李雪靜，范成龍，宋洪濤(.福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建 福州35008;.南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學科，福建 福州35005)

提高中藥質(zhì)量，改變中藥“大、黑、粗”的狀態(tài)，讓中醫(yī)中藥進入國際市場，對中藥的制備加工工藝提出了更高的要求，中藥有效成分的提取分離是其中的重要環(huán)節(jié)，有效成分的含量測定項目已成為評價提取中不可缺少的內(nèi)容，這關(guān)系到中藥提取物在臨床中的應用療效。為了建立中藥制備工藝的優(yōu)選評價體系，對制備工藝進行全程把關(guān)，對品質(zhì)進行精確評價，越來越多的高新技術(shù)應用于中藥提取分離過程中，譜效結(jié)合技術(shù)便是其中之一。

1 譜效結(jié)合技術(shù)的建立與發(fā)展

1.1 譜效結(jié)合技術(shù)的建立 “中藥譜效學”是一個近幾年才提出的概念，是指將標示活性成分群特征峰的中藥指紋圖譜與藥效結(jié)果對應起來，將中藥指紋圖譜中化學成分的變化與中藥藥效結(jié)果聯(lián)系起來，從而建立中藥譜效關(guān)系，反映中藥的內(nèi)在質(zhì)量［1］。

中藥和西藥不同，它的特點是作用的整體性。指紋圖譜反映的是中藥的化學信息，所檢測的特征指紋有可能并不包含中藥中的有效成分，因此不能直接體現(xiàn)中藥藥理活性信息，也不能直觀地反映中藥具有的療效。于是相關(guān)學者提出開展藥效與指紋圖譜相關(guān)性研究，即中藥譜效關(guān)系研究［2］。中藥譜效關(guān)系研究彌補了以化學指紋圖譜控制中藥質(zhì)量與藥效脫鉤的不足，可為中藥質(zhì)量控制提供更為科學有效的數(shù)據(jù)。

1.2 譜效結(jié)合技術(shù)在中藥研究中的應用 譜效結(jié)合技術(shù)目前在單味中藥、復方中藥、中藥制劑以及藥動學的研究中應用較多。實驗研究較早的是寧黎麗等［3］對吳茱萸湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的方法學研究，該研究通過對吳茱萸湯進行組方藥量變化，在原方基礎(chǔ)上按正交試驗法組成9個不同配比的處方，同時對其進行HPLC分析和鎮(zhèn)痛與止嘔兩個指標的藥理實驗，對所得化學信息和藥理數(shù)據(jù)進行逐步回歸分析，確定吳茱萸湯主要色譜峰成分對藥效的歸屬。郭承軍等［4］應用HPLC指紋圖譜方法分析給藥后模型小鼠血清藥物成分，研究金銀花抗流感作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及譜效關(guān)系，發(fā)現(xiàn)綠原酸是金銀花抗流感作用的主要有效成分之一，另外尚有3～4個重要成分參與這一藥理過程。

在復方中藥方面，李鵬等［5］分析桃紅四物湯抑制小鼠痛經(jīng)有效部位的譜效關(guān)系，以闡明相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用己烯雌酚結(jié)合縮宮素致小鼠痛經(jīng)模型，對桃紅四物湯及其單味藥石油醚部位進行篩選，并結(jié)合GC-MS法對其分析，運用數(shù)理統(tǒng)計方法將藥理數(shù)據(jù)與氣相色譜峰相對面積相關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明23號峰即亞油酸在延長扭體潛伏期和減少扭體次數(shù)方面起主要作用，其次24號峰(十八碳烯酸)，45號峰(花生酸)和61號峰(二十七烷)對鎮(zhèn)痛效果有一定的協(xié)同作用。證明用譜效結(jié)合的方法，可以較客觀的分析評價化學物質(zhì)與效應之間的關(guān)系。

在中藥制劑方面，盧紅梅等［6］對魚腥草注射液質(zhì)量控制中的譜效學進行初步探討，以抗炎效果為例，為中藥的指紋圖譜建立提供新的思路。林立等［7］研究瀉白散HPLC譜效關(guān)系，將瀉白散方中各藥進行正交組合，測定HPLC圖譜及評價祛痰、抗炎作用，并對HPLC圖譜進行峰歸屬分析，運用數(shù)理統(tǒng)計方法將藥理數(shù)據(jù)和HPLC圖譜中各色譜峰面積相關(guān)聯(lián)，研究譜效相關(guān)性。結(jié)果證明桑白皮中有2個峰顯示與祛痰作用和抗炎作用呈正相關(guān)，初步推斷為二苯乙烯苷類成分。

在藥動學方面，賀福元等［8］提出了中藥多成分體系藥動學研究的新方法——總量統(tǒng)計矩法，即滿足在中醫(yī)宏觀要求(宏觀量化可算)的同時又滿足現(xiàn)代科學微觀可測(可按目前單個成分藥動學方法進行研究)的要求。

2 譜效結(jié)合技術(shù)在中藥提取純化中的應用

2.1 中藥提取純化工藝的評價標準 中藥、天然藥物的提取應盡可能的提取出有效成分，或根據(jù)某一成分或某類成分的性質(zhì)提取目的物。不同的提取純化方法均有其特點和適用范圍，應根據(jù)與治療作用相關(guān)的有效成分(或有效部位)的理化性質(zhì)，或藥效研究結(jié)果，通過實驗對比，選擇適宜的方法。復方提取純化的評價指標應考慮其多成分作用的特點，既要重視傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗、組方理論，充分考慮藥物作用的物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚的現(xiàn)狀，又要盡量改善制劑狀況，以滿足臨床用藥要求。在評價指標的選擇上，應結(jié)合藥物品種的具體情況，探討能夠?qū)ζ浒踩?、有效、質(zhì)量可控作出合理判斷的綜合評價指標，必要時可采用生物學指標等。在提取純化研究過程中，有可能引起安全性隱患的成分應納入評價指標。

目前中藥制劑工藝逐漸形成了浸出物、指標成分、大類成分、生物學方法、工程及經(jīng)濟指標等評價指標［9］。這些指標各有其優(yōu)勢及局限性，浸出物可直接影響固體制劑的服用量與劑型選擇，影響液體制劑的澄明度與穩(wěn)定性，但未必真實的代表部分藥材及復方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ);指標成分技術(shù)含量高，更加精細，在一定程度上表明工藝研究的現(xiàn)代水平，是現(xiàn)有常用的評價指標，但并非所有藥材都具備使用指標成分的基礎(chǔ)，能找到與療效密切相關(guān)的具備說服力的指標成分，即使具備這樣的指標成分，但其未必真實反映中藥復方多成分多靶點的特征;大類成分具有綜合性，但不夠精細，無法反映單一成分在工藝過程中的降解、轉(zhuǎn)化;生物學方法以工藝產(chǎn)物的藥理效應評價工藝，具備說服力，但生物學指標的敏感性不足，未必可以反映不同工藝的優(yōu)劣［10］。

對于這些問題，章臣桂提出了“抓住君臣、不放佐使;抓住有效物質(zhì)，不放協(xié)同效應”的科研思路［11］。總而言之，中藥制劑工藝的評價經(jīng)歷了從無指標到有指標，評價指標從籠統(tǒng)、模糊到精細，又從精細回歸綜合的過程。

2.2 指紋圖譜對中藥提純工藝評價 開展譜效相關(guān)性研究可以為中藥制劑工藝優(yōu)選建立較為完善的評價體系，可以選擇多組分考察指標優(yōu)選提取純化工藝，并界定這些指標的權(quán)重因子大小。由于資源的限制，中藥對照品的缺乏，對所有的藥效成分均采取含量測定，效率低，成本高，不太現(xiàn)實。選擇多個具有代表性成分進行含量測定，在一定程度上保證質(zhì)量的有效性，中藥復方指紋圖譜在制備工藝應用已有初步研究，通過指紋圖譜峰面積比較，可獲悉不同成分在不同工藝中的成分積累程度的差異，實現(xiàn)成分的含量相對大小比較。

車輛稱重時，希望僅通過調(diào)節(jié)空氣彈簧高度調(diào)整閥便能調(diào)平，同時要考慮在軸箱彈簧處加設(shè)墊片。當僅調(diào)節(jié)高度調(diào)整閥時，ΔS為變量，所以式(4)和(5)所組成的方程組有解時，便說明只調(diào)節(jié)高度調(diào)整閥就能調(diào)平。

王冬梅等［12］采用HPLC-UV-MS法測定了貫葉連翹及其提取物的指紋圖譜，并對主要色譜峰進行定性定量分析，旨在對提取物制備工藝的有效性、穩(wěn)定性以及抗氧化劑、藥材采收部位對提取物質(zhì)量的影響進行綜合評價。結(jié)果證明將極性較大的金絲桃素類和黃酮類成分與極性較小的貫葉金絲桃素類成分分別進行提取，然后勾兌貫葉連翹提取物，這種提取工藝的穩(wěn)定性良好，可有效地富集金絲桃素類和黃酮類化合物。

吳永江等［13］研究3種不同的提純工藝對參麥注射液質(zhì)量的影響，用HPLC測定紅參藥材以及不同工藝提純的紅參中間體和參麥提取液的指紋圖譜，并測定人參皂苷Rg1、Re總量和Rb1含量以及參麥提取液中總皂苷含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個不同工藝的紅參中間體和參麥提取液在指紋圖譜和人參皂苷含量上都有顯著的差異。用HPLC指紋圖譜法可以快速準確地檢測不同工藝對參麥提取液質(zhì)量的影響。

陸臻等［14］為改進丹參注射液的制備工藝，利用指紋圖譜來考察工藝的穩(wěn)定性。選擇明膠醇沉法對丹參注射液的制備工藝進行改進，采用HPLC法對多批樣品進行考察，建立指紋圖譜來確認制備工藝的穩(wěn)定性。結(jié)果證明明膠沉淀法制備工藝穩(wěn)定可控。吳永江等［13］研究3種不同的提純工藝對參麥注射液質(zhì)量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個不同工藝的紅參中間體和參麥提取液在指紋圖譜和人參皂苷含量上都有顯著的差異。用HPLC指紋圖譜法可以快速準確的檢測不同工藝對參麥提取液質(zhì)量的影響。

2.3 譜效結(jié)合評價方法的應用 對于作用機制復雜但相關(guān)基礎(chǔ)研究薄弱的中藥，藥材在具體處方中發(fā)揮作用的有效成分和有效部位還不夠明確，一些含量較低或現(xiàn)有檢測手段未能反映的藥效成分就很有可能在中藥提純的過程中被當做雜質(zhì)去除。故中醫(yī)藥業(yè)內(nèi)人士提出了全新的、處于學術(shù)前沿的中藥現(xiàn)代化研究思路，即建立在中藥指紋圖譜研究基礎(chǔ)上，但并不等同于中藥指紋圖譜，而是比指紋圖譜更深入一層的譜效關(guān)系［15］。

“譜效結(jié)合”評價方法的優(yōu)勢在于綜合考慮了物質(zhì)基礎(chǔ)及其效應，將指紋圖譜技術(shù)運用于工藝評價。將其作為評價指標，與大類成分相比更加精細，與單一成分相比更加全面。即使藥效物質(zhì)基礎(chǔ)在我指紋圖譜視野之外，藥效學指標的復核也會避免工藝路線的差錯。采用“譜效結(jié)合”的評價方法，有助于我們在尚未完全把握藥材或復方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的現(xiàn)有狀況下，減少因藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及協(xié)同作用的“黑箱”因素所導致工藝研究現(xiàn)差錯的概率［16］。

王鳳云等［17］分別以HPLC指紋圖譜的主成分保留率和急性肝損傷的藥效模型為指標，評價綿茵陳提取液的大孔吸附樹脂精制工藝的合理性。以HPLC指紋圖譜的主峰保留率為指標，對綿茵陳提取液的精制工藝進行評價;建立CCl4致小鼠急性肝損傷模型，測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，并觀察肝組織病理學變化，進行小鼠灌胃給藥的急性毒性實驗，考察綿茵陳提取液精制前后口服給藥的安全性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)綿茵陳提取液精制前后的HPLC指紋圖譜基本一致，綿茵陳提取液精制前后的保肝作用無顯著差異，綿茵陳提取液精制前后均未發(fā)現(xiàn)明顯的急性毒性反應。以HPLC指紋圖譜和藥效學實驗相結(jié)合的評價方法，證實了綿茵陳提取液大孔吸附樹脂精制工藝的合理性。

3 結(jié)語

中藥譜效關(guān)系學的研究雖已提出多年，但是還沒有形成成熟穩(wěn)定的研究思路和方法，現(xiàn)有的研究內(nèi)容也存在一些值得商榷的問題。在譜效相關(guān)性研究過程中，如何確立化學指紋圖譜和生物指紋圖譜中的特征峰信息，如何將指紋圖譜所獲取的化學成分特征信息與生物效應相關(guān)信息進行關(guān)聯(lián)，采取什么數(shù)學模型和方法進行化學特征與生物學特征信息關(guān)聯(lián)等等這些都是中藥指紋圖譜譜效相關(guān)性研究的關(guān)鍵問題。

而且，中藥在提純過程中溶媒、環(huán)境等因素都會對成分產(chǎn)生影響，而在藥效研究方面，很多西化的藥理模型不能全面的反映中藥的臨床功效。將指紋圖譜技術(shù)與藥效學結(jié)合，分析指紋圖譜主要色譜峰所對應成分，再經(jīng)組合配比和主要藥效學驗證，確定譜效相關(guān)性，優(yōu)化中藥提純工藝，將成為解決中藥質(zhì)量控制這個制約中藥現(xiàn)代化發(fā)展問題的主要途徑之一。

［1］李 戎，閆智勇，李文軍，等.創(chuàng)建中藥譜效關(guān)系學［J］.中醫(yī)教育，2002，21(2):62.

［2］戚 進，余伯陽.中藥質(zhì)量評價新模式——“譜效整合指紋圖譜”研究進展［J］.中國天然藥物，2010，8(3):171.

［3］寧黎麗，畢開順，王 瑞，等.吳茱萸湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的方法學研究［J］.藥學學報，2000，35(2):131.

［4］郭承軍，石俊英.金銀花抗小鼠流感作用的譜效關(guān)系研究［J］.中藥藥理與臨床，2009，25(4):50.

［5］李 鵬，李 祥，陳建偉，等.桃紅四物湯干預痛經(jīng)模型小鼠有效部位的譜效關(guān)系研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2006，13(11):52.

［6］盧紅梅，梁逸曾，錢 頻.魚腥草注射液質(zhì)量控制中的譜效學初步探討［J］.藥學學報，2005，40(12):1147.

［7］林 立，劉曉秋.瀉白散HPLC譜效關(guān)系初探［J］.中國現(xiàn)代中藥，2009，11(8):35.

［8］賀福元，羅英杰，鄧凱文，等.中藥(復方)藥動學研究現(xiàn)狀及研究方法探討［J］.中草藥，2005，36(10):1582.

［9］張 軍.隔山香藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其復方大孔吸附樹脂精制工藝“譜效結(jié)合”的評價研究［D］.廣州中醫(yī)藥大學，2008:2.

［10］謝秀瓊.對中藥制劑工藝研究評價指標的淺見［J］.中藥新藥與臨床藥理，1999，10(4):197.

［11］李 靜.淺談中藥制劑專家章臣桂的科研思路［J］.天津藥學，2000，12(2):87.

［12］王冬梅，劉朝燊，楊得坡.指紋圖譜技術(shù)對貫葉連翹提取物制備工藝過程的評價［J］.中國中藥雜志，2006，31(10):800.

［13］吳永江，崔勤敏，程翼宇.制備工藝對參麥注射液質(zhì)量的影響［J］.中國中藥雜志，2005，30(9):662.

［14］陸 臻，汝 蕓.丹參注射液制備工藝的改進及其指紋圖譜［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27(6):769.

［15］李 戎，閻智勇，徐 濤，等.“譜效關(guān)系”研究是中藥質(zhì)量與藥效標準規(guī)范的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［J］.醫(yī)藥簡訊，2002，10:18.

［16］張 軍，李文周，王鳳云，等.中藥大孔吸附樹脂精制工藝"譜效結(jié)合"評價方法研究［C］.2009.

［17］王鳳云，陳玉興，周瑞玲，等.譜效結(jié)合方法對綿茵陳大孔吸附樹脂精制工藝的評價［J］.中藥新藥與臨床藥理，2009，20(2):166.

［18］張 軍，衛(wèi) 罡，李文周，等.護心復方藥液大孔吸附樹脂精制工藝的評價研究［J］.中國新藥雜志，2009，18(12):1159.