[摘要] 目的 探討干擾素-γ、白介素-32和白細胞介素-1β在原因不明習慣性流產(chǎn)中的表達及臨床意義。 方法 ELISA法檢測URSA組、正常妊娠組和健康對照組血清中IFN-γ、IL-32和IL-1β的濃度，并進行統(tǒng)計學分析。 結果 URSA組IFN-γ、IL-32和IL-1β的血清濃度水平顯著高于健康對照組和正常妊娠組（Ｐ ＜ ０．０１）；正常妊娠組較健康對照組的IFN-γ、IL-32和IL-1β血清濃度水平均顯著下降（Ｐ均＜０．０１）。 結論 IFN-γ、IL-1β、IL-32反饋環(huán)可能參與了URSA的發(fā)生，對其血清濃度的檢測可作為監(jiān)測URSA病人治療效果和再次妊娠結局的指標。

[關鍵詞] URSA；干擾素-γ；白介素-32；白細胞介素-1β

[中圖分類號] R741.21[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）10-0082-02

Clinical significance of IFN-γ、IL-32、IL-1β in unexplained recurrent spontaneous abortion

SUN Congcong LIANG Yujie CHEN Qian ZHU Dan ZHU Yanle ZHENG Keqiong YAN Luoyuan

Department of Gynaecology and Obstetrics，the Affiliated Yueqing Hospital of Wenzhou Medical College，Yueqing 325600， China

[Abstract] Objective To explore the expression and the clinical significance of IFN-γ，IL-32 and IL-1β in Unexplained recurrent spontaneous abortion. Methods In method of ELISA to detect the serum level of IFN-γ， IL-32 and IL-1β in healthy control group， URSA group， pathological pregnancy group. Results The serum level of IFN-γ，IL-32 and IL-1β in URSA group are significantly increased as compared with healthy control group and pathological pregnancy group(P ＜0.01). The serum level of IFN-γ、IL-32 and IL-1β are significantly lower in pathological pregnancy group than in the healthy control group (P ＜ 0.05). Conclusion The IFN-γ，IL-32，IL-1βfeedback loop maybe involved in Unexplained recurrent spontaneous abortion.

[Key words] Unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA); IFN-γ; IL-32; IL-1β

原因不明復發(fā)性流產(chǎn)（uｎｅｘplained recurrent spontaneous abortion， URSA）是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)，且不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因。生殖免疫學觀點認為，正常妊娠的維持有賴于妊娠婦女對胚胎半同種抗原的免疫耐受，一旦這種母胎免疫耐受被打破，將導致流產(chǎn)的發(fā)生。正常妊娠過程中，Th1/Th2型細胞因子保持一定的平衡，其中Th2型細胞因子占優(yōu)勢[1]，母體內(nèi)IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路應受到抑制，可確保母嬰免疫耐受。一旦此正反饋環(huán)失去控制，無限放大Th1模式，最終可能導致URSA的發(fā)生[2]。本研究通過檢測IFN-γ、IL-32和IL-1β在原因不明習慣性流產(chǎn)中的血清濃度水平，以探討IFN-γ、IL-32、IL-1β反饋環(huán)在原因不明習慣性流產(chǎn)中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對象

URSA組60例，均為本院婦產(chǎn)科門診患者，所有病例均經(jīng)過詳細詢問病史及體格檢查，同時具備以下條件：①連續(xù)發(fā)生 3 次或 3 次以上原發(fā)性早期自然流產(chǎn)（３~６次），最后一次發(fā)生在 1 年以內(nèi)；②夫婦雙方染色體檢查正常；③女方生殖道檢查無解剖學畸形；④生殖內(nèi)分泌激素水平測定及診斷性刮宮檢查排除內(nèi)分泌因素；⑤對宮頸分泌物進行PCR 檢查排除生殖系統(tǒng)感染；⑥抗磷脂抗體等自身免疫性抗體檢查結果顯示陰性；⑦未進行過主動免疫治療；⑧男方精液行常規(guī)檢查結果顯示正常。正常妊娠組30例，為同期妊娠 12周以內(nèi)的正常妊娠女性，年齡 21～30歲，平均（25.40±2.95）歲，無自然流產(chǎn)史、無死胎死產(chǎn)史，無合并感染及自身免疫性疾病。本次妊娠期間無陰道流血及下腹疼痛等先兆流產(chǎn)的癥狀和體征；B 超顯示胚胎發(fā)育正常。正常非孕婦女組（對照組）22例，為同期健康已正常生育婦女，既往無不良孕產(chǎn)史，有一胎及以上正常足月分娩史，年齡25 ~ 35歲，平均（２９．１２±２．３２）歲。對三組對象的一般資料進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。

1.2 血清IL-32、IFN-γ和IL-1β測定方法

三組對象均空腹采集外周靜脈自凝血5 mL，血液凝固后3 000 r/min離心5 min，分離血清置Eppendorf管中，-20℃凍存?zhèn)錅y。采用ELISA法檢測血清中IFN-γ、IL-32、IL-1β的水平。IL-1β ELISA試劑盒由北京博奧森生物技術有限公司提供，產(chǎn)品貨號H1025；IFN-γ ELISA試劑盒由上海亨代勞商貿(mào)有限公司提供，產(chǎn)品貨號Y10033A；IL-32 ELISA試劑盒由上海亞培生物科技有限公司提供，產(chǎn)品編號E1802h。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組間不同指標間差異采用單因素方差分析，兩兩比較，方差齊時采用LSD法，不齊時采用Dunnett's T3法。

2 結果

將三組研究對象血清IFN-γ、IL-32、IL-1β的濃度進行比較可以看出：①IFN-γ濃度：URSA組血清水平比正常妊娠組和對照組均顯著提高，正常妊娠組比對照組顯著下降；②IL-32：URSA組血清水平比正常妊娠組和對照組亦均顯著提高，正常妊娠組比對照組顯著下降；③IL-1β：URSA組血清水平比正常妊娠組和對照組亦均顯著提高，正常妊娠組比對照組顯著下降。

3 討論

在生理妊娠過程中，母體和胚胎間免疫雙向調(diào)節(jié)維持在一個動態(tài)平衡水平是妊娠成功的關鍵。懷孕期間母體內(nèi)存在著復雜的免疫調(diào)節(jié)機制，主要表現(xiàn)為免疫耐受或免疫抑制增強，而免疫排斥減弱，一旦這種平衡狀態(tài)被打破，就會導致病理性妊娠，甚至發(fā)生流產(chǎn)[3]。

正常妊娠表現(xiàn)為一種特殊的Th2現(xiàn)象，Th1處于抑制狀態(tài)，各種 Th1型的細胞因子表達水平降低甚至消失，Thl/Th2 間的平衡始終保持在最有利于維持妊娠的向 Th2 型細胞因子的偏移。Th1 細胞主要分泌 IL-2、IFN-γ 和 TNF-β 等，參與細胞免疫、遲發(fā)型超敏反應和急性移植排斥反應，具有抗胞內(nèi)病原體感染、抗病毒、抗腫瘤及妊娠中免疫排斥作用；而 Th2 細胞分泌 IL-4、IL-5、IL-6 和 IL-10 等，主要功能是介導體液免疫，刺激 B 細胞增殖并產(chǎn)生抗體，對同種移植產(chǎn)生免疫耐受。因此當Th1型細胞因子過度表達時，將導致反復自然流產(chǎn)（URSA）的發(fā)生[4-6]。IFN-γ是由Thl細胞所分泌的特征性細胞因子，能激活T細胞和吞噬細胞，而被激活的T細胞和吞噬細胞能夠轉錄合成IL-32； IL-32通過活化NF-κB和p38 MAPK途徑刺激T細胞和吞噬細胞釋放IL-1β；IL-1β又可以正反饋作用于T細胞和吞噬細胞等，使之表達的IFN-γ受體明顯增多，引發(fā)更多的IFN-γ活化[7]，形成了IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路，以T細胞和吞噬細胞為中心，不斷放大Th1炎癥免疫模式。

從本實驗的研究結果可以看出IFN-γ、IL-32和IL-1β三種細胞因子在三組實驗對象血清中的濃度變化表現(xiàn)出一致性。通過本結果我們可以作如下分析和推斷：①反復發(fā)生自然流產(chǎn)的患者IFN-γ、IL-32、IL-1β的血清濃度明顯升高，反映出IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制，IFN-γ受體越來越多，呈現(xiàn)出過度活化狀態(tài)。IFN-γ是 Th1細胞因子，促進 Th1 細胞并抑制 Th2 型細胞的分化及分泌功能，降低 IL-4、IL-10的活性。這樣，不明原因自然流產(chǎn)患者體內(nèi)Thl/Th2的平衡狀態(tài)被打破，從而導致了流產(chǎn)的發(fā)生。②正常妊娠組IFN-γ濃度比對照組顯著下降，表明Th1處于抑制狀態(tài)，使Thl/Th2 間的平衡始終保持在最有利于維持妊娠的 Th2 型細胞因子偏移。至此我們認為以T淋巴細胞亞群為中心，IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制，導致了Th1 細胞的過度表達，同時也可能抑制了Th2 型細胞的分化及分泌功能（有待進一步的研究證實），也就是說IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制是打破Thl/Th2的平衡狀態(tài)的因素之一，從而引起了URSA疾病的發(fā)生。③在正常妊娠組IL-32和IL-1β的血清濃度比正常對照組顯著下降?？赡苁且驗?IL-32主要由 IFN-γ誘導產(chǎn)生且IL-32 mRNA在免疫組織中的表達高于其它組織中的表達[8]。而IL-1β濃度的下降可能與IL-32濃度的下降有關，因為IL-32能通過活化NF-κB和p38 MAPK途徑刺激T細胞和吞噬細胞釋放IL-1β[7]。但是IL-32和IL-1β除了在IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路中對Thl/Th2平衡起作用，其血清濃度的變化對生理性妊娠過程是否存在影響尚有待進一步的研究得出結論。通過本試驗我們可以得出結論——對IFN-γ、IL-32、IL-1β血清濃度的檢測不僅可作為監(jiān)測URSA患者治療效果和再次妊娠結局的指標，也為進一步研究URSA的治療方法和發(fā)病機制提供了新思路。而這些指標參與URSA發(fā)生的具體機制還有待更加深入地研究。

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（收稿日期：2011-12-09）