摘 要 目的：通過(guò)微生物侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，確認(rèn)采用預(yù)灌封注射器包裝的小容量注射劑產(chǎn)品的密封完整性。方法：按無(wú)菌生產(chǎn)要求在預(yù)灌封注射器內(nèi)灌裝胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)14 d后，置于大腸埃希菌菌懸液中浸泡4 h。浸泡后樣品繼續(xù)培養(yǎng)7 d，觀察細(xì)菌侵入情況。結(jié)果：培養(yǎng)7 d后，注射器內(nèi)培養(yǎng)基均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。結(jié)論：預(yù)灌封注射器密封系統(tǒng)能滿足密封完好性的要求，可保證產(chǎn)品不受細(xì)菌侵入。

關(guān)鍵詞 預(yù)灌封注射器 細(xì)菌侵入 密封系統(tǒng)

中圖分類號(hào)：TQ469; R944.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1006-1533(2012)07-0036-02

Study on the integrity of the prefilled syringes with sealing system

FAN Su-jun，XIA Jie-min

（Shanghai Haohai Biological Technology Co.， Ltd.， Shanghai， 201613）

ABSTRACT Objective: Seal integrity of the prefilled syringes containing small volume of injection product was confirmed by the bacterial challenging test. Methods: According to production requirements， the pre-casting sterile syringe filling trypticase soy broth was incubated for 14 days， soaked in a suspension containing Escherichia coli for 4 hours. Bacterial contamination was observed after samples were incubated for 7 days. Results: The syringes were not contaminated by the tested E.coli. Conclusion: Prefilled syringes with sealing system can meet the requirements of integrity and protect the products from bacterial invasion.

KEY WORDS prefilled syringes; bacterial invasion; integrity

預(yù)灌封注射器是國(guó)內(nèi)外20世紀(jì)90年代開(kāi)發(fā)的一種新型藥品包裝形式，主要用于小容量注射劑的包裝儲(chǔ)存并直接用于注射或用于眼科、耳科、骨科等手術(shù)沖洗。預(yù)灌封注射器由玻璃針管（中性玻璃）、活塞（鹵化丁基橡膠）、針帽（異戊丁基橡膠）、推桿（PS）和/或注射針組成(圖1)。

藥液直接裝入針管內(nèi)，通過(guò)活塞將藥液密封儲(chǔ)存，使用時(shí)用推桿推出。對(duì)于無(wú)菌產(chǎn)品，抽樣檢驗(yàn)的無(wú)菌檢查存在的局限性是很明顯的[1]，從統(tǒng)計(jì)學(xué)上說(shuō)，一個(gè)陽(yáng)性的無(wú)菌測(cè)試結(jié)果不是結(jié)論性的；同樣，陰性的無(wú)菌測(cè)試結(jié)果并不證明封閉體系已起到了它應(yīng)起的作用[2]。預(yù)灌封注射器密封系統(tǒng)的完好性，有必要通過(guò)細(xì)菌侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，確認(rèn)密封性的完整程度，防止細(xì)菌入侵以確保產(chǎn)品質(zhì)量安全可靠[3]。

1 試驗(yàn)材料與儀器

預(yù)灌封注射器（美國(guó)BD公司）；SV122V型全自動(dòng)灌裝機(jī)（德國(guó)INOVA）；SHP-250型生化培養(yǎng)箱；胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基（上海博微生物科技有限公司）；菌株：大腸埃希菌（Escherichia coli）（上海技標(biāo)藥檢器材有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 試樣制備

選用胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基，按每30 g加1 L純化水的比例配制，121 ℃20 min滅菌后無(wú)菌條件下灌封于預(yù)灌封注射器中。試樣先在較低溫度（20~25 ℃）下培養(yǎng)7 d，然后在較高溫度（30~35 ℃）下培養(yǎng)7 d[4，5]，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)且陽(yáng)性對(duì)照符合要求后，進(jìn)行細(xì)菌侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。

2.2 挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備

從大腸埃希菌[6]的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含10 ml無(wú)菌胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基的試管中，在30~35 ℃下靜止培養(yǎng)16~18 h，將每管的培養(yǎng)物分別接入含1 000 ml相同培養(yǎng)基的容器內(nèi)，于30~35 ℃下培養(yǎng)22~24 h。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，能明顯見(jiàn)容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。培養(yǎng)結(jié)束后的菌懸液即可用來(lái)做試驗(yàn)。

2.3 細(xì)菌侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)

將經(jīng)平板計(jì)數(shù)的新鮮菌懸液倒入合適的容器中，取50支灌裝試樣的預(yù)灌封注射器完全浸沒(méi)于上述高濃度（大于106個(gè)/ml）的菌懸液中持續(xù)浸泡4 h[6]。將預(yù)灌封注射器從容器中取出，擦干注射器外殘余菌懸液，然后用0.1%~0.2%洗必泰或新潔爾滅消毒劑消毒外表面。浸泡結(jié)束時(shí)，再用平板計(jì)數(shù)菌懸液的濃度，檢查活菌數(shù)，確認(rèn)試驗(yàn)的有效性。挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。

陽(yáng)性對(duì)照：取未經(jīng)菌懸液浸泡的裝有培養(yǎng)基的預(yù)灌封注射器兩個(gè)，接種入10~100 CFU/ml的大腸埃希菌并培養(yǎng)。陰性對(duì)照：另取已制備的不長(zhǎng)菌的試樣2個(gè)，不經(jīng)菌懸液浸泡，作陰性對(duì)照。將挑戰(zhàn)試驗(yàn)用的試樣置30~35 ℃培養(yǎng)7 d。肉眼觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，需記錄長(zhǎng)菌的試樣數(shù)，并進(jìn)一步仔細(xì)檢查預(yù)灌封注射器膠塞和護(hù)帽是否由于傾斜或松動(dòng)而造成細(xì)菌侵入。如挑戰(zhàn)試驗(yàn)用的試樣均不長(zhǎng)菌，則取10支試樣，接種大腸埃希菌后培養(yǎng)，確認(rèn)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)沒(méi)有問(wèn)題。

2.4 結(jié)果

本試驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照均有細(xì)菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)樣品均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，試樣培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)檢查均有細(xì)菌生長(zhǎng)（表1）。以上結(jié)果說(shuō)明本次試驗(yàn)有效，預(yù)灌封注射器密封系統(tǒng)能滿足密封完好性的要求，可保證產(chǎn)品不受細(xì)菌的侵入。

3 討論

在細(xì)菌侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照都合格，試樣挑戰(zhàn)試驗(yàn)才有效。在挑戰(zhàn)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達(dá)到1×106 CFU/ml。挑戰(zhàn)試樣中如有細(xì)菌生長(zhǎng)，需記錄長(zhǎng)菌的試樣數(shù)，并進(jìn)一步鑒定確認(rèn)生長(zhǎng)菌為挑戰(zhàn)細(xì)菌——大腸埃希菌。如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長(zhǎng)菌的預(yù)灌封注射器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，則預(yù)灌封注射器密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)作失敗論處。

注射器包裝密封系統(tǒng)的完好性，直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量。為控制預(yù)灌封注射器密封完整性對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)盡量采用符合國(guó)際通行標(biāo)準(zhǔn)的密封構(gòu)件，防止為節(jié)約成本而隨意變更膠塞和針管的尺寸，從而增加泄漏風(fēng)險(xiǎn)；供應(yīng)商需要定期審計(jì)，保證其質(zhì)量穩(wěn)定可靠；在密封系統(tǒng)的部件發(fā)生變更或灌封系統(tǒng)發(fā)生變更時(shí)，必須評(píng)估其對(duì)密封系統(tǒng)完整性的影響，必要時(shí)重新進(jìn)行密封完整性驗(yàn)證[6]。密封完整性驗(yàn)證的方法除細(xì)菌侵入試驗(yàn)法外，也可以通過(guò)飽和鹽水法測(cè)試密封性，或者通過(guò)亞甲基藍(lán)溶液法進(jìn)行驗(yàn)證[7]。對(duì)無(wú)菌制劑，注射器包裝密封系統(tǒng)的完好性，還影響著產(chǎn)品在貯存期內(nèi)細(xì)菌侵入的風(fēng)險(xiǎn)。無(wú)菌產(chǎn)品有效期的確定，除了在藥物研發(fā)階段，進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期留樣的穩(wěn)定性試驗(yàn)外，還應(yīng)進(jìn)行容器密封性挑戰(zhàn)試驗(yàn)，以確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)達(dá)到無(wú)菌要求[8]。因此，在進(jìn)行密封系統(tǒng)的細(xì)菌侵入挑戰(zhàn)性試驗(yàn)時(shí)，在首次試驗(yàn)成功的基礎(chǔ)上，還應(yīng)多準(zhǔn)備一些灌裝培養(yǎng)基的樣品，在與產(chǎn)品相同的貯存條件下貯存。在貯存一定時(shí)間間隔（如12、24、36和48個(gè)月等），取出部分樣品，按細(xì)菌侵入試驗(yàn)操作步驟進(jìn)行檢測(cè)，以確定預(yù)灌封注射器密封系統(tǒng)在貯存期內(nèi)的有效性，為合理制定預(yù)灌封注射器包裝的產(chǎn)品有效期提供可靠保障。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2012-01-19）