游離血紅蛋白。結(jié)果顯示b、c兩點(diǎn)存在“沖紅”現(xiàn)象，其原因可能與滲透壓下降有關(guān)。研究[1]顯示紅細(xì)胞的慢速冷凍損傷主要是水結(jié)冰時(shí)紅細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生的高濃度電解質(zhì)作用于細(xì)胞膜，引起脂蛋白復(fù)合物的變性和部分類脂質(zhì)的丟失，增加細(xì)胞對陽離子的通透性，并使細(xì)胞膜上形成一些小孔。冰融化時(shí)水進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引起滲透休克，導(dǎo)致紅細(xì)胞失去活性。a點(diǎn)時(shí)紅細(xì)胞周圍有大量濃氯化鈉溶液產(chǎn)生高滲鹽析作用，高滲作用使紅細(xì)胞外水分子不會立即大量進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而產(chǎn)生快速溶血，鹽析作用使細(xì)胞內(nèi)甘油大量游到細(xì)胞外，所以a點(diǎn)時(shí)廢液的甘油濃度較高。隨著后續(xù)洗滌過程中0.9%氯化鈉溶液的加入，滲透壓發(fā)生改變，水分子通過部分變性紅細(xì)胞的細(xì)胞膜上小孔漸漸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而產(chǎn)生溶血，故c、d兩點(diǎn)時(shí)廢液的游離血紅蛋白濃度増高。繼續(xù)加入0.9%氯化鈉溶液，含變性細(xì)胞膜的紅細(xì)胞漸漸減少，溶血的紅細(xì)胞減少，導(dǎo)致游離血紅蛋白減少，廢液顏色變淡。

國家標(biāo)準(zhǔn)《全血及成分血質(zhì)量要求》GB18469-2012[2]規(guī)定冰凍解凍去甘油洗滌紅細(xì)胞的游離血紅蛋白含量≤1g/L，廢液顏色淡于比色卡3號標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)際工作中我們要求h點(diǎn)時(shí)廢液應(yīng)接近標(biāo)準(zhǔn)品1～2號水平，如未達(dá)到將選擇程序繼續(xù)洗滌。ACP215機(jī)器洗滌過程存在“沖紅”現(xiàn)象，而廢液的顏色能較準(zhǔn)確反映游離血紅蛋白含量，因此在實(shí)際洗滌過程中應(yīng)及時(shí)采用比色卡監(jiān)測游離血紅蛋白含量，以保障制備的血液制品符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

[1]安萬新.輸血技術(shù)學(xué) [M].1版.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2006: 189-190.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.全血及成分血質(zhì)量要求,GB18469-2012:8.

2012-11-15）

（本文編輯：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心血液制備供應(yīng)科