摘要：對桂林市從湖南省引進(jìn)的金銀花品種湘蕾進(jìn)行了田間生長狀況調(diào)查，測定了湘蕾葉片中綠原酸的含量。結(jié)果表明，湘蕾在桂林市生長良好，而且出現(xiàn)了一年開花2次的株系，葉片綠原酸含量也比較高。為桂林市下一步選擇金銀花快速生長材料、開展金銀花豐花新品種選育、開辟綠原酸提取新途徑、加快金銀花產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供了有力支撐。

關(guān)鍵詞：金銀花；品種；選育；綠原酸；桂林市

中圖分類號：S567.7+9；S502.2；Q946.82+7（673GL） 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）02-0374-04

金銀花具有清熱解毒之功效，在中醫(yī)上為常用中藥。近年來金銀花栽培面積大幅增加，僅湖南省的金銀花品種湘蕾（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.cv. Xianglei）的種植面積就超過了0.27萬hm2，產(chǎn)品暢銷國內(nèi)外市場[1]。金銀花主要的特征成分和有效成分是綠原酸[2]，研究表明，綠原酸具有廣泛的藥理功效和生物活性，對人類的消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)等病癥的預(yù)防具有不錯的效果[3-6]。目前對綠原酸應(yīng)用推廣的研究正逐漸拓展至食品、保健和日用化工等多個領(lǐng)域[7]，而關(guān)于金銀花的綠原酸提取主要集中在花中綠原酸的含量上，很少涉及到植物的其他部位。廣西壯族自治區(qū)本地所產(chǎn)的金銀花大多數(shù)在中藥里歸屬山銀花，金銀花和山銀花在很多方面存在著一定的差異[8，9]。試驗以從湖南省引種到桂林市的湘蕾（在中藥里歸屬山銀花）[10]為研究對象，試圖從湘蕾的生長狀況來了解桂林市的生態(tài)環(huán)境對發(fā)展湘蕾的影響，并從中選擇表現(xiàn)優(yōu)異的株系作為適合當(dāng)?shù)赝茝V的金銀花新品種候補(bǔ)對象，同時對湘蕾葉片中綠原酸含量進(jìn)行了初探，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料來自于桂林市下鑾塘村金銀花基地種植的湘蕾。儀器主要有Carry50型紫外可見分光光度計（美國VARIAN公司）、KQ-500型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、DHG-9036A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實驗儀器有限公司）。試劑（藥品）主要有95%乙醇、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥97%，Sigma公司），所用水為二次蒸餾水。其他所用試劑均為分析純。

1.2 田間生長調(diào)查

1.2.1 第一次篩選 2010年春季從湖南省引種到桂林市的湘蕾幼苗大約為12萬株，栽培在下鑾塘村金銀花基地12個小區(qū)里，每個小區(qū)面積大約有2.27 hm2，株行距1.5 m × 1.5 m，12個小區(qū)合計27.00 hm2。移栽當(dāng)時由于對種植環(huán)境的差異考慮不周，導(dǎo)致部分小區(qū)在2011年受旱或受澇，因此在初次篩選后，確定了長勢良好的2個小區(qū)，大約有2萬株。

1.2.2 第二次篩選 對入選的2個小區(qū)里的湘蕾植株進(jìn)行第二次篩選，選取生長良好、無病蟲害的健壯植株，田間按排行和株數(shù)進(jìn)行編號，記錄所調(diào)查的定點位置，結(jié)果入選的有600株。每間隔10 d測量1次所選植株的株高、新生側(cè)枝的數(shù)目、樹冠最大伸展直徑，并對花簇進(jìn)行初步采集，記錄花簇數(shù)量。從2011年6月開始，每隔一定時間測定所選植株的生長狀況；經(jīng)過3次測定并整理有關(guān)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確定出155株湘蕾植株。

1.2.3 第三次篩選 對復(fù)選的155株湘蕾植株在生長期繼續(xù)跟蹤調(diào)查，每間隔10 d測量1次植株的株高、新生側(cè)枝的數(shù)目、樹冠最大伸展直徑，并對花簇進(jìn)行采集，記錄花簇數(shù)量，共進(jìn)行3次。

1.3 葉片中綠原酸含量的測定

1.3.1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確稱量干燥處理后的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置于50 mL容量瓶中，用70 %的乙醇定容至刻度，配成標(biāo)準(zhǔn)品溶液母液，以此標(biāo)準(zhǔn)液母液為基準(zhǔn)。分別移取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL母液置于25 mL容量瓶中，并用70 %乙醇定容至刻度，然后用紫外分光光度計于波長330 nm處測定各濃度的吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)、以吸光度值為縱坐標(biāo)，作出綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線[11，12]。

1.3.2 葉片中綠原酸含量的測定 對田間編號的湘蕾植株從其中選取生長具有優(yōu)勢且無病蟲害的39株樣株（分別是1-2、1-5、2-4、2-10、3-10、3-20、4-9、4-16、5-7、5-11、5-13、5-17、6-5、6-7、6-11、6-20、8-2、8-8、8-9、10-7、10-8、11-4、12-6、12-8、12-9、16-2、20-1、20-3、21-2、22-1、22-2、28-6、34-2、40-1、52-1、5001、5002、5003、5004），分別剪下其植株的老葉（二年生）、新葉（一年生）各10片，然后分別置于自制紙質(zhì)封袋內(nèi)貼簽帶回，立即用直徑為6 mm的打孔器在葉脈兩側(cè)均勻取小圓片樣材，每個樣株新葉和老葉小圓片隨機(jī)各取10片，3片為一組置于恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)60 ℃恒溫干燥48 h，3次平行；干燥后放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，然后稱量每3片葉的重量。將干燥后的葉片按株號分別放入具塞試管中，加入75%乙醇10 mL，于60 ℃恒溫水浴2 h，取出試管搖勻，吸取上清液4 mL，測定吸光度，3次平行。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的綠原酸含量。綠原酸的提取率=（3片葉的綠原酸含量/3片葉的重量）×100%。

2 結(jié)果及分析

2.1 湘蕾的生長狀況

2.1.1 植株的生長 通過連續(xù)3次調(diào)查，在155株湘蕾植株中發(fā)現(xiàn)有56株在花的數(shù)量和植株的生長能力上占有優(yōu)勢，將其中在單項生長指標(biāo)上領(lǐng)先的前10株分別列于表1、表2、表3中。其中，株高生長最快的植株為編號20-1，其日均生長高度為2.30 cm（表1）；新生側(cè)枝數(shù)最多的植株為1-5，其在3次測量中共新生出7個側(cè)枝（表2）；樹冠直徑擴(kuò)展最快的植株為1-10，其日均樹冠直徑擴(kuò)展為2.45 cm（表3）。通過對株高生長速度、新生側(cè)枝數(shù)量、樹冠直徑擴(kuò)展大小等3項指標(biāo)的綜合比較，發(fā)現(xiàn)4-2（日均生長高度2.25 cm，新生側(cè)枝總數(shù)3支，日均樹冠直徑擴(kuò)展1.70 cm）、20-1（日均生長高度2.30 cm，新生側(cè)枝總數(shù)3支，日均樹冠直徑擴(kuò)展1.40 cm）和23-1（日均生長高度1.90 cm，新生側(cè)枝總數(shù)5支，日均樹冠直徑擴(kuò)展1.60 cm）這3株植株在3項指標(biāo)中都具有明顯的綜合優(yōu)勢，因此可以用于下一步探尋植株快速生長材料的研究。另外，具備2項生長指標(biāo)領(lǐng)先的有4株，即編號為19-3、19-4、6-2、3-4的植株，它們的生長潛力也將繼續(xù)發(fā)掘。

2.1.2 植株花簇調(diào)查 調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，第一年引種到桂林市的湘蕾植株苗木成活率在90%，植株長勢比較好的占總植株數(shù)的2/3，在這些長勢較好的植株中大部分開花正常、數(shù)量較多；但是田間發(fā)現(xiàn)到11月份有21株又開了花（圖1），而在傳統(tǒng)上湘蕾每年春季只開一次花。這些秋季開花的植株有助于拓寬研究湘蕾花總產(chǎn)量的思路，為此從秋季開花的21株中選擇花簇數(shù)領(lǐng)先的前10株列于表4。從表4可知，株號17-3、22-2、15-1的單株花簇數(shù)達(dá)到了20以上，8-2、10-2的單株花簇數(shù)也超過了15，是幾個不錯的、具有選種價值的豐花株系材料。

2.2 湘蕾葉片中綠原酸含量測定

2.2.1 綠原酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線 試驗測定并制作的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，曲線方程：

y=0.055 9 x+0.002 9，r2=0.999 4。

2.2.2 湘蕾老葉和新葉中綠原酸含量比較 對39個湘蕾樣株的老葉和新葉葉樣小圓片（直徑6 mm）干重測定結(jié)果顯示，老葉的小圓片干重為0.001 9～0.003 8 g，平均干重為0.003 3 g；新葉的小圓片干重為0.001 0～0.003 9 g，平均干重為0.002 5 g。對39個湘蕾樣株的老葉和新葉葉樣綠原酸含量測定結(jié)果顯示，老葉葉樣綠原酸含量為0.041 1～0.150 0 mg/mL，平均含量為0.065 2 mg/mL，綠原酸的提取率為1.058 0%～3.900 3%，其平均提取率為2.010 6%（表5）；新葉葉樣綠原酸含量為0.051 6～0.101 5 mg/mL，平均含量為0.051 6 mg/mL，綠原酸的提取率為1.109 5%～5.788 2%，其平均提取率為2.199 0%（表5）。其中34-2、5-11、8-9、22-2、5003、20-1、1-5、1-2等8株的綠原酸含量老葉、新葉均比較高。

3 小結(jié)

通過對湘蕾的植株生長高度、樹冠直徑擴(kuò)展、新生側(cè)枝數(shù)目3項生長指標(biāo)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同時具備3項生長指標(biāo)領(lǐng)先的有3株，即編號為4-2、20-1、23-1的植株；同時具備2項生長指標(biāo)領(lǐng)先的有4株，即編號為19-3、19-4、6-2、3-4的植株。為了后續(xù)研究的便利，將它們暫定名為漓韻101～199品種系列，具體見表6；漓韻之意為桂林韻農(nóng)生態(tài)農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限責(zé)任公司選擇之意。

在對湘蕾花簇的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)了一年開2次花的21株植株，尤其是秋季花產(chǎn)量大的植株如17-3、22-2、15-1、8-2、10-2等可以作為今后選擇豐花品種的株系材料。同樣是為了后續(xù)研究的便利，將它們暫定名為漓韻201～299品種系列，具體見表6。

對湘蕾39株樣株的葉片中綠原酸的含量測定結(jié)果顯示，老葉綠原酸平均提取率為2.010 6%，新葉綠原酸平均提取率為2.199 0%。其中34-2、5-11、8-9、22-2、5003、20-1、1-5、1-2等8株的綠原酸含量比較高，這對于開辟綠原酸提取新途徑提供了可行性。同樣是為了后續(xù)研究的便利，將它們暫定名為漓韻301～399品種系列，具體見表6。

總體而言，湘蕾在桂林市的引種是成功的，而且湘蕾葉片中綠原酸的含量也是比較可觀的。上述3類漓韻系列材料的確定和研究，將為桂林市開展金銀花育種、栽培、藥用成分綠原酸提取等方面的技術(shù)探討與產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供有說服力的支撐。

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