摘要：以金毛鱗傘液體培養(yǎng)基優(yōu)化為研究目標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)，對金毛鱗傘液體培養(yǎng)基配方的碳源、氮源、無機(jī)鹽（K2HPO4、MgSO4·7H2O）成分濃度進(jìn)行篩選比較，以尋求最佳的液體培養(yǎng)基配方。結(jié)果表明，金毛鱗傘液體培養(yǎng)基最佳配方為：葡萄糖20 g/L、玉米粉 50 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L。

關(guān)鍵詞：金毛鱗傘；液體培養(yǎng)；配方優(yōu)化

中圖分類號(hào)：Q949.329+.81；S646.1+9；Q93-335 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）02-0378-03

金毛鱗傘[Pholiota attrivella（Fr.）Kumm.]屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）球蓋菇科（Strophariaceae）鱗傘屬[Pholiota（Fr.）Kumm.][1，2]，為珍貴的野生食用菌，不但營養(yǎng)豐富、味道鮮美，還具有較高的藥用價(jià)值[3]。野生金毛鱗傘主要分布在黑龍江、云南、新疆、吉林等?。ㄗ灾螀^(qū)），其野生菌種的馴化已經(jīng)取得了良好進(jìn)展[4，5]，并且金毛鱗傘作為一種大型木腐真菌相對較容易進(jìn)行人工栽培。試驗(yàn)旨在對金毛鱗傘的液體培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，從而為其人工栽培奠定基礎(chǔ)，以推動(dòng)金毛鱗傘的開發(fā)與利用。

1 材料與方法

1.1 供試菌種及基礎(chǔ)培養(yǎng)基

1.1.1 菌種 金毛鱗傘菌種引自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院食用菌研究所，為斜面一級(jí)菌種。

1.1.2 菌種活化培養(yǎng)基 采用加富的PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L、瓊脂粉20 g/L）制作斜面培養(yǎng)基，用以活化菌種[6]。

1.1.3 對照培養(yǎng)基 選擇馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L作為液體培養(yǎng)基（空白對照）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 碳源單因素試驗(yàn) 分別以玉米粉、洋蔥、柞木及可溶性淀粉來替換對照培養(yǎng)基中的碳源馬鈴薯，比較金毛鱗傘在各碳源處理培養(yǎng)基培養(yǎng)后的菌絲體干重產(chǎn)量[7]。其中，玉米粉取其浸提液，設(shè)置濃度梯度分別為40、45、50、55、60 g/L；洋蔥取其浸提液，設(shè)置濃度梯度分別為100、150、200、250、300 g/L；柞木依然取其浸提液，濃度梯度設(shè)置為200、250、300、350、400 g/L；可溶性淀粉取其溶液，設(shè)置濃度梯度分別為17、20、23、26、29 g/L。將不同碳源的濃度梯度由低到高分別編號(hào)為a、b、c、d、e，即a代表該碳源在單因素試驗(yàn)中的最低濃度，e代表其最高濃度。

1.2.2 氮源單因素試驗(yàn) 分別用豆粕、麩皮、硫酸銨及酵母浸膏替換對照培養(yǎng)基中的氮源蛋白胨，比較金毛鱗傘在各氮源處理培養(yǎng)基培養(yǎng)后的菌絲體干重產(chǎn)量。其中，豆粕取其浸提液，設(shè)置濃度梯度為40、45、50、55、60 g/L；麩皮取其浸提液，設(shè)置濃度梯度為20、25、30、35、40 g/L；酵母浸膏取其溶液，濃度梯度設(shè)置為3、4、5、6、7 g/L；硫酸銨取其溶液，濃度梯度設(shè)置為2、3、4、5、6 g/L。依照對碳源試驗(yàn)組編號(hào)的方法，將不同氮源的濃度梯度由低到高分別編號(hào)為f、g、h、i、j，即f代表該氮源在單因素試驗(yàn)中的最低濃度，j代表其最高濃度。

1.2.3 無機(jī)鹽濃度篩選 在對照培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，把處理中的無機(jī)鹽成分K2HPO4和MgSO4·7H2O的濃度分別設(shè)置為1、2、3、4、5 g/L梯度。比較金毛鱗傘在各無機(jī)鹽處理培養(yǎng)基中培養(yǎng)后對菌絲體干重產(chǎn)量最適宜的濃度。

1.2.4 正交試驗(yàn)L9（34） 根據(jù)碳源單因素試驗(yàn)、氮源單因素試驗(yàn)、無機(jī)鹽處理濃度試驗(yàn)的綜合結(jié)果，設(shè)計(jì)了L9（34）正交試驗(yàn)，4個(gè)因素、3個(gè)水平分別是因素A：玉米粉，浸提液3個(gè)濃度水平分別為45、50、55 g/L；因素B：豆粕，浸提液3個(gè)濃度水平分別為40、45、50 g/L；因素C：K2HPO4，3個(gè)濃度水平分別為1、2、3 g/L；因素D：MgSO4·7H2O，3個(gè)濃度水平分別為3、4、5 g/L，各因素、水平組合見表1。其中葡萄糖濃度不變，仍舊是20 g/L，比較各水平組合對金毛鱗傘培養(yǎng)后菌絲體干重產(chǎn)量的影響[8，9]；并根據(jù)正交試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證培養(yǎng)試驗(yàn)。

1.3 培養(yǎng)方法

液體培養(yǎng)基盛裝于規(guī)格為250 mL的三角瓶中，每瓶裝液量為80 mL，使用普通棉塞。培養(yǎng)基在121 ℃、0.105 MPa壓力下滅菌30 min，冷卻，放置24 h。打開超凈工作臺(tái)，調(diào)為慢風(fēng)，并用紫外燈照射30 min，在超凈工作臺(tái)將斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基上，每支斜面菌種接4個(gè)三角瓶。在26 ℃條件下靜置24 h。然后置于恒溫?fù)u床上，設(shè)置轉(zhuǎn)速160 r/min、溫度26 ℃，培養(yǎng)7 d[8]；每個(gè)試驗(yàn)單元、每個(gè)處理設(shè)置5次重復(fù)。

1.4 檢測方法

培養(yǎng)結(jié)束后，將獲得的培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，設(shè)置轉(zhuǎn)速3 000 r/min、離心10 min，菌絲體水洗處理2次，在60 ℃烘箱內(nèi)烘干至恒重[10-12]，分別測取各處理菌絲體的干重（g/L），取其中長勢正常的各重復(fù)均值，以此作為評價(jià)參考。

2 結(jié)果與分析

2.1 碳源對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響

各碳源處理及其濃度對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響結(jié)果見表2。由表2可見，金毛鱗傘對碳源的選擇性不高，對玉米粉、洋蔥、柞木、可溶性淀粉這幾種碳源均可利用。不過在以玉米粉為碳源的培養(yǎng)基中長勢良好，菌絲干重明顯優(yōu)于其他碳源的菌絲干重；其中玉米粉濃度由50 g/L增加到55 g/L時(shí)，金毛鱗傘菌絲干重只有十分微小的增加，但卻要多消耗5 g/L的原料，所以從經(jīng)濟(jì)角度比較上看，選取玉米粉50 g/L作為最佳的培養(yǎng)濃度是非常劃算的。由于玉米粉來源廣泛、價(jià)格適中，農(nóng)民很容易買到，因此作為金毛鱗傘菌液體培養(yǎng)基原料就非常有現(xiàn)實(shí)意義。

2.2 氮源對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響

各氮源處理及其濃度對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響結(jié)果見表3，由表3可見，無機(jī)氮源硫酸銨對金毛鱗傘菌絲的生長效果不佳，而使用豆粕的效果卻非常突出。豆粕是大豆加工后的工業(yè)殘料，價(jià)格十分低廉，所以豆粕作為金毛鱗傘液體培養(yǎng)基的氮源是比較理想的選擇。在本次試驗(yàn)中，豆粕的最佳添加量為50 g/L。

2.3 無機(jī)鹽對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響

各無機(jī)鹽處理濃度對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響結(jié)果見表4。由表4可見，無機(jī)鹽K2HPO4的最佳濃度并不是3 g/L，而是2 g/L；而MgSO4·7H2O的最佳濃度是4 g/L。

2.4 正交試驗(yàn)對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的影響

4因素、3水平正交試驗(yàn)L9（34）對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量的比較結(jié)果見表5。由表5的極差分析可知，不同因素對金毛鱗傘菌絲干重產(chǎn)量影響的順序依次為玉米粉、豆粕、K2HPO4、MgSO4·7H2O。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果得出的最佳組合為A2B3C3D2，即玉米粉浸提液濃度為 50 g/L，豆粕浸提液濃度為50 g/L， K2HPO4 3 g/L，MgSO4·7H2O 4 g/L。由于對照在正交設(shè)計(jì)中未出現(xiàn)，因此選取正交試驗(yàn)中的A2B3C1D2組合作為正交試驗(yàn)的對照，對最佳組合A2B3C3D2進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果在驗(yàn)證培養(yǎng)試驗(yàn)中，A2B3C3D2組合培養(yǎng)后的菌絲體干重可達(dá)7.03 g/L，而A2B3C1D2為6.75 g/L，由此證明A2B3C3D2確實(shí)是最佳的組合。

3 小結(jié)

金毛鱗傘菌絲培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，在碳源單因素試驗(yàn)中，濃度為50 g/L的玉米粉（玉米粉50 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的碳源培養(yǎng)基適合金毛鱗傘菌絲培養(yǎng)。在氮源單因素試驗(yàn)中，濃度為50 g/L的豆粕（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的氮源培養(yǎng)基適合金毛鱗傘菌絲培養(yǎng)。在無機(jī)鹽試驗(yàn)中，濃度為2 g/L的K2HPO4（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 2 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的培養(yǎng)基、濃度為4 g/L的MgSO4·7H2O（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L）的培養(yǎng)基適于金毛鱗傘菌絲培養(yǎng)。在上述試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)L9（34）得到的金毛鱗傘菌絲培養(yǎng)最佳配方為：葡萄糖20 g/L、玉米粉 50 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L。

參考文獻(xiàn)：

[1] 圖力古爾，田恩靜，王 歡.中國的球蓋菇科（一）鱗傘屬[J].菌物研究，2005，3（3）：1-50.

[2] 卯曉嵐.中國大型真菌[M].鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，1999. 231-235.

[3] 王 歡.鱗傘屬（Pholiota）真菌個(gè)體發(fā)育研究[D]. 長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

[4] 田恩靜，圖力古爾.中國鱗傘屬（廣義）已知種類及其分布[J].菌物研究，2004，2（1）：25-34.

[5] 楊 雪，曹哲明，劉吉開.金毛鱗傘的分離、鑒定及營養(yǎng)特性的初探[J].食用菌，2003，25（2）：11-12.

[6] 常 驥，曾憲錄，何 顯.白鱗傘的特性及栽培馴化研究[J].食用菌，2002，24（4）：15-17.

[7] 圖力古爾，王 歡，宋瑞清.光帽鱗傘子實(shí)體個(gè)體發(fā)育[J]. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，36（1）：45-47，74.

[8] 唐玉琴，李長田，趙義濤.食用菌生產(chǎn)技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.28-68.

[9] 黃清榮，楊立紅，劉書濤，等.黃傘液體培養(yǎng)碳氮源的優(yōu)選[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25（6）：611-614.

[10] 林應(yīng)興，田景芝，童金華.黃傘的研究進(jìn)展[J].亞熱帶農(nóng)業(yè)研究，2009，5（2）：90-93.

[11] 常明昌.食用菌栽培學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003.27-31.

[12] 陳士瑜.珍稀菇菌栽培與加工[M].北京：金盾出版社，2003. 286-301.