施啟紅（江蘇省啟東市人民醫(yī)院藥劑科，啟東226200）

［本文編輯］蘭 芬

目前市售的鹽酸林可霉素制劑有片劑、膠囊劑和注射劑，其眼用制劑只有鹽酸林可霉素滴眼液。滴眼液在滴入眼后與角膜接觸的時(shí)間通常是1～2min，眼部生物利用度＜10%，需頻繁給藥，給病人帶來(lái)不便。溫敏凝膠是一種環(huán)境敏感型智能凝膠，在室溫下為液體，在體溫下轉(zhuǎn)變?yōu)槟z［1，2］。鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠為江蘇省啟東市人民醫(yī)院的自制制劑，具有促進(jìn)藥物透皮吸收，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)［3］，其主要成分為鹽酸林可霉素。測(cè)定鹽酸林可霉素含量最常用的方法是 HPLC法［4，5］，除此以外，還有分光光度法和微生物測(cè)定法等?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2010版收載了鹽酸林可霉素片劑、注射液和膠囊，以及它們的質(zhì)量控制方法，其他劑型尚未收載。本研究采用RP－HPLC法測(cè)定了鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠中鹽酸林可霉素的含量，可為其質(zhì)量控制提供方法。

1 儀器和試劑

1.1 儀器LC－10AVP型HPLC儀，包括LC－10ATVP泵、SPD－10AVP紫外檢測(cè)器、Class VP色譜工作站和SCL－10AVP系統(tǒng)控制器（日本島津制作所）；Diamond C18色譜柱（美國(guó)迪馬公司）；DF－101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省鞏義市英峪予華儀器廠(chǎng)）；DL－720A超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）；TGL－16B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)）；FA－2004電子天平（上海天平儀器廠(chǎng)）；精密酸度計(jì)（上海天達(dá)儀器有限公司）。

1.2 試劑和藥品 鹽酸林可霉素對(duì)照品（純度99.5%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)10773－0144）；泊洛沙姆407和泊洛沙姆188（美國(guó)BASF公司）；甲醇（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；其他試劑均為分析純。鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠（批號(hào)110311、110314、110317，含鹽酸林可霉素0.1%）和重蒸水由江蘇省啟東市人民醫(yī)院自制。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備（1）對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取鹽酸林可霉素對(duì)照品2mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇適量溶解，并稀釋至刻度，得到濃度為200μg／ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液，置于4℃冰箱中保存。（2）樣品溶液：取鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠1g，加10ml甲醇溶解，超聲30min，取該溶液1ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。將溶液移至EP管中，1.677×104×g離心5min，取上清液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液即得樣品溶液。（3）陰性對(duì)照溶液：制備不含鹽酸林可霉素的空白凝膠，按樣品溶液制備方法操作，即得陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：Diamond C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05mol／L硼砂溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 至7.4）－甲醇（50∶50）；流速：1.0ml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm；進(jìn)樣量：20μl；柱溫為室溫。用甲醇將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋?zhuān)玫綕舛葹?6μg／ml的對(duì)照品溶液，將該溶液與樣品溶液和陰性對(duì)照溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，得到色譜圖見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，鹽酸林可霉素出峰時(shí)間約為16.5min，溫敏凝膠中其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 鹽酸林可霉素的HPLC譜圖Figure 1 HPLC photograms of lincomycin hydrochloride

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密量取2.1項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.4ml，分別置于10ml容量瓶中，用甲醇定容，得到系列濃度為2、4、8、16、24、32和48μg／ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積（A）。以A對(duì)濃度（c）作線(xiàn)性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程A＝9 471.6c－175.1（r＝0.999 9），表明鹽酸林可霉素在2～48μg／ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)（1）日內(nèi)精密度：取2.3項(xiàng)下低、中、高濃度為2、8、32μg／ml的對(duì)照品溶液各20μl，按2.2項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣3次，兩次進(jìn)樣間隔3h，記錄峰面積，計(jì)算得到低、中、高濃度的日內(nèi)RSD分別為1.40%、0.17%和0.28%（n＝3）。（2）日間精密度：取低、中、高濃度為2、8、32μg／ml的對(duì)照品溶液，每天測(cè)定1次，連續(xù)3d，記錄峰面積，計(jì)算得到低、中、高濃度鹽酸林可霉素的日間RSD分別為1.77%、0.84%和1.74%（n＝3）。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按2.1（2）項(xiàng)下的方法配制批號(hào)為110311的樣品溶液，在配制后的0、2、4、6、8h分別測(cè)定峰面積，計(jì)算得到RSD＝1.36%，表明樣品溶液在配制后8h內(nèi)穩(wěn)定［6］。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠樣品5份（批號(hào)110311），按2.1項(xiàng)下（2）制備樣品溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算得RSD＝1.98%（n＝5），表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取濃度分別為2、8、32μg／ml的鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液0.5ml，加入適量已知濃度為9.78μg／ml的鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠樣品，以甲醇稀釋?zhuān)?.1（2）項(xiàng)下樣品溶液配制方法得到低、中、高濃度分別為11.608、17.584和41.501μg／ml的溶液，進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算得到低、中、高濃度鹽酸林可霉素的回收率分別為（91.40±1.27）%、（97.55±0.93）%和（99.13±1.11）%（n＝3）。

2.8 樣品含量測(cè)定 取批號(hào)為110311、110314、110317的鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠樣品，按2.1（2）項(xiàng)方法制備樣品溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量。鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠中鹽酸林可霉素的標(biāo)示量為0.1%，結(jié)果測(cè)得3個(gè)批號(hào)的樣品中鹽酸林可霉素的平均含量分別為標(biāo)示量的（98.67±1.21）%、（99.90±0.44）% 和（99.28±1.17）%（n＝3），實(shí)際含量均在標(biāo)示量的95%～105%范圍內(nèi)，符合含量測(cè)定要求。

3 討 論

鹽酸林可霉素在高于60℃條件下不穩(wěn)定，因此本研究對(duì)鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠的提取采用超聲提取后冷藏處理的方法。該方法既可以使鹽酸林可霉素提取完全，又可避免溫度過(guò)高對(duì)含量測(cè)定的影響，減少對(duì)色譜柱的污染。制備鹽酸林可霉素眼用溫敏凝膠要求pH值范圍是5～9，HPLC法測(cè)定時(shí)流動(dòng)相體系中各成分的比例會(huì)影響其pH值，從而改變色譜圖峰形。因此，本研究在篩選流動(dòng)相時(shí)參考文獻(xiàn)［4，5，7］做了一定的調(diào)整，最終確定以0.05mol／L的硼砂溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 至7.4）－甲醇（50∶50）作為流動(dòng)相。在該流動(dòng)相下，鹽酸林可霉素出峰時(shí)間約為16.5min，與其他組分分離良好，峰形對(duì)稱(chēng)。

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