徐象華，施林妹，朱 波，潘永年

(1.浙江省麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 麗水 323000;2.麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 麗水 323000)

西紅花 (Crocus sativus L.)系鳶尾科番紅花屬植物，花柱上部及柱頭入藥，被稱為植物黃金，具有活血化瘀，涼血解毒，解郁安神等功效［1-3］。目前西紅花栽培品系混雜、品質(zhì)差、產(chǎn)量低，篩選品質(zhì)好、產(chǎn)量高的優(yōu)良適栽品系意義重大。本試驗(yàn)旨在研究產(chǎn)地對(duì)西紅花有效成分與開(kāi)花的影響，以期為優(yōu)良品系篩選提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料與儀器

2011年7月收集青田、建德、海門、南匯4個(gè)產(chǎn)地西紅花資源，精心挑選種球，剔除小種球(＜15 g)與病害種球。試驗(yàn)設(shè)在麗水市蓮都區(qū)百果園試驗(yàn)基地。

試驗(yàn)儀器與試劑:Waters1525高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)，SWB5200型超聲清洗機(jī) (上海必能信超聲有限公司)，Milli-QAcademic超純水儀 (美國(guó) Millipore公司)，F(xiàn)A1104分析天平 (上海天平儀器廠)。對(duì)照品購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，水為去離子水，其他試劑為分析純。

1.2 觀察方法

1.2.1 立地條件觀察

調(diào)查蓮都百果園、遂昌云峰與縉云南弄3個(gè)基地立地條件，包括海拔高度、經(jīng)緯度、年平均溫度等，觀察記錄3個(gè)基地西紅花種球出芽與開(kāi)花情況。

1.2.2 開(kāi)花情況與花朵性狀觀察

統(tǒng)計(jì)上架種球個(gè)數(shù)，稱量上架種球總重量，觀察4個(gè)產(chǎn)地西紅花種球開(kāi)花情況，統(tǒng)計(jì)每天開(kāi)花數(shù)，稱量花朵總鮮重與柱頭總干重，計(jì)算折干率(柱頭總干重/花朵總鮮重)。

1.3 西紅花苷含量測(cè)定

1.3.1 色譜條件

色譜柱 Agligent eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 m×150 mm)，流動(dòng)相為甲醇∶水 (48∶52)，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量 10 μL。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ，置于25 mL棕色容量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.312 mg·mL-1西紅花苷Ⅰ和0.158 mg·mL-1西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤骸?/p>

1.3.3 供試品溶液的制備

取本品粉末約10 mg，置25 mL棕色容量瓶中，加乙醇適量，超聲處理30 min，放至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔膜濾過(guò)備用。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系

取西紅花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西紅花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合對(duì)照品溶液，移取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL置于10 mL棕色容量瓶中，加乙醇稀釋，在1.3.1色譜條件下測(cè)定。分別以西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤旱馁|(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)Y，峰面積為橫坐標(biāo)X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ線性范圍分別為 3.118 ～31.178 μg·mL-1及 1.579 ～15.792 μg·mL-1，回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為 Y=0.016 1X+0.314 4，R2=0.999 8;Y=0.011 2X+0.193 9，R2=0.999 5。1.3.5 精密度試驗(yàn)

取同一標(biāo)準(zhǔn)品，在1.3.1節(jié)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得西紅花苷Ⅰ的色譜峰面積RSD=0.38%，西紅花苷Ⅱ的色譜峰面積RSD=1.06%，表明儀器精密度良好。

1.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品5份，按1.3.3節(jié)供試品的制備操作，1.3.1節(jié)的色譜條件測(cè)定含量。西紅花苷Ⅰ的平均RSD為2.19%，西紅花苷Ⅱ的平均RSD為3.98%。

1.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取某樣品制備供試品溶液，置于室溫避光保存，分別于 0，1，2，4，6，8，12，24 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算得西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD(n=8)分別為1.61%和1.60%，表明供試品溶液室溫保存24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.8 加樣回收率試驗(yàn)

取某已知含量樣品9份，各5 mg，精密稱定，分低、中、高3組，每組3個(gè)，分別加入西紅花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西紅花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合對(duì)照品溶液1.07，1.39，1.64 mL，按照1.3.3節(jié)供試品的制備操作，制成所需溶液;依照1.3.1節(jié)的色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果西紅花苷Ⅰ的平均回收率為101.4%，RSD為1.41%，西紅花苷Ⅱ的平均回收率為96.6%，RSD為0.90%。

2 結(jié)果與分析

2.1 立地條件對(duì)西紅花出芽與開(kāi)花的影響

溫度是影響植物生長(zhǎng)與開(kāi)花的主導(dǎo)因素，試驗(yàn)地的緯度與海拔對(duì)溫度影響最大［4］。西紅花性喜氣候溫和、空氣濕潤(rùn)、光照充足環(huán)境條件，開(kāi)花適溫16～20℃［5］。高海拔地區(qū)種球大田生長(zhǎng)期長(zhǎng)，種球養(yǎng)分更充足，有利于提高笠年新種球產(chǎn)量。從開(kāi)花角度看，貯藏期所選基地應(yīng)盡量位于中高海拔地區(qū)。

影響開(kāi)花因素主要是海拔，海拔越高，溫度越低，開(kāi)花時(shí)間越早。3個(gè)試驗(yàn)地中，縉云南弄基地海拔最高，夏季室內(nèi)最高溫度僅為26℃，西紅花出芽與開(kāi)花時(shí)間最早，分別在8月30日與10月5日;蓮都與遂昌基地西紅花出芽與開(kāi)花時(shí)間稍慢，較縉云基地晚約15 d，西紅花出芽時(shí)間與開(kāi)花時(shí)間規(guī)律大體一致，出芽35～40 d后花朵陸續(xù)開(kāi)放(表 1)。

2.2 不同產(chǎn)地對(duì)西紅花開(kāi)花的影響

西紅花在浙江生長(zhǎng)至10月下旬開(kāi)始開(kāi)花，初花期延續(xù)到11月上旬，11月中下旬陸續(xù)進(jìn)入盛花期。4個(gè)不同產(chǎn)地的西紅花開(kāi)花時(shí)間不盡相同 (表2)。

表1 不同立地條件與西紅花出芽開(kāi)花的關(guān)系

表2 不同產(chǎn)地西紅花開(kāi)放時(shí)間和開(kāi)花數(shù)量

由表2可知，4個(gè)產(chǎn)地中，青田與建德西紅花開(kāi)花時(shí)間最早，分別在10月23日與10月24日就有花朵開(kāi)放，海門與南匯西紅花開(kāi)花稍晚，最早開(kāi)花時(shí)間在10月30日。

高溫影響西紅花開(kāi)放，容易導(dǎo)致花朵萎縮，11月5-6日溫度均在23℃以上，導(dǎo)致11月5-9日期間，花朵出現(xiàn)較多萎蔫，高溫不僅影響當(dāng)天花朵開(kāi)放，對(duì)后幾日開(kāi)花亦造成嚴(yán)重影響，是導(dǎo)致花朵萎蔫的主要因素。花朵萎蔫影響西紅花有效成分含量［6-7］，增加了日后采摘工作量，浙產(chǎn)西紅花在進(jìn)入11月初花期后，室內(nèi)溫度必須控制在20℃以下，直至所有花朵完全開(kāi)放。

2.3 不同產(chǎn)地西紅花性狀比較

不同產(chǎn)地西紅花開(kāi)花性狀存在差異 (表3)。建德西紅花種球平均重量、開(kāi)花總數(shù)、花朵總鮮重、柱頭總干重與單位種球開(kāi)花數(shù)均最高，分別為28.9 g，4 099朵，180.4 g，37.30 g與 157.6朵，南匯種球折干率與單位種球柱頭干重?cái)?shù)值最高，折干率達(dá)22.3%，單位種球柱頭干重為1.50 g，海門種球開(kāi)花性狀表現(xiàn)一般，青田種球開(kāi)花性狀表

表3 不同產(chǎn)地西紅花開(kāi)花性狀比較

現(xiàn)最差，折干率僅為19.1%，單位種球柱頭干重僅為0.72 g。

2.4 不同產(chǎn)地西紅花總苷含量測(cè)定

2.4.1 樣品含量測(cè)定

取11批不同產(chǎn)地的西紅花樣品22份各10 mg，每批2份，分別按照1.3.3節(jié)供試品的制備操作，制成供試品溶液，依照1.3.1節(jié)的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，按照外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 不同產(chǎn)地西紅花有效成分含量比較

2.4.2 不同產(chǎn)地西紅花有效成分含量比較

浙產(chǎn)西紅花有效成分含量均滿足藥典要求［1］，平均總西紅花苷含量為15.247%，不同產(chǎn)地西紅花西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ與總苷含量均存在極顯著差異 (P＜0.01)(表4)。海門西紅花西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ與總苷含量均最高，分別為13.314%，4.139%與17.453%，總苷含量是其他產(chǎn)地西紅花的1.11～1.27倍。建德西紅花有效成分含量最低，總苷含量?jī)H為13.716%。從有效成分含量看，浙產(chǎn)西紅花有效成分含量高，滿足藥典西紅花總苷含量不得少于10.0%的要求，為進(jìn)一步篩選適栽品系奠定了基礎(chǔ)。

3 小結(jié)與討論

高溫顯著影響西紅花開(kāi)花，持續(xù)高溫易導(dǎo)致西紅花花朵萎蔫，影響有效成分積累，增加人工采摘成本。浙江產(chǎn)西紅花在10月底進(jìn)入初花期后，貯藏室溫度需控制在20℃以下。選擇中高海拔地區(qū)貯藏西紅花種球，能適當(dāng)提早西紅花開(kāi)花，減少高溫襲擾，提早移栽大田，延長(zhǎng)種球大田生長(zhǎng)期。

產(chǎn)地顯著影響西紅花開(kāi)花時(shí)間與花朵性狀。建德產(chǎn)西紅花開(kāi)花時(shí)間早，開(kāi)花數(shù)多，柱頭產(chǎn)量高，綜合性狀表現(xiàn)良好。浙產(chǎn)西紅花總西紅花苷成分較高，滿足藥典西紅花總苷含量不得少于10.0%的要求，為良種選育與推廣提供了依據(jù)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (第一部) ［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:120-121.

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