王偉妮 楊雅冉 任 賀 劉 芳

1.山西醫(yī)科大學法醫(yī)學院(太原，030001);2.中國科學院北京基因組研究所 ;3.北京人民警察學院;4.北京市公安局昌平分局刑偵支隊

男性Y染色體amelogenin、DYS456及DYS458缺失1例分析

王偉妮1楊雅冉2任 賀3劉 芳4

1.山西醫(yī)科大學法醫(yī)學院(太原，030001);2.中國科學院北京基因組研究所 ;3.北京人民警察學院;4.北京市公安局昌平分局刑偵支隊

1 資料

某對父子在進行親子鑒定時，用Goldeneye 20A(基點認知)對父與子DNA進行擴增，amelogenin基因座分型結果如圖1，父與子均只顯示X等位基因，Y等位基因缺失。同時用 PowerPlex?16 System(Promega)進行了驗證，結果一致。為驗證受檢者性別，采用AmpF STR Y－filer kit(ABI)對父與子進行了YSTR的檢驗，分型結果如圖2，均顯示 DYS456及DYS458的缺失。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫提供的Y染色體上的序列信息，避開試劑盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物結合區(qū)，將原產物片段分別延長至696bp、743bp和745bp自行設計引物(表1)進行擴增。電泳結果如圖3所示，正常男性amelogenin、DYS456及DYS458條帶均清晰，而受檢者均無產物。

圖1 父子的amelogenin基因座檢測結果

圖2 父子的DYS456及DYS458基因座檢測結果

圖3 amelogenin、DYS456及 DYS458基因座電泳圖

表1 針對amelogenin Y、DYS456及DYS458設計的引物

2 討論

amelogenin是編碼牙釉質蛋白的基因，位于X(p22.1 －22.3)和 Y(Yp11.2)的同源染色體中，為單拷貝。其特異PCR引物最早由FSS(英國法庭科學服務部)設計，擴增X和Y染色體可同時分別得到106pb和112bp的產物，這樣的片斷差異在法醫(yī)鑒定中常用于性別鑒定［1］。

本例用Goldeneye 20A(基點認知)對父子DNA分型進行檢驗時，結果出現(xiàn)amelogenin Y等位基因的缺失?；?PowerPlex?16 System中 amelogenin基因的擴增產物片段與Goldeneye 20A(基點認知)的序列有兩個堿基的差異，使用PowerPlex?16 System進行了驗證，分型結果與Goldeneye 20A(基點認知)一致，仍見amelogenin Y等位基因的缺失。為驗證父子性別而進行Y－STR擴增，結果DYS456及DYS458基因座的等位基因缺失。DNA檢驗中，等位基因丟失有多種原因，如DNA嚴重降解、抑制物的存在或低拷貝模板、引物區(qū)點突變等均可導致等位基因缺失。本案檢材良好，電泳熒光峰高(RFU值)大于500且重復擴增結果一致，因此認為本實驗結果中等位基因的缺失不是模板質量的原因。且為排除引物區(qū)點突變，避開試劑盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物結合區(qū)而自行設計引物，擴增結果顯示仍出現(xiàn)缺失。因此推斷是Y染色體的部分缺失導致擴增失敗。

Chang等［3］曾報道18個缺失 amelogenin的男性均出現(xiàn)DYS458的缺失，并且認為amelogenin與DYS458相隔1.13 Mb通常會出現(xiàn)同時缺失，本文驗證了此結論。但Jobling等［4］報道來自12個不同國家的45名amelogenin缺失的男性中，有4名沒有出現(xiàn)DYS458的缺失。因本案兩位受檢男性確認為父子關系，顯然amelogenin、DYS456及DYS458的缺失沒有影響其生殖功能。Turrina等［2］也報道過相同案例，認為amelogenin與 DYS458缺失是不影響生育的，且在父子之間表現(xiàn)出垂直遺傳。張清健等［5］曾報道影響男性生育的原因通常是Y染色體長臂的變異，而短臂對生育影響較小。

綜上所述，法庭科學應用amelogenin基因判斷性別時應謹慎，在實際辦案中若發(fā)現(xiàn)amelogenin對性別的判定結果與其線索或證據(jù)不符時，應考慮是否有Y等位基因丟失的可能，需結合其他方法(如SRY［6］、Y－STR)加以核實。Y染色體為男性所特有，在司法鑒定中具有優(yōu)勢，尤其是在父系相關鑒定及性侵犯案件中具有明顯優(yōu)勢。基于少數(shù)男性可能會出現(xiàn)Y染色體的部分缺失，為了提高法醫(yī)應用的信息量，建議在現(xiàn)有的Y－STR基礎上增加新的基因座。

1 Sullivan KM，Mannucci A，Kimpton CP，et al.A rapid and quantitative DNA sex test:fluorescence－based PCR analysis of XY homologous gene amelogenin［J］.Biotechniques ，1993，15(4):636 －638.

2 Turrina S，F(xiàn)ilippini G，Voglino G，et al.Two additional reports of deletion on the short arm of the Y chromosome［J］.Forensic Sci Int Genet.，2011，5(3):242 －246.

3 Chang YM，Perumal R，Keat PY，et al.A distinct Y －STR haplotype for amelogenin negative males characterized by a large Yp11.2(DYS458 － MSY1 － AMEL － Y)deletion［J］.Forensic Sci Int，2007，166(2－3):115－120.

4 Jobling MA，Lo IC，Turner DJ，et al.Structural variation on the short arm of the human Y chromosome:recurrent multigene deletions encompassing amelogenin Y［J］.Hum Mol Genet，2007，16(3):307－316.

5 張清健，鄭立新，田佩玲，等.人類男性Y染色體變異對男性生育力影響的臨床分析［J］.中國計劃生育學雜志，2006，14(5):289－292.

6 Kastelic V，Budowle B，Drobnic K.Validation of SRY marker for forensic casework analysis［J］.J Forensic Sci，2009，54(3):551 －555.

2011－12－22

2012－03－01

［責任編輯:裴開顏］