趙 晶，謝艷華，賀中民，洪 流，王四旺

紫元益消丸急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

趙 晶，謝艷華，賀中民，洪 流，王四旺

目的 觀察紫元益消丸對(duì)昆明小鼠和SD大鼠的急性毒性反應(yīng)，為新藥研發(fā)以及臨床用藥提供劑量依據(jù)。方法 采用灌胃給藥途徑，測(cè)定小鼠和大鼠分別給予紫元益消丸后的半數(shù)致死量和最大耐受量，按公斤體質(zhì)量計(jì)算。結(jié)果 紫元益消丸急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示受試藥物毒性較低，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部存活故無(wú)法測(cè)出半數(shù)致死量;小鼠的最大耐受量為24.0 g/kg，大鼠的最大耐受量為16.0 g/kg;各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量未見(jiàn)異常(P＞0.05)。結(jié)論 紫元益消丸按擬定臨床劑量用藥具有安全性。

紫元益消丸;急性毒性;小鼠;大鼠

紫元益消丸是依據(jù)第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院消化內(nèi)科洪流博士在前人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合多年臨床心得提出的中藥復(fù)方制劑，為扶正固本、解毒消腫、化痰散結(jié)、活血化瘀的抑瘤藥物。本研究旨在探討紫元益消丸的安全性并對(duì)其急性毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 紫元益消丸藥粉 第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所制劑室提供，批號(hào)20110510。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 二級(jí)昆明種小鼠，月齡6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半;二級(jí)SD大鼠，月齡7～8周齡，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半。所有動(dòng)物由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，生產(chǎn)合格證號(hào)為scxk(軍)字第2007-007號(hào)。

1.3 方法

1.3.1 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn) 取18～22 g昆明種小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為3個(gè)給藥組(8.0 g/kg、16.0 g/kg、24.0 g/kg)和對(duì)照組(給予生理鹽水)［1］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁水12 h后灌胃給藥(20 mL/kg)。給藥后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14 d，記錄相關(guān)指標(biāo)。①體質(zhì)量:每天定時(shí)稱(chēng)量存活動(dòng)物體質(zhì)量。②毒性反應(yīng):根據(jù)《中藥、天然藥物毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、被毛、攝食、飲水、呼吸、糞便情況及鼻、眼口腔有無(wú)異常分泌物，以及死亡等情況。觀察時(shí)間為給藥后0、2、4、8、12、24 h;第2～14天每日觀察1次。在難以測(cè)出半數(shù)致死量(50%lethal dose，LD50)值時(shí)，另取動(dòng)物20只(雌雄各半)，按24.0 g/kg劑量給予小鼠2次/d灌胃，給藥間隔4 h，對(duì)照組給予生理鹽水，進(jìn)行最大耐受劑量(max tolerance dose，MTD)的測(cè)定［2］。

1.3.2 大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn) 取180～220 g SD大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為3個(gè)給藥組(4.0 g/kg、8.0 g/kg、16.0 g/kg)和對(duì)照組(給予生理鹽水)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁水12 h后灌胃給藥，正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14 d，記錄相關(guān)指標(biāo)。①體質(zhì)量:每天定時(shí)對(duì)存活動(dòng)物稱(chēng)體質(zhì)量。②毒性反應(yīng):根據(jù)《中藥、天然藥物毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、被毛、攝食、飲水、呼吸、糞便情況及鼻、眼口腔有無(wú)異常分泌物，以及死亡等情況。觀察時(shí)間為給藥后0、2、4、8、12、24 h;第 2 ～14 天每日觀察1次。在難以測(cè)出LD50值時(shí)，另取動(dòng)物20只(雌雄各半)，試藥組按16.0 g/kg劑量給予大鼠，第1天給藥2次，給藥間隔4 h，第2～14天每日觀察1次，對(duì)照組給予生理鹽水，進(jìn)行MTD值的測(cè)定。

1.3.3 臟器組織病理學(xué)檢查 14 d后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，解剖，肉眼觀察臟器情況;死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行尸檢，發(fā)現(xiàn)病變器官做病理組織學(xué)檢查［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示，計(jì)量資料組間均數(shù)比較采用方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn) 灌胃給予紫元益消丸后，中、高劑量組小鼠均即刻出現(xiàn)短暫的靜臥、呼吸頻次加快等反應(yīng)，5～10 min后開(kāi)始逐漸活動(dòng)，30 min左右主動(dòng)覓食和飲水，2 h后恢復(fù)正常;第2天觀察，小鼠糞便稀薄、不成形，被毛直立無(wú)光澤;第4天基本恢復(fù)正常。小鼠口鼻無(wú)異常分泌物。低劑量組小鼠僅見(jiàn)一過(guò)性靜臥、呼吸頻次加快等反應(yīng)，一般10 min內(nèi)恢復(fù)正常。各組小鼠連續(xù)觀察14 d無(wú)死亡，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥第1、7、14天的體質(zhì)量與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，表1)。

表1 紫元益消丸小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量變化情況(ˉx±s，g)

動(dòng)物觀察14 d后處死，進(jìn)行體內(nèi)主要臟器組織病理學(xué)檢查，心、肝、脾、肺、腎、胰腺、胃、腸、睪丸、卵巢、腦等臟器大小、顏色、位置等均未見(jiàn)異常。進(jìn)一步測(cè)定小鼠MTD，觀察指標(biāo)和時(shí)限同上，24.0 g/kg紫元益消丸給小鼠灌胃后的反應(yīng)同前，無(wú)死亡。

2.2 大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn) 各組大鼠灌胃給予紫元益消丸后，行為表現(xiàn)未見(jiàn)異常反應(yīng);第2天發(fā)現(xiàn)各劑量組大鼠出現(xiàn)輕度糞便稀薄、黑色，但在第3天恢復(fù)。各組動(dòng)物連續(xù)觀察14 d未見(jiàn)異常和死亡，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥第1、7、14天的體質(zhì)量與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05，表2)。14 d后處死動(dòng)物，進(jìn)行體內(nèi)主要臟器組織病理學(xué)檢查，心、肝、脾、肺、腎、胰腺、胃、腸、睪丸、卵巢、腦等臟器大小、顏色、位置等均未見(jiàn)異常。進(jìn)一步測(cè)定MTD，即給大鼠灌胃16.0 g/kg，觀察14 d，結(jié)果未見(jiàn)動(dòng)物死亡。

表2 紫元益消丸大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量變化情況(ˉx±s，g)

3 討論

紫元益消丸由紫河車(chē)、紅花、蟾酥、山慈菇等8味中藥組成，按照扶正固本、消腫散結(jié)的中醫(yī)治療原則:以紫河車(chē)扶正固本為君藥，有溫腎陰補(bǔ)精元、益氣生血等功效;蟾酥、蜈蚣解毒抗癌共為臣藥;山慈菇、制半夏化痰散結(jié)，紅花活血化瘀，玄明粉消腫、化瘀共為佐藥;雞內(nèi)金消食和胃為使藥。全方共奏扶正固本，解毒消腫，化痰散結(jié)，活血化瘀之功。

紫元益消丸作為臨床經(jīng)驗(yàn)方，成人(按60 kg體質(zhì)量計(jì)算)日用劑量為0.05 g/kg。本試驗(yàn)給予小鼠日累積劑量為臨床成人擬推薦日用劑量的480倍，給予大鼠日累積劑量為臨床成人擬推薦日用劑量的320倍，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中未見(jiàn)昆明小鼠和SD大鼠死亡，表明紫氣益消丸按擬定臨床推薦劑量用藥具有安全性。但紫元益消丸灌胃后，中、高劑量組小鼠即刻出現(xiàn)一過(guò)性靜臥、呼吸頻次加快等反應(yīng);給藥次日可見(jiàn)小鼠、大鼠糞便稀薄。提示紫元益消丸超劑量使用存在誘發(fā)不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是中樞神經(jīng)、呼吸功能及胃腸道刺激等不良反應(yīng)不容忽視。超劑量所致不良反應(yīng)的機(jī)制，大鼠灌胃給藥后一過(guò)性靜臥、呼吸頻次加快等反應(yīng)不明顯的原因，尚需在后續(xù)的大鼠長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究中證實(shí)。

本方劑的前期臨床應(yīng)用中曾發(fā)現(xiàn)個(gè)別患者出現(xiàn)輕度胃腸道反應(yīng)，如惡心、嘔吐、納差等不適，提示在后續(xù)長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)等藥理毒理學(xué)研究中應(yīng)給予重點(diǎn)關(guān)注，并確定有效劑量與不良反應(yīng)劑量的閾值，以指導(dǎo)本制劑臨床用藥的有效性和安全性［4-5］。

［1］SFDA．中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則［M］．2 版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:2-4．

［2］陳奇．中藥藥理研究方法學(xué)［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:112．

［3］李中煉，周明，劉昌英，等．“百消散”毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察［J］．江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，21(6):60-63．

［4］安賓，陳常春，李治建．阿里紅提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18(6):502-503．

［5］阿不都熱依木·玉蘇甫，古孜力努爾·依馬木，麥合素木·艾克木，等．異黑成熟顆粒的急性毒性和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34(12):1320-1325．

The experimental study on acute toxicity of ziyuanyixiao pill

ZHAO Jing1，XIE Yan-hua1，HE Zhong-min1，HONG Liu2，WANG Si-wang1
(1.Department of Natural Medicines School of Medicine，F(xiàn)ourth Military Medical University，Xi’an 710032，China;2.Department of Gastroenterology，Xijing Hospital，F(xiàn)ourth Military Medical University，Xi’an 710032，China)

ObjectiveTo study the acute toxicity in mice and rats to evaluate the clinical safety of medication and provide dose basis for development of new drug．MethodsMice and rats were given intragastric administration by the differente dose of the tested drug，the experimental data were calculated LD50 and MTD with the Bliss method，with the continuous administration and observation for 14 days．ResultsThe mice and rats were all survived and LD50 was not measured．The largest amount of drug for mice was 480 times of clinical dose administration，for rats it was 320 times of clinical dose administration．In addition，no histopathological lesions were observed in the animals．ConclusionAcute toxicity in this experiment condition suggested the tested drug have a good clinical safety．

Ziyuanyixiao wan;Acute toxicity;Mice;Rat

R285.5－332

A

2095-3097(2012)01-0006-02

10.3969/j.issn.2095-3097.2012.01.002

710032陜西西安，第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥物學(xué)教研室(趙 晶，謝艷華，賀中民，王四旺)，西京醫(yī)院消化內(nèi)科(洪 流)

王四旺，E-mail:wangsiw@fmmu.edu.cn

2012-05-31 本文編輯:馮 博)