胡小平，王勇強，葉蓉，于波，鐘綺麗，王燕

（北京大學深圳醫(yī)院，深圳518036）

文獻報道尖銳濕疣（condyloma acuminatum,CA）患者人乳頭瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染型別有地區(qū)性差異[1]，并且HPV感染的型別與其生物學行為和臨床復發(fā)相關。為了解深圳地區(qū)HPV感染基因型別分布情況，本研究回顧性分析了我院2年來尖銳濕疣病例HPV基因型檢測的情況，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 所有患者均來自我院皮膚科門診2010年3月—2012年3月確診的HPV陽性的CA患者，共1 619例，其中男741例，年齡16～72歲，平均（31.2±8.2）歲；女878例，年齡 16～74 歲，平均（30.5±7.8）歲。調查表記錄患者一般資料、皮損分布、病程和既往治療等情況。所有患者均根據(jù)病史，臨床表現(xiàn)和皮損脫落細胞HPV檢測確診。

1.2 采樣方法 棉拭子除去皮損表面過多分泌物，以專用脫落細胞采集器對皮損進行采集脫落上皮細胞樣本，做好樣本標記。保存在2～8℃冰箱，7 d內檢測。

1.3 檢測方法 使用人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒中聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction,PCR）體外擴增和脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）反向點雜交相結合的DNA芯片技術（亞能生物技術有限公司生產）。其檢測原理為：利用HPV的基因特點設計特異引物，可以擴增出包含23種HPV基因型的目標片段，再將擴增產物與固定在模條上的包括18種高危型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4） 和 5 種低危型（HPV6、11、42、43、44）在內的分型探針進行雜交，依據(jù)雜交信號的有無來判斷是否有這些HPV基因型的存在。所有操作過程嚴格按照說明書進行。

1.4 結果判定 陽性質控（positive control,PC）為顯色質控點。除PC位點外，根據(jù)模條上各檢測位點有無信號，判斷是否感染了相應的HPV基因型（包括單一感染和混合感染），見圖1。

1.5 統(tǒng)計學處理 對所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行分析。計數(shù)資料的比較采用卡方檢驗，檢驗標準為P<0.05。

2 結果

2.1 1 619例尖銳濕疣患者HPV基因型檢測結果和分布 23種HPV基因型均能檢出，其中單一HPV感染1 035例，占63.9%；多重感染584例，占比36.1%。低危型陽性率為68.6%（1 112/1 619），高危型陽性率為57.3%（929/1 619）。各型HPV感染中，前7位的型別比例分別為：6型：35.8%；11型：25.1%；43型：14.8%；16型：14.5%；52型：10.1%；58型：8.3%；18型：5.7%。見圖1和表1。

2.2 HPV感染性別分組比較 男性患者感染HPV高危型陽性率為26.0%（422/1 619）；女性患者感染HPV高危型陽性率為31.3%（507/1 619）。男、女性HPV高危型基因型以16、52、58型為主。男女性高危型HPV感染陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.77，P<0.01）。

2.3 多重感染病例分布情況 多重感染表現(xiàn)為2～9種HPV混合感染，二重感染為主。組合方式多樣，呈現(xiàn)以低-高危型、低-低危型和高-高危型三種不同形式存在，主要以低-高危型感染為主。按型別排序前幾位分別是 6/11、11/43、43/16，43/58等。高危型以混合感染為主，占多重感染89.7%（524/584）。男、女性多重感染分組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=27.19，P<0.001）。見表 2。

表1 1619例尖銳濕疣患者HPV基因型檢測結果例

表2 HPV多重感染病例分布情況例

3 討論

尖銳濕疣發(fā)病率高，對患者的身心健康影響巨大。其組織中的HPV型別多達上百種，根據(jù)生物學行為不同，分為低危型和高危型[2]。高危型和宮頸癌相關[3]。本研究中所用試劑盒能夠檢測出23種高低危型HPV基因型，涵蓋了主要流行型別。結果顯示，所有23種型別均在患者中分布，其中包括1例少見型HPV感染：人乳頭瘤病毒MM4型（human papilloma MM4，HPVMM4）。高危型陽性率為57.3%，高于國內文獻報道，和國外文獻報道相近，表明深圳地區(qū)高危型檢出比例明顯上升[4-5]，提示對高危型感染患者應長期隨訪，預防宮頸癌的發(fā)生。低危型陽性率為68.6%，常見為HPV6和11型。常見高危型型別是 HPV16、52、58、18等，這和 2007年文獻報道深圳女性CA患者HPV基因型分布相似[6]，但HPV52和58型比例明顯高于 18型，又與文獻報道有差異，原因可能為所觀察的病例數(shù)不同，本研究大樣本的數(shù)據(jù)可能更說明本地區(qū)HPV基因型的流行情況，和其他地區(qū)流行數(shù)據(jù)不同體現(xiàn)了HPV基因型地區(qū)分布的差異[7]，本地區(qū)HPV基因型的表現(xiàn)更復雜，可能與深圳人口密度高，流動性大有關。本研究中，HPV多重感染表現(xiàn)為2～9種HPV基因型組合，占36%，以二重感染表現(xiàn)為主。其中1名16歲女性患者表現(xiàn)特殊，感染了HPV16，18，31，33，35，52，68，11，42 等 9 種型別，無細胞和體液免疫缺陷，亦未發(fā)現(xiàn)伴隨其他基礎疾病。目前未見類似文獻報道，其多重感染的原因值得深入研究。

對HPV感染性別分組比較顯示，男性以HPV6、11、43型等低危型感染為主，女性以HPV16、52、58型等高危型感染為主，這與國內肖克林等[8]報道一致，女性更容易感染高危型HPV，而且女性多重感染比例明顯高于男性。HPV多重感染中，高危型HPV以混合感染為主（89.7%）。有研究發(fā)現(xiàn)混合感染在一定程度上對宮頸病變及宮頸癌的發(fā)展起促進作用[9]，這值得引起我們的重視。而女性對高危型HPV的易感性，提示男女性別感染的差異性。目前HPV疫苗主要針對HPV16和18型感染，而本研究中HPV52和58型感染所占比例明顯上升，提示在今后HPV疫苗開發(fā)中還應該注意對HPV52和58型感染的防治。

對HPV感染年齡分組比較顯示，女性小于30歲組更易感染高危型HPV。這種HPV感染年齡組的差異，是否與女性不同年齡段的性活躍程度所產生的影響有關，需要更進一步的研究才能證實。由于高危型HPV感染和宮頸癌發(fā)病密切相關，且其潛伏感染10余年左右可能致癌[2，10]，那么本研究結果提示女性高發(fā)宮頸癌的年齡段可能為30～45歲之間，提示此年齡段宮頸癌篩查的重要性。

本研究通過對尖銳濕疣組織HPV型別的檢測，反映出目前深圳地區(qū)尖銳濕疣患者HPV感染的分子流行病學特點，對于判斷尖銳濕疣患者的預后、指導醫(yī)生對高危型和多重感染患者的監(jiān)測、減低宮頸癌的發(fā)生和特異性疫苗的研制具有重要的臨床意義。

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