摘 要 根據(jù)復(fù)方丹參類制劑的處方和特點(diǎn)，結(jié)合其質(zhì)量控制的制定依據(jù)、質(zhì)量考核的歷史情況和現(xiàn)狀，以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變更，本文綜述了現(xiàn)代分析技術(shù)在復(fù)方丹參類制劑質(zhì)控中的應(yīng)用；由于不同企業(yè)間產(chǎn)品工藝、質(zhì)量等存在差距，現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍不能滿足丹參類制劑質(zhì)控的要求，有必要增加對(duì)多成分、特別是三七中活性成分的定量檢查項(xiàng)目。

關(guān)鍵詞 復(fù)方丹參 質(zhì)量控制 儀器分析

中圖分類號(hào)：R921.2；O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C 文章編號(hào)：1006-1533(2012)07-0042-04

復(fù)方丹參制劑是由丹參、三七提取物和冰片一起制成的中成藥制劑。目前臨床應(yīng)用的有復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參顆粒和復(fù)方丹參滴丸等，均用于氣滯血瘀所致的胸痹，胸悶和冠心病、心絞痛[1]。

1 復(fù)方丹參制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變更歷程

在《中國(guó)藥典》2000年版頒布實(shí)施之前，上市產(chǎn)品存在嚴(yán)重的質(zhì)量問(wèn)題，一次抽檢的59批樣品中28批未檢出丹參酮II A、5批未檢出三七皂苷R1[2]，原因在于部分企業(yè)為了降低成本，采用少加、甚至不加貴重藥材、或使用低質(zhì)量的藥材，或擅自改變提取工藝，而落后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)法實(shí)現(xiàn)控制質(zhì)量的目的[3]。

《中國(guó)藥典》2000年版開始在復(fù)方丹參片正文中增加了丹參酮IIA的含量測(cè)定，為產(chǎn)品的質(zhì)量提供了法律保障，促使整體質(zhì)量得以提高。2004年的一次抽驗(yàn)中， 40批復(fù)方丹參片中只有兩批丹參酮II A含量不合格[4]。

《中國(guó)藥典》2005年版針對(duì)復(fù)方丹參片又增加了丹酚酸B的含量測(cè)定。使得對(duì)有效成分的控制面更加廣泛。進(jìn)一步提高了企業(yè)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的重視程度。2009年山東省的抽檢結(jié)果顯示，14家企業(yè)生產(chǎn)的34批復(fù)方丹參片中，丹酚酸B的合格率為94%[5]。

表1列出了2000年、2005年和2010年三版《中國(guó)藥典》中關(guān)于復(fù)方丹參片和復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變更歷程。

2 現(xiàn)代分析技術(shù)在復(fù)方丹參制劑質(zhì)控中的應(yīng)用

從復(fù)方丹參制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變更中可以看出，質(zhì)控手段的提高是建立在現(xiàn)代分析技術(shù)不斷發(fā)展的基礎(chǔ)上的。已有技術(shù)的成熟和新技術(shù)的產(chǎn)生，使制藥工業(yè)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控更好、更準(zhǔn)、更快、更全面。復(fù)方丹參類制劑作為一種臨床用量較大的中成藥，一直是研究分析的重點(diǎn)。

2.1 紫外-可見分光光度(UV-Vis)法

UV法是最早應(yīng)用于復(fù)方丹參制劑定量測(cè)定的儀器分析方法之一。顧若卿[6]在1987年報(bào)道了UV在測(cè)定三七總皂苷中的應(yīng)用。樣品用乙醚提取后進(jìn)行大孔樹脂凈化，再用香草醛試液顯色，以人參二醇為對(duì)照品，采用比色法進(jìn)行定量測(cè)定。

丹參酮類成分具有相似的、在270～280 nm處有顯著紫外吸收的母核，文獻(xiàn)[7]據(jù)此建立了復(fù)方丹參片中總丹參酮類成分的定量方法。樣品經(jīng)甲醇提取后使用氧化鋁層析柱純化，收集分離出的丹參酮類成分，在269 nm波長(zhǎng)處測(cè)定總丹參酮的含量。

文獻(xiàn)[8]建立了采用紫外分光光度法測(cè)定復(fù)方丹參片溶出度的方法。以丹參素為對(duì)照品，以溶出液在283 nm處的吸收度計(jì)算不同企業(yè)樣品的溶出度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)的產(chǎn)品，溶出度有較大的差異。

紫外-可見分光光度法操作便捷，分析速度快；但專屬性差，干擾因素較多，通常只用于注重分析通量，對(duì)分析結(jié)果的專屬性要求不高的場(chǎng)合；隨著前處理技術(shù)的發(fā)展，UV法將會(huì)在一些特定領(lǐng)域(例如在線質(zhì)控、流動(dòng)注射分析等)繼續(xù)發(fā)揮作用。

2.2 薄層色譜(TLC)法

薄層色譜(TLC)法具有成本低、速度快、現(xiàn)場(chǎng)操作、結(jié)果直觀可視化等特點(diǎn)，在中藥材、中成藥質(zhì)量控制方面有重要的地位。文獻(xiàn)[9]采用TLC法測(cè)定了復(fù)方丹參片中的丹參酮II A、丹參酮I、隱丹參酮、原兒茶醛和丹參素。樣品經(jīng)甲醇回流提取后用氯仿萃?。辉诠枘zG板上以石油醚-四氫呋喃-甲醇為水溶性成分展開，掃描定量；以苯-醋酸乙酯-甲酸為脂溶性成分的展開劑，用三氯化鐵-鐵氰化鉀液顯色后掃描定量。

自2000年以來(lái)的《中國(guó)藥典》中，復(fù)方丹參片正文中都收載有采用TLC法進(jìn)行三七皂苷類成分鑒別的檢查項(xiàng)目。結(jié)合薄層掃描技術(shù)，即可實(shí)現(xiàn)成分的定量。文獻(xiàn)[10]采用預(yù)制硅膠G板，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水為展開劑，采用硫酸乙醇溶液顯色后掃描定量測(cè)定復(fù)方丹參片中人參皂苷Rg1的方法，具有一定的代表性。

2.3 氣相色譜(GC)法

復(fù)方丹參片的三味藥材中，冰片起醒腦開竅的作用，由于其主要成分龍腦和異龍腦均具有揮發(fā)性，通常采用氣相色譜(GC)法測(cè)定。

文獻(xiàn)[11]中采用極性DB-Wax毛細(xì)管柱、以氮?dú)鉃檩d氣、等柱溫測(cè)定了12個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的復(fù)方丹參片中冰片的含量，不同企業(yè)產(chǎn)品中的含量差異懸殊，提示對(duì)于復(fù)方丹參片，冰片也應(yīng)作為質(zhì)控項(xiàng)目之一。

GC法還用于復(fù)方丹參片的摻假鑒別。文獻(xiàn)[12]中采用SE-30玻璃柱、以氮?dú)鉃檩d氣、100 ℃等溫分離樟腦和冰片，結(jié)果與微量升華法和TLC法的鑒定結(jié)果一致，確認(rèn)異常樣品應(yīng)為假藥。

2.4 高效液相色譜(HPLC)法

大量文獻(xiàn)報(bào)道了HPLC法在復(fù)方丹參制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用，且主要用于丹參和三七兩味的質(zhì)量控制。

表2中列舉了有代表性的HPLC測(cè)定方法；表3中列舉了有代表性的HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參制劑中皂苷類成分應(yīng)用的報(bào)道。

從表2中可以發(fā)現(xiàn)，HPLC法廣泛用于測(cè)定復(fù)方丹參制劑中丹參的相關(guān)成分，從高極性/水溶性的多羥基、羧基酚酸類到低極性/脂溶性的丹參酮類。均使用C18柱；大部分脂溶性成分均可以使用甲醇/乙腈-水流動(dòng)相，而水溶性的酚酸類成分通常需要加酸抑制電離，以得到更好的保留和色譜峰形；由于待測(cè)成分均含芳環(huán)，可以采用紫外波長(zhǎng)260～280 nm檢測(cè)。

如前所述，由于三七藥材價(jià)格較高，而現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺乏對(duì)三七的定量檢查項(xiàng)目、客觀上形成了對(duì)企業(yè)為降低成本而擅自更改生產(chǎn)工藝的監(jiān)管缺失。因而有必要研究復(fù)方丹參制劑中三七皂苷類成分的測(cè)定方法。

從表3中可以看出，針對(duì)極性中等偏高的皂苷類成分，C18柱較為常見，也有使用氨基柱的報(bào)道，流動(dòng)相為常用甲醇/乙腈-水。由于這些成分缺乏長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)，因而只能采用紫外末端吸收檢測(cè)，或采用通用性的檢測(cè)技術(shù)，如蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)。

HPLC技術(shù)的發(fā)展非常迅速，從表2和表3中可以看出，早期多采用10 μm粒徑的填充劑，分辨率較差；5 μm粒徑的填充劑出現(xiàn)后，分辨率得到較大的提高；隨著新的UPLC技術(shù)的應(yīng)用，亞2 μm粒徑色譜柱不但提高了分離度，分析時(shí)間也更短；在檢測(cè)技術(shù)上，為了適應(yīng)痕量成分的檢測(cè)，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在生物樣品的分析中得到應(yīng)用[17]，而為了滿足低紫外吸收皂苷類成分的檢測(cè)，ELSD的應(yīng)用[20，21]獲得了滿意的效果。這些技術(shù)的引入，體現(xiàn)出了色譜分析技術(shù)的發(fā)展，而分析技術(shù)的發(fā)展也促使檢測(cè)水平的提高，近年來(lái)，已有文獻(xiàn)報(bào)道了采用C18柱，乙腈- 0.1%磷酸梯度洗脫，變換波長(zhǎng)同時(shí)分離測(cè)定復(fù)方丹參制劑中丹參素、三七皂苷R1、丹參酮II A等9個(gè)成分的分析方法[22]。

2.5 指紋圖譜

指紋圖譜自2001年起在中藥材、中成藥的質(zhì)量控制上開始應(yīng)用，在一定程度上彌補(bǔ)了多組分成分難以進(jìn)行質(zhì)控、特別是質(zhì)量和藥效關(guān)系難以銜接的缺陷。目前，中藥材、中成藥的指紋圖譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用在產(chǎn)品的質(zhì)量控制上，并自《中國(guó)藥典》2010年版起納入正式的藥典標(biāo)準(zhǔn)正文中。

文獻(xiàn)[23]對(duì)復(fù)方丹參片建立了一種指紋圖譜的考察方法，使用ODS色譜柱，乙腈-磷酸溶液梯度洗脫，紫外檢測(cè)，以丹參素、原兒茶醛和丹參酮II A為參比成分，在50 min內(nèi)完成樣品分析。圖譜中獲得10個(gè)特征峰，不同企業(yè)產(chǎn)品的10個(gè)成分的信號(hào)強(qiáng)度存在差異，顯示原材料及工藝可能存在差別。

文獻(xiàn)[24]對(duì)復(fù)方丹參滴丸建立了分別分析丹參類成分和三七類成分的兩套色譜系統(tǒng)組成的指紋圖譜。分別用乙腈-磷酸溶液和乙腈-醋酸溶液梯度洗脫，測(cè)定皂苷類成分時(shí)使用SPE柱進(jìn)行了凈化，在丹參部分的圖譜中鑒定了7個(gè)化合物，在三七類成分的圖譜中鑒定了16個(gè)皂苷類成分。

2.6 其他檢測(cè)技術(shù)

毛細(xì)管電泳(CE)在高極性成分的分析方面有著重要的應(yīng)用價(jià)值。很多研究嘗試采用CE分離復(fù)方丹參制劑中的高極性成分，均使用了膠束毛細(xì)管電泳技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)丹參素類[25]、皂苷類[26]等成分的快速分析測(cè)定或指紋圖譜[27]分析，顯示出CE技術(shù)在中高極性成分快速分析方面的優(yōu)勢(shì)。

近紅外(NIR)技術(shù)近年來(lái)大量用于藥品的無(wú)損檢測(cè)。文獻(xiàn)[28]使用近紅外光譜建立了復(fù)方丹參片定性分析模型，并用驗(yàn)證集、對(duì)照品法進(jìn)行校正，證明在實(shí)際工作中可直接對(duì)復(fù)方丹參片(薄膜衣片)進(jìn)行快速無(wú)損定性，為生產(chǎn)中無(wú)損快速檢測(cè)和藥品流通中的打假工作提供了一種新的分析方法。

文獻(xiàn)[29]將NIR分析技術(shù)用于復(fù)方丹參滴丸生產(chǎn)過(guò)程中的中間體(浸膏)質(zhì)控，對(duì)復(fù)方丹參滴丸料液中有效成分的含量進(jìn)行快速測(cè)定，并在中試生產(chǎn)中進(jìn)行了驗(yàn)證。

3 結(jié)語(yǔ)

復(fù)方丹參制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變更過(guò)程體現(xiàn)了現(xiàn)代分析技術(shù)的發(fā)展，許多新的分析化學(xué)方法不斷應(yīng)用到質(zhì)控中，從早期的UV法，TLC法，發(fā)展到更專屬、精確的氣相色譜法，高效液相色譜法，從單一的組分鑒別，發(fā)展到組分的含量測(cè)定、多組分的綜合質(zhì)控和譜毒學(xué)研究[30]；從單純的產(chǎn)品放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)展到生產(chǎn)中的快速測(cè)定和在線監(jiān)測(cè)。這些變革和發(fā)展體現(xiàn)了現(xiàn)代分析技術(shù)在提高產(chǎn)品質(zhì)量方面的重要價(jià)值。

同時(shí)還應(yīng)看到，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中仍缺乏對(duì)三七中的活性成分進(jìn)行定量測(cè)定的技術(shù)，在客觀上形成了產(chǎn)品可能的質(zhì)量隱患。因此，應(yīng)該研究、制定基于三七中化學(xué)成分的質(zhì)控方法，制定合理、可靠的檢查項(xiàng)目，使復(fù)方丹參產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更全面、更嚴(yán)密。

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(收稿日期:2011-12-08)