王 偉，宋偉安，路 平，胡艷正，李 軍，尚立群，李學昌，文 鋒，劉軍強

切除交叉互補修復酶1表達對Ⅱ～Ⅲ期可手術非小細胞肺癌術后輔助化療預后的相關性分析

王 偉，宋偉安，路 平，胡艷正，李 軍，尚立群，李學昌，文 鋒，劉軍強

目的 鉑類是肺癌化療的基礎藥物，而切除交叉互補修復酶1表達水平與鉑類耐藥和預后有關，本研究分析可手術非小細胞肺癌的切除交叉互補修復酶1表達與術后生存期的關系，探討它們與患者預后及與鉑類耐藥的相關性。方法 收集2005年12月－2009年1月隨訪的95例Ⅱ～Ⅲ期非小細胞肺癌患者，均進行根治性手術切除及術后以鉑類為基礎的化療。免疫組化法檢測手術標本的切除交叉互補修復酶1表達，并進行統(tǒng)計分析。結果 切除交叉互補修復酶1蛋白表達陽性率與患者的性別、年齡、吸煙狀況、淋巴結轉移情況、腫瘤組織學類型和臨床分期均無明顯相關性(P＞0.05)。切除交叉互補修復酶1低表達者預后好，化療有效率高，切除交叉互補修復酶1表達陰性和陽性的無病生存期分別為34.9個月和20.0個月(P=0.015)，中位生存期分別為49.7個月和31.6個月;切除交叉互補修復酶1表達陰性的3年、5年生存率分別為58.4%、38.9%;切除交叉互補修復酶1表達陽性的3年、5年生存率分別為33.5%、18.3%(P=0.011)。結論 以鉑類為基礎的化療延長了非小細胞肺癌切除交叉互補修復酶1低表達患者的生存，術后可根據(jù)切除交叉互補修復酶1的表達水平決定是否選用含鉑化療。

切除交叉互補修復酶1;非小細胞肺癌;手術;無病生存期

年生存率也只有30%～40%。手術失敗的原因多為局部復發(fā)和(或)遠處轉移，這就需要術后輔助治療。研究表明，腫瘤細胞DNA修復異常及其相關基因的表達異常與肺癌耐藥的產生關系密切，提示前瞻性地進行分子標志物的檢測有助于肺癌療效預測及個體化治療方案的制定并提高化療療效。本研究采用免疫組織化學方法檢測Ⅱ～Ⅲ期可手術NSCLC

組織中DNA修復基因家族成員切除交叉互補修復酶1(excision repair complementing 1，ERCC1)蛋白的表達，分析ERCC1表達與NSCLC患者臨床特征、無疾病進展時間及生存期的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2005年12月－2009年1月在海軍總醫(yī)院胸外科收治的診斷為Ⅱ～Ⅲ期NSCLC患者的臨床資料和手術病理組織標本95例。其中，男性59例，女性36例;年齡34～81歲，中位年齡61歲;吸煙者50例，不吸煙者45例;肺葉及復合肺葉切除73例，楔形切除14例，全肺切除8例。術后病理檢查，鱗狀細胞癌28例，腺癌59例，大細胞癌3例，類癌2例，腺鱗癌3例。每例患者平均清掃淋巴結16枚，共56例患者有淋巴結轉移，淋巴結轉移率58．9%。按國際抗癌聯(lián)盟2009年肺癌原發(fā)腫瘤(tumor，T)、區(qū)域淋巴結(lymph node，N)、遠處轉移(metastasis，M)，即TNM分期修訂標準，Ⅱa期19例，Ⅱb期33例，Ⅲa期36例，Ⅲb期7例。全部患者接受鉑類聯(lián)合第三代新藥為基礎的化療2～4個周期。

1.2 主要試劑 濃縮型鼠抗人ERCC1單克隆抗體(ab2356)，購自美國Abcam公司，工作液濃度1∶100;一抗稀釋液及3，3'-二氨基聯(lián)苯胺(3，3'-diaminobenzidine，DAB)顯色試劑購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，羊抗鼠/兔二抗檢測試劑盒購自上海太陽生物技術有限公司。

1.3 免疫組織化學檢測 所有標本均經10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm切片，常規(guī)蘇木素和伊紅染色(hematoxylin and eosin，HE)。免疫組化染色采用EnVision二步法，高溫高壓抗原修復，3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，一抗室溫2 h，二抗室溫20 min，DAB顯色，流水沖洗，蘇木素復染，常規(guī)脫水透明后中性樹膠封片。已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。結果判定:ERCC1定位于癌細胞核，陽性染色呈棕黃色顆粒。免疫組化陽性結果的評判:以腫瘤細胞不著色或﹤10%的腫瘤細胞著色為陰性，≥10%的腫瘤細胞著色為陽性(圖1)，并根據(jù)腫瘤細胞陽性所占比例分為:10% ～25%(+)，26% ～50%(++)，51% ～75%(+++)，＞75%(++++)。

圖1 免疫組織化學染色檢測ERCC1蛋白表達(×200)

1.4 生存期和預后評價 無病生存期(disease-free survival，DFS)為手術后至患者疾病復發(fā)時間，總生存期(overall survival，OS)為手術后至患者死亡的時間;計算無病生存期和3年、5年生存率。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以百分率表示，組間差異采用卡方檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率的比較采用Log-rank檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 隨訪結果 隨訪時間41～78個月，平均隨訪63個月，末次隨訪時間至2012年5月，95例患者中死亡38例。

2.2 ERCC1蛋白表達與患者臨床特征的關系 95

例NSCLC患者手術病理組織標本中，ERCC1蛋白表達陽性率為43.2%。統(tǒng)計學分析結果顯示:ERCC1蛋白表達陽性率與患者的性別、吸煙狀況、淋巴結轉移情況、腫瘤組織學類型和臨床分期均無明顯相關性(P＞0.05，表1)。

表1 患者臨床特征與ERCC1蛋白表達的關系(n，%)

2.3 ERCC1蛋白表達與生存期和預后的關系ERCC1表達陰性的患者預后較好，化療有效率高，ERCC1表達陰性和陽性的DFS分別為34.9個月和20.0個月(P=0.015)，中位生存期分別為49.7個月和31.6個月;ERCC1表達陰性的3年、5年生存率分別為58.4%、38.9%;ERCC1表達陽性的3年、5年生存率分別為33.5%、18.3%(P=0.011，表2，圖2、3)。

表2 患者預后與ERCC1蛋白表達的關系

3 討論

眾所周知，含鉑術后輔助化療是Ⅱ期以上NSCLC的標準一線治療方式，鉑類主要作用于腫瘤細胞的DNA，導致DNA損傷及斷裂，近年來的研究表明腫瘤細胞DNA修復及其他相關基因的表達異常在順鉑耐藥中起了重要的作用，其中核苷酸切除修復是DNA修復機制中最多面性的，是引起順鉑耐藥的主要原因之一，而ERCC1基因在核苷酸切除修復途徑中起著關鍵作用［1］。Rosell等［2］對 100 例Ⅲb和Ⅳ期NSCLC進行研究，吉西他濱/順鉑治療組經過檢測mRNA水平，發(fā)現(xiàn)ERCC1低表達組的中位生存期明顯長于均高表達組(P=0.016)。在2005年的美國臨床腫瘤學會(American Society of Clinical Oncology，ASCO)會議上，Rosell［3］發(fā)表了第一個Ⅲ期前瞻性臨床試驗的初步結果，證實了ERCC1對順鉑反應的價值，低表達ERCC1對順鉑有較好的反應，基于該初步結果，認為將來化療是否選擇順鉑可根據(jù)其耐藥基因來決定，低表達ERCC1的患者接受順鉑化療，而高表達ERCC1的患者接受非鉑類化療。

隨后，諸多研究通過對RNA或DNA的分析已經證實ERCC1是一個較好的預測鉑類耐藥的臨床生物標志物。Monzo等［4］研究發(fā)現(xiàn)接受含鉑化療的NSCLC患者的反應率與ERCC1 mRNA水平呈顯著負相關。Ceppi等［5］對70例NSCLC患者腫瘤組織中ERCC 1mRNA表達水平檢測的結果分析表明:低表達ERCC1 mRNA患者的中位生存時間較長;在接受順鉑治療的患者中，ERCC1低表達是較長生存期的重要預測指標。Jiang［6］近期的一項薈萃分析得出在NSCLC中，ERCC1既是一個生存預后指標，又是一個化療藥物預測指標。結果提示ERCC1高表達是一個預后較好的指標，但ERCC1高表達同時對鉑類耐藥。

ERCC1表達與NSCLC患者生存期關系的研究尚未完全定論，許多文獻［7-10］報道的是晚期NSCLC的研究結果，但是對可手術的 NSCLC患者術后ERCC1表達對長期生存的影響研究較少。2006年Olaussen等［11］對國際輔助肺癌試驗(International Adjuvant Lung Cancer Trial，IALT)中患者分為術后含鉑化療組和對照組，用免疫組化的方法對761位Ⅰ～Ⅲ期患者的腫瘤組織標本進行ERCC1檢測，結果化療組與不化療組5年生存率無差別，ERCC1陰性的腫瘤患者能從以順鉑為基礎的聯(lián)合化療中受益(P=0.009)，聯(lián)合鉑類化療能明顯提高ERCC1陰性患者的生存期(P=0.002);對不化療的患者，ERCC1陽性的腫瘤患者生存期長于ERCC1陰性的腫瘤患者(P=0.009)，該實驗涉及早期肺癌，但在Ⅰ～Ⅲ期中未按期別分層進行ERCC1表達與預后的分析。國內王慧敏等［12］分析了 75例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC術后患者，Ⅰ期術后隨機分成不化療組和化療組，Ⅱ期術后均采用以順鉑為基礎的方案化療。結果表明Ⅰ期ERCC1高表達患者預后明顯好于ERCC1低表達;Ⅰ期不化療組ERCC1高表達者生存情況優(yōu)于ERCC1低表達，而Ⅱ期與Ⅰ期相反，ERCC1低表達者預后好，說明含鉑化療延長了Ⅱ期ERCC1低表達患者的生存。

本研究入選患者均選擇Ⅱ期以上，是基于目前Ⅰ期NSCLC術后輔助化療是否能提高生存率仍有爭論。2006年美國癌癥和白血病組B試驗9633(CALGB9633)在 ASCO 發(fā)表最新結果［13］提示，Ⅰb期NSCLC術后輔助化療不再顯示有生存益處，5年生存率化療組與不化療組相仿(P=0.32)。鑒于此，我們入選患者均選擇Ⅱ期以上，術后均進行鉑類為基礎的化療，因術后患者沒有可觀察的病灶，不能反映近期療效，而以更具有臨床意義的生存情況來推測化療所起的作用，結果發(fā)現(xiàn)ERCC1表達陰性的患者預后較好，化療有效率高，ERCC1表達陰性和陽性的DFS分別為34.9個月和20.0個月(P=0.015)，中位生存期分別為49.7個月和31.6個月;ERCC1表達陰性的 3年、5年生存率分別為58.4%、38.9%;ERCC1表達陽性的3年、5年生存率分別為33.5%、18.3%(P=0.011)。兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義，說明鉑類對ERCC1低表達患者有效率高，通過術后含鉑輔助化療能提高Ⅱ～Ⅲ期NSCLC患者的生存。

綜上所述，ERCC1有望成為應用于臨床的一個重要的生物學指標。通過對術后ERCC1蛋白表達的檢測，可以指導臨床是否選擇鉑類化療藥物，使治療更準確、高效，避免不適當?shù)闹委?，并可以預測化療藥物的療效。今后，我們還需進行ERCC1基因分型研究，以進一步明確ERCC1基因分型與預后關系［14］;收集Ⅰ期肺癌患者的臨床資料及ERCC1蛋白表達檢測并進行各期肺癌分層研究;進一步證實和擴展本研究結果，探討ERCC1在早、中、晚期肺癌綜合治療的預后判斷價值及化療療效預測價值。

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Prognostic analysis of excision repair complementing 1 expressions for stagingⅡ－Ⅲnon-small cell lung cancer patients receiving post-operative adjuvant chemotherapy

WANG Wei，SONG Wei-an，LU Ping，HU Yan-zheng，LI Jun，SHANG Li-qun，LI Xue-chang，WEN Feng，LIU Jun-qiang
(Department of Thoracic Surgery，Navy General Hospital，Beijing 100048，China)

ObjectivePlatinum is the basic drug for lung cancer chemotherapy．The expression level of excision repair complementing 1(ERCC1)is related to Platinum resistance and patients'prognosis．This study is to discuss the relationship between the expression of ERCC1 in nonsmall cell lung cancer(NSCLC)patients and the clinical prognosis．MethodsA total of 95 patients form December 2005 to January 2009 was followed up．All patients get radical resection of tumor and post-operative platinum-based adjuvant chemotherapy．The expression of ERCC1 was detected by immunohistochemical method，and statistical work was performed．Results There was no significant correlation between the positive expression of ERCC1 protein and gender，age，smoking status，lymph node metastasis，histological types and clinical staging(P＞0.05)．Patients with negative expression of ERCC1 had a better clinical prognosis and higher response rate for chemotherapy．The disease free survival(DFS)of negative and positive expression of ERCC1 was 34.9 months and 20．0 months respectively(P=0.015)．The median survival time(MST)was 49.7 months and 31.6 months respectively．The 3，5-year survival rate of negative expression of ERCC1 was 58.4%and 38.9%respectively，and the 3，5-year survival rate of positive expression of ERCC1 was 33.5%and 18.4%respectively(P=0.011)．ConclusionPatients with negative expression of ERCC1 have a higher response rate with platinum-based chemotherapy and a better survival rate．

Excision repair complementing 1(ERCC1);Non-small cell lung cancer(NSCLC);Operation;Disease free survival(DFS)目前，肺癌的發(fā)病率和病死率在逐年上升，能夠得到手術治療機會的非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者占15%左右，而手術的5

R734.2

B

2095-3097(2012)01-0030-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2012.01.008

100050北京，海軍總醫(yī)院胸外科(王 偉，宋偉安，路 平，胡艷正，李 軍，尚立群，李學昌，文 鋒，劉軍強)

王 偉，E-mail:wangyr02@hotmail.com

2012-06-25 本文編輯:馮 博)