姜爭 王錫山

·綜述·

遺傳印記在人類惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

姜爭 王錫山

自1984年McGrath和Surani通過核移植實(shí)驗(yàn)首先揭示親代基因組對子代的不等貢獻(xiàn)以來，遺傳印記作為一種對孟德爾定律的發(fā)展與擴(kuò)充，這種新的遺傳現(xiàn)象正受到越來越多的關(guān)注。遺傳印記與胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化有著密不可分的關(guān)系。印記調(diào)控一旦發(fā)生紊亂，將影響個(gè)體的發(fā)育，導(dǎo)致遺傳性疾病甚至惡性腫瘤的發(fā)生。對遺傳印記的研究有利于全面地闡明癌變的機(jī)制，并可能開發(fā)出新的腫瘤防治措施[1]。本文就人類惡性腫瘤中遺傳印記的研究進(jìn)展做一簡要綜述。

一、遺傳印記

1.遺傳印記的建立與維持及生物學(xué)意義：遺傳印記是特指來源于親本的等位基因進(jìn)行不對稱“后成修飾”而導(dǎo)致的單等位基因表達(dá)的現(xiàn)象。該修飾作用是在胚胎發(fā)育早期形成的，具有不引起DNA序列變化，但影響基因調(diào)控以及造成2個(gè)等位基因不同表達(dá)的特性。在生物進(jìn)化中形成有規(guī)律而又受控的基因失活是機(jī)體內(nèi)基因表達(dá)調(diào)控的一種重要方式。其基本機(jī)制是通過DNA甲基化作用進(jìn)而調(diào)控親源特異的基因表達(dá)。

胚胎發(fā)育過程中，甲基化處于動(dòng)態(tài)變化，精卵細(xì)胞形成時(shí)處于完全甲基化狀態(tài)，受精過程中，雙親基因組發(fā)生去甲基化作用，隨后根據(jù)性別進(jìn)行差異甲基化，建立印記。印記修飾在體細(xì)胞分裂和分化過程中可以穩(wěn)定遺傳，但是在生殖細(xì)胞中將發(fā)生印記去除且重新建立的現(xiàn)象。因此，由印記決定的表型，在遺傳上不具有穩(wěn)定性[2]。

印記發(fā)生在等位基因之間，除甲基化修飾外，還包括組蛋白的乙酰化修飾以及染色體重構(gòu)。其在胎兒的細(xì)胞分裂、胎盤生長和行為發(fā)育過程中至關(guān)重要。母源印記的基因通常是促進(jìn)胎兒和胎盤生長，而父源印記的基因則往往表現(xiàn)為抑制生長。印記基因的表達(dá)狀態(tài)有三種，即開、關(guān)和單等位表達(dá)，在不同時(shí)間、不同階段、不同組織或細(xì)胞中表達(dá)，因此對細(xì)胞的生長分化或個(gè)體發(fā)育均具有非常重要的生物學(xué)意義。

2.印記基因的特點(diǎn)及其意義：組織特異性：印記基因在正常組織中雙等位表達(dá)，而在某些特定組織中卻被印記。例如，人類MAS1基因在乳腺組織中特異性印記，其余組織中雙等位表達(dá)；人類KVLQT1基因在心臟中無印記，其余組織中母源表達(dá)；小鼠胚胎中Igf2和Mash2開始為雙等位基因表達(dá)，但在胚胎形成的后期則表現(xiàn)為母源等位基因表達(dá)。上述發(fā)現(xiàn)表明細(xì)胞分化過程中印記調(diào)控可能與一些奢侈基因(luxury gene)的表達(dá)有關(guān)。

群集性：印記基因在基因組中的分布并不是分散的，而是具有群集傾向。人類最大的印記群集區(qū)位于11p15.5，H19、IGF2和P57KIP2等，廣泛印記的基因正位于這些區(qū)域；另一個(gè)研究較多的群集區(qū)位于15q11-q13，該區(qū)與Prader-Willi綜合征(PWS)和強(qiáng)直性脊柱炎(AS)兩種人類遺傳疾病有關(guān)；第三個(gè)群集區(qū)就是X染色體由于劑量補(bǔ)償效應(yīng)(dosage compensation effect)導(dǎo)致的印記失活。所有的印記基因都有一個(gè)或多個(gè)印記中心(imprinting center,IC)，即差異甲基化區(qū)(differentially methylated region,DMR)[3]。該區(qū)域富含CpG島，在印記調(diào)控中起核心作用，在印記的去除、重建和維持過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

可逆性：印記是可逆的，例如有些基因在特異的組織中可以取消或繞出印記，外源去甲基化試劑處理也可以消除印記，正是由于印記的可逆性才使得腫瘤的表觀遺傳學(xué)治療成為可能。

二、遺傳印記與惡性腫瘤的關(guān)系

腫瘤的形成是多因素、多步驟的過程，其發(fā)生具有復(fù)雜性和異質(zhì)性。有關(guān)腫瘤的研究，過去主要著眼于闡明基因突變、缺失、染色體重排等病理改變的發(fā)生機(jī)制，但是腫瘤的發(fā)生并非均可用癌基因突變學(xué)說來加以解釋。實(shí)際上，表觀遺傳現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)將是腫瘤發(fā)生機(jī)制的又一研究方向。

1.印記與腫瘤易感性:人類遺傳性疾病Beckwith-Wiedemann綜合征(BWS)患者常有母源的11p15.5缺失和IGF2基因的甲基化模式改變，該區(qū)域基因的正常印記發(fā)生變化將增加基因組不穩(wěn)定性[4]。患者對胚胎腫瘤，如Wilms瘤、橫紋肌肉瘤和肝胚細(xì)胞瘤等具有易感性；某些印記基因在正常組織中雙等位表達(dá)，而在某些特異組織中單等位表達(dá)，這將增加腫瘤的易感性，如MAS1和ZAC1基因在乳腺組織和卵巢中特異性印記，增加罹患乳腺癌和卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)[5]，IGF2R在某些組織的父源印記，增加了肝、乳腺、胃和結(jié)腸腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[6-9]；根據(jù)“二次突變理論”，胚胎印跡的基因一旦發(fā)生遺傳或表觀遺傳的異常將增加胚胎瘤的易感性[10]。

2.印記與腫瘤的形成:印記基因可以通過三種途徑參與腫瘤的形成：第一，印記區(qū)的印記丟失(LOI)，可以使原癌基因過度表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞生長，是人類腫瘤中普遍存在的遺傳改變。如IGF2和H19是在多種組織中廣泛印記的基因，而在子宮、乳腺、前列腺、膽囊、結(jié)腸、肺部和生殖細(xì)胞等多種惡性腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了LOI現(xiàn)象[11-14]。PEG1/MEST的LOI則與乳腺癌、肺癌和結(jié)腸癌發(fā)病相關(guān)[15]。第二，印記的雜合性丟失(LOH)導(dǎo)致的抑癌基因沉默。如抑癌基因LOT1的LOH與乳腺癌和卵巢癌發(fā)生相關(guān)，而ARH1的LOH除與乳腺癌、卵巢癌發(fā)生相關(guān)外[16]，還與囊泡狀甲狀腺癌的形成緊密相關(guān)[17]。IGF2R的LOH與小鼠肝和乳腺腫瘤的形成相關(guān)[6-7]，NNAT基因的LOH與兒童急性白血病有關(guān)[18]，Kank基因的LOH與腎細(xì)胞癌相關(guān)[19]。第三，印跡調(diào)控中心，通常指DMR的失活突變可使染色體上多個(gè)印記的原癌基因和抑癌基因異常表達(dá)。

3.印記與腫瘤的診斷和治療：在生命誕生時(shí)已經(jīng)形成的基因組印記可能是重要的癌前事件，而且每種類型的腫瘤都有相關(guān)基因的特定甲基化模式，這將可能成為腫瘤早期診斷又一潛在指標(biāo)。目前主要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記是應(yīng)用甲基化PCR檢測患者體液(血液、尿液和痰液)中微量DNA是否發(fā)生異常甲基化。

遺傳印記具有可逆性，逆轉(zhuǎn)其改變是腫瘤化學(xué)治療的新策略，目前，有些表觀遺傳藥物已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，如DNA甲基化抑制劑和組蛋白去乙?；敢种苿?。但由于這些藥物通常會(huì)引起基因組廣泛的去甲基化，因而其臨床應(yīng)用尚需時(shí)日[20]。

三、問題和展望

盡管對于遺傳印記的研究取得了很大進(jìn)展，但對于其機(jī)制還有許多問題有待于解決。如，通過何種機(jī)制引起的特異基因異常甲基化；同一印記基因在不同腫瘤以及同一腫瘤不同時(shí)期為何表達(dá)形式不同；同一組織類型中不同模式的印記基因如何共存等等。這些理論局限限制了已有基因的臨床應(yīng)用。印記修飾存在于DNA水平和染色體區(qū)域，表型相對不明顯且無特異性的技術(shù)，研究具有一定的難度。近年，限制性標(biāo)記基因組掃描技術(shù)(restriction landmark genome screening RLGS)等可直接鑒定印記基因技術(shù)的開發(fā)為腫瘤早期診斷和風(fēng)險(xiǎn)評估提供了客觀條件。

研究表明，遺傳印記機(jī)制涉及染色質(zhì)構(gòu)型、DNA甲基化和復(fù)制時(shí)間等[21]，此外，組蛋白乙?；?、DNA甲基化以及染色體重構(gòu)也是值得重視的調(diào)控方式，對組蛋白修飾和染色體改型標(biāo)志系統(tǒng)[22]的研究國內(nèi)外報(bào)道相對較少，可能成為今后研究的重要切入點(diǎn)。

目前，已知的印記基因由于特異性低、靈敏度差而很難應(yīng)用于臨床，國內(nèi)外的研究正致力于發(fā)現(xiàn)新印記基因，尤其是抑癌基因的印跡研究，今后的研究應(yīng)在兼顧尋找高度特異標(biāo)記的同時(shí)，注重基因甲基化模式圖譜及微量診斷等技術(shù)的開發(fā)，從而滿足進(jìn)行個(gè)體監(jiān)測及腫瘤分子亞型鑒別等需要[23]；而在開發(fā)具有高特異、高敏感藥物的同時(shí)，也應(yīng)重視對反義RNA等其他治療手段的探索及應(yīng)用。

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姜爭，王錫山.遺傳印記在人類惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J/CD].中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2013,2(2)：72-74.

10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2013.02.06

黑龍江省博士后基金(LRB87859)；黑龍江省衛(wèi)生廳基金(2011-144)；黑龍江省普通高等學(xué)校醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金

作者電位：150086 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院結(jié)直腸腫瘤外科 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大腸癌研究所

Email：wxshan1208@126.com

2013-01-26)

(本文編輯：馬天翼)