楊 健

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院針灸科，河北 唐山 063000)

實驗研究

解毒通絡(luò)方對兔心肌缺血再灌注損傷心肌酶的影響※

楊 健

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院針灸科，河北 唐山 063000)

目的 研究解毒通絡(luò)方對實驗性兔心肌缺血再灌注損傷(MIRI)血清心肌酶的影響。方法將32只日本大耳白兔隨機分為4組，即空白對照組、模型組、解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組，每組各8只。解毒通絡(luò)方低、高劑量組分別予3.16、6.32 g/(kg·d)生藥，溶液量15 mL灌胃給藥;空白對照組和模型組分別予等容積0.9%氯化鈉注射液灌胃給藥。均連續(xù)5 d。然后模型組、解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組行左冠狀動脈前降支穿線，結(jié)扎，30 min后打開結(jié)扎實現(xiàn)再灌注，空白對照組只穿線，不結(jié)扎。測定各組天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK－MB)水平。結(jié)果 模型組、解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與空白對照組比較均明顯升高(P＜0.05)。解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與模型組比較均明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與解毒通絡(luò)方低劑量組比較略低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 解毒通絡(luò)方可降低兔MIRI心肌酶，對心肌具有保護作用。

心肌缺血;心肌再灌注損傷;解毒劑(中藥);通絡(luò);模型，動物;兔;L－乳酸脫氫酶

冠心病是臨床常見病，而急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是冠心病的嚴重事件之一，是急診搶救中常見的危重癥，早期溶栓或經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)可使梗死的相關(guān)冠狀動脈再通，縮小梗死面積，從而改善心肌梗死預(yù)后。然而，近年來越來越多證據(jù)顯示，在成功恢復(fù)心臟血流，即心肌得到血液再灌注后，可能使原有的心肌缺血性損傷加重，出現(xiàn)心律失常、梗死面積擴大等，即心肌缺血再灌注損傷(myocardial reperfusion injury，MIRI)。目前研究認為，氧自由基的產(chǎn)生、心肌細胞內(nèi)鈣超載及炎癥浸潤是MIRI的主要原因。針對這些原因，國內(nèi)外學(xué)者進行了大量研究，以尋找有效藥物。中醫(yī)藥治療本病有悠久的歷史，積累了豐富經(jīng)驗。本研究通過實驗觀察解毒通絡(luò)方對兔MIRI心肌酶的影響，以探討解毒通絡(luò)方治療MIRI的作用，為臨床提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 健康雄性日本大耳白兔32只，由華北煤炭醫(yī)學(xué)院動物中心提供［許可證號SCXK(京)2006－0005)］，體質(zhì)量2.5 ～3 kg。

1.1.2 藥物與試劑 解毒通絡(luò)方，藥物組成:瓜蔞30 g，半夏 12 g，黃連6 g，丹參15 g，海藻10 g，大黃5 g。以上藥物均為廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)的免煎顆粒制劑，相當于生藥飲片劑量。

1.1.3 主要儀器 全自動生化分析儀(7170A型，日本日立)，冰箱(BCD－192E/M型，新飛電器有限公司)，光學(xué)顯微鏡(CX40型，日本奧林巴斯)，72－1型分光光度計(江蘇無錫科達智能儀器廠)，電子天平(DT01型，常熟意歐儀器儀表有限公司)，冷光手術(shù)燈(YD01－2型，上海匯豐醫(yī)療器械有限公司)，放射免疫γ計數(shù)器(DFM－96型，合肥眾成機電技術(shù)開發(fā)有限公司)，單導(dǎo)心電圖機(ECG－6511型，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)。天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒，購自上海名典生物工程有限公司;乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、肌酸激酶(CK)試劑盒、肌酸激酶同工酶(CK－MB)試劑盒，均購自寧波美康生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 將32只健康雄性大耳白兔隨機分為空白對照組、模型組、解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組，每組各8只。

1.2.2 給藥方法 將解毒通絡(luò)方用0.9%氯化鈉注射液混勻，解毒通絡(luò)方低劑量組按3.16 g/(kg·d)生藥，溶液量為15 mL灌胃給藥;解毒通絡(luò)方高劑量組按6.32 g/(kg·d)生藥，溶液量為15 mL灌胃給藥?？瞻讓φ战M和模型組均予等容積0.9%氯化鈉注射液灌胃給藥。均連續(xù)5 d。

1.2.3 造模方法 末次給藥后，所有家兔以20%氨基甲酸乙酯5 mL/kg腹腔注射麻醉。家兔仰臥于操作臺，四肢及頭部固定，8%硫化鈉四肢及胸部脫毛。四肢接標準肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。沿胸骨正中線剪開皮膚，鈍性分離肌肉，沿胸骨左緣胸肋關(guān)節(jié)剪斷3～5肋骨，小心剪開心包，開胸器打開切口，暴露心臟，用蘸有0.9%氯化鈉注射液的棉棒旋轉(zhuǎn)心臟，暴露血管，左心耳根部下方2～3 cm處用連接5/0號線的眼科小圓針穿過靜脈下心肌淺層，穿線后穩(wěn)定10 min，除空白對照組外，其余3組打“鞋帶樣”雙活結(jié)結(jié)扎左冠狀動脈前降支，30 min后打開結(jié)扎實現(xiàn)再灌注，再灌注120 min后結(jié)束實驗。

1.3 檢測指標及方法 灌注結(jié)束時于右心房取血5 mL，注入試管中待凝固，3 000 r/min離心，分離血清，測定AST、LDH、CK及CK－MB。國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(IFCC)動力學(xué)法測定AST，IFCC推薦法測定LDH，N－乙酰半胱氨酸法測定CK，免疫抑制法測定CK－MB，操作嚴格按照試劑盒進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗數(shù)據(jù)建立EXCEL數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用均數(shù)±標準差(±s)表示，作方差分析檢驗，組間比較采用SNK法。

2 結(jié)果

3組AST、LDH、CK及CK－MB比較見表1。

表1 3組AST、LDH、CK及CK－MB比較U/L，±s

表1 3組AST、LDH、CK及CK－MB比較U/L，±s

與空白對照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組 別 n AST LDH CK CK－MB空白對照組 8 67.63 ±10.87 445.63 ±64.62 118 4.00 ±168.90 846.75 ±115.30模型組 8 93.28 ±10.21* 662.29 ±71.83* 196 0.57 ±277.46* 165 0.43 ±146.53*解毒通絡(luò)方低劑量組 8 80.33±9.35＊△ 556.00±108.47＊△ 172 4.00±109.21＊△ 144 6.83±140.28＊△解毒通絡(luò)方高劑量組 8 79.86±12.23＊△ 553.57±95.59＊△ 169 6.85±136.61＊△ 139 3.71±210.07＊△△

由表1可見，模型組、解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與空白對照組比較均明顯升高(P＜0.05)，造模成功。解毒通絡(luò)方低劑量組及解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與模型組比較均明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。解毒通絡(luò)方高劑量組AST、LDH、CK及CK－MB與解毒通絡(luò)方低劑量組比較略低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

MIRI屬中醫(yī)學(xué)胸痹、心痛、心悸、真心痛等范疇。病位在心，病性為本虛標實。本虛為臟腑虛損，陰陽氣血失調(diào);標實有氣滯、血瘀、痰阻、寒凝。臨床實踐中我們發(fā)現(xiàn)，隨著人們生活水平的提高，生活方式、飲食結(jié)構(gòu)的改變，工作壓力的增加，生活節(jié)奏的加快，導(dǎo)致現(xiàn)代人的疾病特點也發(fā)生了變化，實證多，虛證少。尤其是部分人恣嗜膏粱厚味，吸煙飲酒，活動減少，導(dǎo)致陽氣不得外泄，內(nèi)郁生熱成毒，毒熱濁腐浸于血脈，心脈瘀窄，心體大損，心絡(luò)閉塞，不通則痛;或心理壓力過大，所欲不遂，精神緊張，家庭不和，多致肝郁氣滯，氣郁化火。《素問·至真要大論》載:“火熱受邪，心病生焉?！薄妒備洝吩?“大抵心屬火而惡熱，氣受病則易于生熱?！迸R床中許多西醫(yī)診斷為冠心病，中醫(yī)診斷為胸痹的患者，除有胸痛、胸悶及氣短等癥狀外，還有發(fā)熱，心悸，煩躁不安，大便不暢，舌質(zhì)黯紅，舌苔黃膩或黃燥，脈滑數(shù)、弦數(shù)等癥狀。這些癥狀均與熱毒熾盛、血脈瘀阻有關(guān)。因此，提出毒瘀阻絡(luò)致病的觀點。解毒通絡(luò)方是劉玉潔教授在繼承前人經(jīng)驗，又結(jié)合自身臨床實踐的基礎(chǔ)上擬定的治療胸痹方劑。方中瓜蔞清熱化痰，寬胸除痹，為君藥;黃連瀉熱降火，半夏降逆化痰，半夏、黃連相配辛開苦降，化痰散結(jié)，通暢氣機，共為臣藥;佐以丹參活血化瘀，海藻軟堅化痰;使以大黃，既清熱解毒又化瘀散結(jié)，使熱毒從大便出，使邪有出路，熱毒清，閉結(jié)散，脈絡(luò)暢而諸癥除［1］。諸藥合用，共奏寬胸開痹散結(jié)、清熱化痰祛瘀的功效。臨床上對冠心病心絞痛、PTCA及支架術(shù)后出現(xiàn)胸悶、胸痛、舌質(zhì)黯紅、舌苔黃膩、脈滑數(shù)等表現(xiàn)的患者有較好治療效果。

為了進一步證實MIRI后“毒瘀”的病機，證實解毒通絡(luò)方在本病中的治療作用，我們用日本大耳白兔制作MIRI后動物模型，重點觀察心肌標志物酶的變化，為心肌缺血再灌注損傷的治療探索一條新思路、新方法。CK－MB主要存在于心肌組織中，其他組織含量很少。在心肌細胞受損傷時，CK、CK－MB釋放入血液，血液中含量急劇升高，故測定 CK及 CK－MB是檢測心肌損傷的敏感指標［2］。

本實驗結(jié)果顯示，解毒通絡(luò)方高、低劑量組 AST、LDH、CK及CK－MB均較模型組明顯下降，表明心肌細胞的損傷程度減輕，心肌酶漏出減少，具有保護缺血再灌注心肌的作用。說明解毒通絡(luò)方療效確切，證實毒瘀阻絡(luò)是心肌梗死病機觀點的正確性，證實了以清熱解毒通絡(luò)藥為主、重在祛邪組方原則的正確性。

(指導(dǎo)老師:劉玉潔)

［1］ 郝幼敏，劉玉潔.中藥解毒通絡(luò)法對急性心肌梗死患者C反應(yīng)蛋白的干預(yù)［J］.四川中醫(yī)，2007，25(2):64 －65.

［2］ 李影林.中華醫(yī)學(xué)檢驗全書［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:836.

Effect of dispelling toxins and dredging collaterals meridians and collaterals on myocardial enzyme in rabbit with myocardial ischemia/reperfusion injury

YANG Jian.Acupuncture and Moxibustion Department，Tangshan Mu- nicipal Hospital of Traditional Chinese Medicine in Hebei Province，Hebei，Tangshan 063000

Objective To investigate the effects of dispelling toxins and dredging collaterals meridians and collaterals on myocardial enzyme in rabbit with myocardial ischemia/reperfusion injury.Methods 32 Japanese white rabbits were randomly divided into four groups，sham operation group，myocardial ischemia group，dispelling toxins and dredging collaterals therapy low dosage group(group C)，dispelling toxins and dredging collaterals therapy high dosage group(group D).There were 8 rabbits in each group.Low dose group and the high dose group were 3.16，6.32 g/(kg·d)of crude drug.Liquid volume of 15 mL was administered orally.The equal volume of 0.9%sodium chloride injection was administered orally in the blank control group and model group for 5 days of continuous administration.The threading，ligation of left anterior descending branch was carried out in dredging collaterals group B，C and D.Open ligation achieved reperfusion after 30 min，the blank control group only wear line was not ligated.The levels of AST，LDH，CK and CK －MB were measured in each group.Results The levels of AST、LDH、CK、CK－MB in group B，C and D were significantly increased in comparison with those in group A(P ＜0.05).The levels of AST、LDH、CK、CK －MB in group C and D were significantly decreased in comparison with those in group B(P ＜0.05，P ＜0.01).The levels of AST、LDH、CK、CK －MB in group D were lower than those in group C，but there was no significance(P ＞0.05).Conclusion Dispelling toxins and dredging collaterals therapy may reduce injury in myocardial cell，it has protective effect on myocardial ischemia/reperfusion.

Myocardial ischemia/reperfusion injury;Dispelling toxins and dredging collaterals therapy;Aspartate aminotrans(AST);Lactate dehydrogenase(LDH);Creatine kinase;MB－Creatine kinase

R542.205.31;R285.5;R－33

A

1002－2619(2012)07－1066－03

※項目來源:河北省中醫(yī)藥管理局2008年度中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合科研計劃課題(編號:2008043)

楊健(1971—)，女，副主任中醫(yī)師，碩士。從事針灸臨床工作。研究方向:心腦血管疾病、中醫(yī)美容及針灸美容。

2012－03－06)