摘 要：采用乙醇提取法對(duì)荷葉總黃酮進(jìn)行提取，通過(guò)單因素試驗(yàn)分析，確定最佳的荷葉總黃酮提取工藝。荷葉黃酮醇法提取的最佳工藝是：料液比1：25，提取時(shí)間1h，提取溫度80℃，乙醇濃度60%，驗(yàn)證試驗(yàn)證明實(shí)際提取率為3.82%。

關(guān)鍵詞：總黃酮；荷葉；乙醇提取法

荷葉為睡蓮科植物蓮的葉。荷葉中所含的黃酮類(lèi)化合物，其主要成分是荷葉苷，其次是槲皮素、異槲皮素等常見(jiàn)的黃酮類(lèi)物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)研究表明，黃酮類(lèi)物質(zhì)具有很高的生物活性，如抗氧化作用、抑菌作用、降血脂、減肥作用等[1]。本課題以荷葉為研究對(duì)象，利用乙醇提取法提取總黃酮，從而增加荷葉的附加值，將為荷葉在食品、藥品中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

電熱恒溫水浴鍋、722型分光光度計(jì)、鼓風(fēng)干燥箱、電子天平、粉碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等。

1.2 試驗(yàn)材料

原料：荷葉（湖北武漢）：新鮮、無(wú)污染荷葉，采摘后洗凈，用烘箱60℃烘干。主要試劑：蘆?。ㄉ噭瑖?guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純。

1.3 黃酮測(cè)定方法[2]

用NaN02-Al（N03）3-NaOH體系絡(luò)合化學(xué)吸光法測(cè)定黃酮。用NaN02-Al（N03）3-NaOH體系絡(luò)合化學(xué)吸光法測(cè)定黃酮。準(zhǔn)確稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.625mg，用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇定容于100mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分別置于0、1、2、3、4、5、6號(hào)共7支10mL具塞試管中，用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇補(bǔ)充至5mL，分別加入0.3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%硝酸鋁溶液，混勻，用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇標(biāo)定至刻度線，放置10min后于510nm處，以0號(hào)試劑作為空白參比，測(cè)定其吸光度值。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖1所示。

得到回歸曲線方程：y=0.5011x+0.0022，R2=0.9997。

式中：y，提取液的吸光度；x，提取液黃酮類(lèi)物質(zhì)的濃度，mg/mL。

1.4 荷葉總黃酮單因素試驗(yàn)與分析

稱(chēng)取荷葉，在不同反應(yīng)條件下，測(cè)定總黃酮的提取率，比較選取最佳反應(yīng)條件。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同細(xì)度對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響

稱(chēng)取0.2g荷葉，在浸提溫度80℃、料液比1：25、乙醇濃度60%、提取時(shí)間1h的條件下，分別對(duì)不同細(xì)度的荷葉測(cè)定總黃酮含量。從圖2看出，隨著細(xì)度的提高，荷葉黃酮提取率不斷升高。其中，荷葉在60目和80目條件下，黃酮提取率相差不大。綜合考慮，選擇粉碎60目的荷葉作為提取黃酮的原料。

2.2 不同料液比對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響

稱(chēng)取荷葉0.2g，在浸提溫度80℃、乙醇濃度60%、提取時(shí)間1h條件下，分別測(cè)定不同料液比的荷葉總黃酮含量。由圖3可知，隨著料液比的增加，黃酮提取率增加，當(dāng)料液比超過(guò)1：25后，黃酮的提取率增加幅度不大，因此，選擇料液比為1：25。

2.3 不同反應(yīng)時(shí)間對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響

稱(chēng)取荷葉0.2g，在浸提溫度80℃、料液比1：25、乙醇濃度60%的條件下，分別測(cè)定不同反應(yīng)時(shí)間測(cè)定荷葉總黃酮含量。由圖4可知，通過(guò)反應(yīng)時(shí)間為1h時(shí)，荷葉黃酮提取率最高，因此選擇反應(yīng)時(shí)間為1h。

2.4 不同反應(yīng)溫度對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響

稱(chēng)取荷葉0.2g，在料液比為1：25、乙醇濃度為60%、提取時(shí)間為1h的條件下，分別對(duì)不同反應(yīng)溫度的荷葉測(cè)定總黃酮的提取率。由圖5可知，隨反應(yīng)溫度的升高，黃酮提取率增加，在反應(yīng)溫度為80℃條件下，荷葉總黃酮提取率最高。

2.5 不同乙醇濃度對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響

稱(chēng)取荷葉0.2g，在浸提溫度80℃、料液比1：25、提取時(shí)間1h的條件下，分別測(cè)定不同乙醇濃度下的荷葉總黃酮的提取率。由圖6可知，在乙醇濃度小于60%時(shí)，荷葉黃酮提取率隨乙醇濃度的提高而增高，乙醇濃度大于60%時(shí)，提取率緩慢降低。因此，選取乙醇濃度60%。

3 結(jié)論

采用乙醇提取法對(duì)荷葉總黃酮進(jìn)行提取，通過(guò)單因素試驗(yàn)分析，確定最佳的荷葉總黃酮提取工藝。荷葉黃酮醇法提取的最佳工藝是：料液比1：25，提取時(shí)間1h，提取溫度80℃，乙醇濃度60%，驗(yàn)證試驗(yàn)證明實(shí)際提取率為3.82%。

參考文獻(xiàn)

[1]黃開(kāi)顏，張志國(guó).荷葉研究概況[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（11）：77-78.

[2]張蕾，喬旭光，占習(xí)娟等.超微粉碎對(duì)荷葉黃酮類(lèi)物質(zhì)醇提工藝的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2006，32（11）：142-145.

[3]郭輝，羅宇倩，章華偉等.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助提取荷葉黃酮工藝研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2011，11（1）：119-125。

作者簡(jiǎn)介：何莉萍（1983-），女，漢族，碩士。