吳限，徐瑩，陳鵬

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

腦血管疾病是神經(jīng)內(nèi)科最為常見疾病，也是成人致殘的常見因素，在世界范圍內(nèi)已成為繼心臟病、癌癥之后第3位的致死性疾病，這不僅嚴(yán)重地影響著老年人的生活質(zhì)量，也給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。谷氨酸(Glu)和天門冬氨酸(Asp)是興奮性氨基酸(EAA)的遞質(zhì)，廣泛存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中。當(dāng)發(fā)生腦缺血時(shí)，Glu和Asp會(huì)異常升高，在神經(jīng)元缺血損傷中起重要作用［1］。本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)觀察各組的腦梗死大鼠的腦組織中Glu、Asp含量，探討心腦通絡(luò)液治療腦梗死的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 動(dòng)物及藥物

健康SD大鼠，體質(zhì)量250～300g(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心提供)。制備濃度分別為0.54ml/ml(高劑量組)和0.27ml/ml(低劑量組)的心腦通絡(luò)液(黃芪 50g，地龍 20g，桃仁 20g，紅花 20g，當(dāng)歸尾 20g，赤芍 20g，川芎 20g，太子參 20g，水蛭 10g，菟絲子20g等，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室提供)。用生理鹽水制備成濃度為0.033g/ml的步長(zhǎng)腦心通(咸陽(yáng)步長(zhǎng)制藥有限公司生產(chǎn)，每粒0.4g)藥液。

1．1．2 試劑及儀器 低溫離心機(jī);ASP試劑盒;Glu試劑盒等。

1．2 方法

1．2．1 分組及給藥 將健康雄性SD大鼠編號(hào)后隨機(jī)分為5組，分別為心腦通絡(luò)液高劑量組(高劑量組)、心腦通絡(luò)液低劑量組(低劑量組)、步長(zhǎng)腦心通對(duì)照組(對(duì)照組)、假手術(shù)組和模型組。假手術(shù)組和模型組予同等體積的0.9%生理鹽水灌胃，1日1次。治療組大鼠分別于術(shù)前5天至處死前予灌胃給藥，劑量標(biāo)準(zhǔn)為:高劑量組5.40ml/kg，低劑量組2.70ml/kg，對(duì)照組0.33g/kg，每日1次。在造模后每時(shí)間點(diǎn)(6h、12h、24h、48h)各取8只大鼠用高效液相色譜儀檢測(cè)Asp和Glu的含量指標(biāo)。

1．2．2 模型的復(fù)制 參照文獻(xiàn)［2－3］，用線栓法制備大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血的大鼠模型。

1．2．3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 按照試劑盒說(shuō)明，將各組大鼠的腦組織去除小腦和延髓，制備好10%腦組織勻漿，用離心機(jī)離心10min，提取腦勻漿的上清液。用高效液相色譜儀測(cè)定其Glu、Asp的含量。

2 結(jié)果

2．1 心腦通絡(luò)液對(duì)腦梗死大鼠腦組織中Glu含量的影響

見表1可知，腦梗塞6h，模型組大鼠腦組織Glu含量開始顯著增加，12h有所下降，但仍有顯著性差異(P ＜0.01)，24h、48h無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);各治療組與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比，腦梗塞6h、12h時(shí)大鼠腦組織中Glu含量均有不同程度降低，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，以高劑量組降低最明顯;24h、48h各治療組腦組織Glu含量有所增加，但除48h對(duì)照組、高劑量組外，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高、低劑量組與同點(diǎn)對(duì)照組比較，各高劑量組(除48h)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);各治療組與同點(diǎn)假手術(shù)組比較，6h、12h(除高劑量組)各組均有顯著性差異(P＜0.01)。

2．2 心腦通絡(luò)液對(duì)腦梗死大鼠腦組織中Asp含量的影響 見表2。

表1 各組大鼠的腦組織中Glu的含量(±s)

表1 各組大鼠的腦組織中Glu的含量(±s)

注:各組相比:假手術(shù)組、各治療組與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治療組與同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低劑量組與同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組相比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別Glu(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手術(shù)組 8 257．78±29．13▲▲ 261．52±36．63▲▲n 277．00 ±26．69 272．82 ±31．19模型組 8 464．01 ±36．83 384．88 ±31．76 268．59 ±30．02 250．64 ±36．42對(duì)照組 8 375．56±31．42▲▲※※ 336．45 ±36．31▲※※ 289．15±27．14 296．87 ±36．14▲▲低劑量組 8 370．30±29．50▲▲※※ 313．18 ±46．65▲▲※※ 281．43±26．06 278．73 ±29．87高劑量組 8 327．97±32．25▲▲※※＊＊ 296．95 ±28．11▲▲＊ 255．63±28．42* 286．66 ±29．76▲

表2 各組大鼠的腦組織中Asp的含量(±s)

表2 各組大鼠的腦組織中Asp的含量(±s)

注:各組相比:假手術(shù)組、各治療組與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治療組與同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低劑量組與同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組相比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別Asp(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手術(shù)組 8 307．73±27．57▲▲ 315．30 ±33．35▲▲ 313．58 ±26．23▲▲ 318．11±23．79 n▲▲模型組 8 525．61 ±22．81 542．03 ±33．72 558．71 ±28．65 570．08 ±27．15對(duì)照組 8 461．25±34．96▲▲※※ 478．33 ±33．47▲▲※※ 491．22 ±29．77▲▲※※ 500．76±22．99▲▲※※低劑量組 8 469．09±26．59▲▲※※ 482．81±37．54▲▲※※ 494．32±33．13▲▲※※ 505．12±25．00▲▲※※高劑量組 8 436．99±37．69▲▲※※ 447．37 ±29．04▲▲※※ 456．09 ±26．90▲▲※※ 465．40±22．12▲▲※※＊

在腦梗塞6h時(shí)，模型組大鼠腦組織中Asp含量開始增加，腦梗死后48h時(shí)Asp含量達(dá)到頂峰(P＜0.01);給藥后各治療組與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比，大鼠腦組織中的Asp含量有不同程度地下降，且有顯著性差異(P＜0.01)，尤其以高劑量組下降最為明顯;高、低劑量組(除48h高劑量組外)與同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異(P＞0.05);各治療組與同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有研究表明，興奮性氨基酸遞質(zhì)的興奮毒性參與了缺血發(fā)作及其再灌流損傷的病理過(guò)程，腦缺血發(fā)作初期Glu、Asp含量第一次升高可造成缺血灶周圍半暗區(qū)的細(xì)胞膜去極化，Ca2+內(nèi)流增加，造成腦組織損傷;起病后5h～5天時(shí)，損傷的周圍組織進(jìn)一步釋放Glu、Asp，導(dǎo)致Glu、Asp含量的第二次升高，這種可擴(kuò)播的神經(jīng)興奮毒性導(dǎo)致半暗區(qū)的擴(kuò)大，引起梗塞灶體積增加［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，心腦通絡(luò)液可有效降低腦缺血發(fā)作時(shí)和缺血后再灌注時(shí)Glu和Asp的濃度，抑制興奮性氨基酸遞質(zhì)的興奮毒性，從而控制腦梗塞病情的進(jìn)一步惡化，對(duì)腦梗塞的恢復(fù)起到積極有效地治療作用。

心腦通絡(luò)液是李延教授根據(jù)中醫(yī)理論，在汲取歷代著名醫(yī)家經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，在補(bǔ)陽(yáng)還五湯基礎(chǔ)上加水蛭、太子參和菟絲子等藥組成。方中重用黃芪為君，大補(bǔ)脾胃之元?dú)猓顨馔?，瘀去絡(luò)通［5］。太子參、菟絲子、當(dāng)歸、水蛭四藥共為臣藥。其中太子參性甘平，味微苦，補(bǔ)氣健脾，生津潤(rùn)肺;菟絲子性甘平，味辛，補(bǔ)腎益精，養(yǎng)肝明目。兩藥合用可助黃芪補(bǔ)虛固本，補(bǔ)而不燥。當(dāng)歸尾活血通絡(luò)不傷血、水蛭破血消癥不留瘀，兩藥合用使補(bǔ)而不滯。川芎活血祛瘀，兼有行氣作用，赤芍清熱涼血，散瘀止痛，紅花活血通經(jīng)，祛瘀止痛，桃仁可活血祛瘀。赤芍、川芎、桃仁、紅花四藥合用助當(dāng)歸尾、水蛭活血祛瘀，在本方為佐藥;地龍通經(jīng)活絡(luò)，力專善走，周行全身，以行藥力，亦為佐藥。本方重用補(bǔ)氣藥與少量活血藥相配，氣旺則血行以固本，化瘀通絡(luò)以治標(biāo)，使補(bǔ)氣不壅滯，活血而不傷正，標(biāo)本兼治，共奏益氣活血之功效。

［1］ 許紹芬．神經(jīng)生物學(xué)［M］．上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1998:154－155．

［2］ 吳限，陳鵬，陳曦．心腦通絡(luò)液對(duì)腦梗死大鼠腦組織IL－8、IGF－1含量的影響［J］．中醫(yī)藥信息，2010，27(6):49－52

［3］ Zea－Longa E，Weinstein PR，Carlson，et al．Reversible middle artery occlusion without craniectomy in rats［J］．Stroke，1989，20(1):84－91．

［4］ 王哲，劉麗波，劉暢，等．腦梗塞患者血及腦脊液中興奮性氨基酸遞質(zhì)的改變及意義［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2002，6(6):369－371．

［5］ 李巖，李丹，李書霖．心腦通絡(luò)液預(yù)處理聯(lián)合針刺后處理對(duì)缺血再灌注大鼠心肌梗死范圍的影響［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(5):36－39．