池肇春

中國海洋大學(xué)附屬醫(yī)院青島市市立醫(yī)院消化內(nèi)科(山東青島，266071)

有關(guān)慢性HBV感染引起肝細(xì)胞癌 (HCC)的機(jī)理，近幾年來在基因多態(tài)性與HCC相關(guān)性方面展開了廣泛的研究。大量文獻(xiàn)指出，基因的變異與HCC的發(fā)生密切相關(guān)。研究報告大多來自亞洲，其中中國參研的人數(shù)、規(guī)模及研究成果尤為突出，對HCC的診治提出了新的認(rèn)識，為人類進(jìn)一步研究如何降低肝癌發(fā)病風(fēng)險，治療乙型肝炎和肝癌指出了新的方向，如能及時發(fā)現(xiàn)與篩選HCC易感人群，并提前對易感人群采取干預(yù)和預(yù)防措施，有望能降低HCC的發(fā)病率。

1 STAT4和白細(xì)胞抗原基因變異與HCC的危險性

STAT4(信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4)是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄因子，HLA(人類白細(xì)胞抗原)-DQ為白細(xì)胞抗原DQ基因?，F(xiàn)已肯定它們在HCC發(fā)病上的危險作用。復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)研究所收集了國內(nèi)7個地區(qū)的獨立人群，總計11799例乙型肝炎的血細(xì)胞DNA樣本，包括5480例有乙肝病變的肝癌病例和6319例有乙型肝炎病史但無肝癌的對照者。運用全基因組關(guān)聯(lián)研究 (GWAS)技術(shù)分析，比對分析了兩組人群的全基因序列中近73萬個單核苷酸多態(tài) (SNP)位點的等位基因頻率 (SNP是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異引起的DNA系列多態(tài)性)。最終在STAT4基因和HLA-DQ基因簇上發(fā)現(xiàn)了乙型肝炎癌變風(fēng)險顯著關(guān)聯(lián)的易感基因位點。結(jié)論認(rèn)為STAT4和HLA-DQ基因是乙型肝炎患者罹患肝癌的關(guān)鍵易感基因。其中蔣德科等報告2514例慢性HBV攜帶者，包括1161例HCC，1353例對照組，另6個國內(nèi)獨立人群，計HCC 4319例，無癌對照組4966例，聯(lián)合分析研究指出，在STAT4的rs7574865和HLA-DQ rs9275319兩個位點與HCC的發(fā)生有顯著相關(guān)性，前者P=2.48×10-10，OR=1.21;后者P=2.72 × 10-17，OR=1.49［1］。

一些作者認(rèn)為，HLA/DP-DQ基因變異可影響HBV的清除和肝細(xì)胞癌發(fā)生。新近通過GWAS研究慢性 HBV感染患者，發(fā)現(xiàn) HLA-DP(rs3077和rs9277535)和HLA-DQ(rs2856718和rs7453920)4個SNPs與HCC相關(guān)聯(lián)。Hu等［2］報告1300例 HBV標(biāo)志物陽性的HCC患者，1344例HBV持續(xù)攜帶者，1344例HBV自然清除患者，發(fā)現(xiàn)HLA-DP/DQ變異與HBV清除和HCC的發(fā)生有明顯相關(guān)性。研究指出，HLA-DP rs9277535與 HLA-DQ rs7453920和rs2856718與 HBV的清除有關(guān)。之外，HLA-DP rs3077對HBV持續(xù)感染和HCC發(fā)生均有顯著易感性。

研究指出，不同的國家與種族，HLAⅡ抗原和HCC之間的相關(guān)性有一定差異。埃及的報告HLAⅡDRB1*04、DQB1*02與HCC有顯著相關(guān)性，是發(fā)生HCC的危險因子，而DQB1*06與HCC發(fā)生無關(guān)，認(rèn)為可能是一種保護(hù)基因［3］。Jin 等［4］報告HLA-DRB1*0990102、*080302、和*070101發(fā)生HCC率高。HLA-DRB1*140101等位基因在HCC患者顯著高于無肝癌組，2、4、6年HCC的累計發(fā)生率顯著高于無HLA-DRB1*140101等位基因的患者。結(jié)論認(rèn)為HLA-DRB1*140101在慢性HBV感染患者可能潛在HCC發(fā)生的危險性增加。

2 P53和MDM2多態(tài)性與HCC

P53(抑癌基因)信號途徑對腫瘤進(jìn)展是一個強有力的屏障。P53途徑有兩個SNPs基因位點，即p53密碼子72Arg(精氨酸)72Pro(脯氨酸)和MDM2(murine double minute 2，鼠雙微基因 2)SNP309(T＞G，脫氧胸苷＞脫氧鳥苷)，可引起p53功能紊亂，但兩種SNPs在HCC上的危險性看法尚不一致。MDM2是泛素蛋白連接酶，為一種癌基因，由698個腺嘌呤、491個胞嘧啶、541個鳥嘌呤、624個胸腺嘧啶組成。含有MDM2 a、b、c、d、e 5種。既是抑癌基因p53轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的靶基因之一，也是p53重要的調(diào)節(jié)因子 。Yang等［5］報告350例HCC，230例無HCC患者，96例健康對照組。結(jié)果表明p53 Pro/Pro和MDM2 G/G(鳥嘌呤核苷)基因型與HCC危險有顯著相關(guān)性 (P=0.047)。多態(tài)分析指出，p53 Pro/Pro和MDM2 G/G基因型是HCC復(fù)發(fā)和存活的獨立因子 (P＜0.05)。并發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者有p53 Pro/Pro和MDM2 G/G基因型聯(lián)合存在時比其他基因型的預(yù)后差。表現(xiàn)在DFS(disease-free survival，無病生存)和OS(overall survival，總生存)有顯著不同，即A期患者p53 Pro/Pro和MDM2 G/G基因型聯(lián)合存在和其他基因型比較預(yù)后差 (P＜0.05)，同時伴有HCC發(fā)生的危險性增加，且是一個獨立的預(yù)后不良指標(biāo)。土耳其的一份病例對照研究初步認(rèn)為，p53Arg72Pro多態(tài)性的Pro/Pro純合子尤其是男性HBV感染患者是HCC的易感基因［6］。韓國學(xué)者研究指出，MDM2 SNP309和p53Arg72Pro在慢性HBV感染患者可于早期開始發(fā)生 HCC［7］。

MDM2啟動子SNP309 T＞G影響MDM2蛋白表態(tài)和加速腫瘤形成。Wang等邏輯回歸分析指出，HBV相關(guān)HCC患者和健康對照組或HBV感染無HCC患者之間MDM2 SNP309基因缺失有顯著不同，同時也揭示G等位基因患者比T等位基因患者HCC的發(fā)生率高［8，9］。

3 miRNA多態(tài)性與HCC

miRNAs(微小RNAs)371～373起源于同一個前miRNA(pre-miRNAs)的轉(zhuǎn)錄，在HBV感染相關(guān)的HCC有miRNA上調(diào)，且調(diào)節(jié)HBV感染。Kwak等［10］用Taq Man探針確定基因變異，研究pre-miRNAs-371～373多態(tài)性與HCC發(fā)生和HBV清除的相關(guān)性。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，pre-miRNA-196a功能多態(tài)性可導(dǎo)致HCC易感性。miRNAs是一個非蛋白編碼的RNAs，miRNA表達(dá)異常和結(jié)構(gòu)改變參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。SNP存在于pre-miRNA，可改變miRNA加工、表達(dá)和/或與靶miRNA結(jié)合表現(xiàn)為另一種基因變異型，可導(dǎo)致人類腫瘤的發(fā)生。新近研究指出，miRNA-196a 2 rs11614913(C→T)可改變miRNA-196a2表達(dá)并與靶 mRNA結(jié)合。結(jié)果表明miRNA-196-a2 rs11614913可使HCC(特別是男性HBV感染患者)發(fā)生的危險性增加。確定為 HCC的一個易感基因［11，12］。

4 雙鏈DNA斷裂修復(fù)基因XRCC5多態(tài)性與HCC

XRCC(X-ray repair cross complementing，X線交叉互補修復(fù)基因)目前已有7種。為RAD51(同源重組修復(fù)基因)家族成員，是修復(fù)雙鏈DNA斷裂損傷的基因。環(huán)境危險因子引起DNA損傷，不精確的修復(fù)引起染色體畸變、基因組不穩(wěn)定和肝細(xì)胞癌發(fā)生。XRCC5基因變異可能導(dǎo)致HCC易感性。研究發(fā)現(xiàn)XRCC5 rs16855458可明顯減少HCC的危險性，而XRCC5 rs9288516可明顯增加HCC的危險性，而且rs16855458、rs9288516的作用在HBV感染的患者比無HBV感染者更有意義。根據(jù)單倍體型分析顯示XRCC5基因中有1個風(fēng)險單倍型“AAATC”和兩個保護(hù)單倍型“GGGTT”，后者使 HCC的危險性降低［13］?？梢奨RCC5基因變異在決定個體HCC的易感性上發(fā)揮作用。

XRCC1基因的C.1161 G＞A和C.1799 C＞G基因變異與HCC危險性之間相關(guān)。用PCR-RFLP(聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性)測定上述兩個基因型，研究結(jié)果C.1161 G＞A和C.1799 C＞G伴有HCC危險性增加，且C.1161 G＞A AA基因型比C.1799 C＞G GG野生基因型發(fā)生HCC的危險性高［14］。有報告XRCC4的編碼區(qū)基因多態(tài)性與黃曲霉素B1相關(guān) HCC時指出，XRCC4編碼區(qū)rs28383151AA基因多態(tài)性發(fā)生HCC的危險性增加，它像是一個潛在的促進(jìn)基因，并可作為HCC預(yù)后的生化標(biāo)記［15］。

5 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體2基因內(nèi)含子多態(tài)性與HCC

促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體2(CRHR2)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用。CRHR2同時有它的配體尿皮素 (urocorting，Ucns)和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素 (CRH)，其功能是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和抑制血管生成。新近發(fā)現(xiàn)在許多人類癌細(xì)胞中表達(dá)。并在慢性丙型肝炎病毒感染患者中發(fā)現(xiàn)，CRHR2基因rs2267716多態(tài)性與HCC易感性有關(guān)。用PCR-LDR(配體檢測反應(yīng))，Gu等［16］報告364例HBV相關(guān)HCC，196例HBV感染無HCC和404例健康對照組，結(jié)果HBV相關(guān)HCC比健康對照組或HBV感染無HCC患者對SNP rs2267716等位基因易感性顯著增高。提示CRHR2基因rs2267716多態(tài)性可增加HCC發(fā)生的危險。

6 MDR1基因多態(tài)性與HCC

MDR1(多藥物耐藥1基因)是一個重要的影響HCC易感性的候選基因。Gao等［17］報告353例肝細(xì)胞癌和335例對照組，研究結(jié)果指出，MDR1基因多態(tài)性伴有HCC發(fā)生的危險性增加，但尚需大系列病例研究加以肯定。Yang等［18］用CRS-PCR(創(chuàng)造酶切位點-PCR法)檢測單核苷酸改變，發(fā)現(xiàn)C.1465 C＞T單核苷酸多態(tài)性在所有基因模式發(fā)生HCC的危險性增加，并指出MDR1基因變異是一個有價值的HCC分子標(biāo)記。

7 CYP2E1、HOGG1和XRCC1與肝病和HCC進(jìn)展

CYP2E1(細(xì)胞色素P4502e1)可使HBV相關(guān)肝病的危險性增加2.68倍，發(fā)生HCC增加3.981倍，且發(fā)現(xiàn)在慢性乙型肝炎患者伴有組織活性指數(shù)增高。CYP2E1和 HOGG1［8-氧化鳥嘌呤 DNA糖基化酶(DNA損傷修復(fù)基因)］變異促進(jìn)肝纖維化發(fā)生。CYP2E1與XRCC1基因聯(lián)合或HOGG1與XRCC1基因聯(lián)合，均使HCC發(fā)生的危險性增加。若上述3種基因聯(lián)合變異，通過基因之間的相互作用可使HCC的易感性顯著增加［19］。

8 其他基因多態(tài)性與HCC

可促進(jìn)或抑制 HCC發(fā)生和發(fā)展的基因尚有:TOll樣受體基因變異、免疫調(diào)節(jié) NKT淋巴細(xì)胞、mEH(微粒體環(huán)氧化物水解酶)多態(tài)性、GST(谷胱甘肽硫-轉(zhuǎn)移酶)多態(tài)性、EGF(表皮生長因子 )多態(tài)性、KIF1B(驅(qū)動蛋白樣蛋白)多態(tài)性、RASSF1A(Ras-association domain family 1A，Ras相關(guān)域家族1A)高甲基化、RAD51、TGFR3(轉(zhuǎn)化生長因子Ⅲ型受體)多態(tài)性、GRP78(葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78)、白細(xì)胞端粒酶長度 (leukocyte telomere length)、芳香酶(CYP19)啟動子基因多態(tài)性、亞甲基四氫葉酸還原酶 (MTHFR)和蛋氨酸合成酶還原酶 (MTRR)基因多態(tài)性、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶 (UGT)1A7單倍體型等。

9 結(jié)語

上述眾多基因多態(tài)性與HCC的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)，這是一個重大的進(jìn)展，但大部分這些基因變異并非HCC所特有，這些基因的變異也可發(fā)生身體其他部位的許多腫瘤，故特異性較差。目前大多數(shù)報告的病例數(shù)較少，需在大系列、多國家、多民族、多地區(qū)進(jìn)行研究，以進(jìn)一步確定它們的臨床價值。目前這些基因多態(tài)性用于HCC的診治尚待進(jìn)一步論證和研究。隨著時間的推移，預(yù)測更多與HCC相關(guān)的基因多態(tài)性將會不斷得到發(fā)掘，隨著對HCC發(fā)病機(jī)理的深入了解，有望在HCC防治上有新的突破。

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