郝小燕，裘璐，吳文利，張一，肖海濤

（貴陽醫(yī)學院藥學院，貴州 貴陽 550004）

蜜源生物液是以紫云蜜為主要原料，配以中藥復方，以獨特的發(fā)酵工藝，將中藥復方的功效成分完全融入蜂蜜中而制備的一種功能性飲品，具有補氣血，健脾胃，強身健體的功效。通過研究，我們發(fā)現(xiàn)蜜源生物液具有一定的抗氧化性（另文發(fā)表），還具有良好的流變性、滲透性、乳化性以及與多種物質良好的兼容性。在酒中加入該生物液，可提高總酯而降低雜醇含量，使其口感純正。這些特性與紫云蜜有顯著的不同。功能食品在國內外食品市場的增長幅度很大,功能食品的開發(fā)與生產成了食品行業(yè)的重要發(fā)展方向[1]，對其有效化學成分進行分析則是深入開發(fā)的基礎。目前，對蜜源生物液化學成分的研究未見報道。本研究采用GC-MS技術并通過HPMSD化工作站檢索NIST98標準質譜圖庫和WILEY質譜圖庫，分析、鑒定了蜜源生物液乙酸乙酯部位的化學成分，并與紫云蜜進行比較。以期為蜜源生物液的多領域開發(fā)和應用提供一定的科學依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

HP 5973 GC-MS聯(lián)用儀：美國惠普公司。

1.2 試劑

CO2（純度99%）：由貴陽氧氣廠提供；乙酸乙酯等均為國產分析純。

1.3 材料

蜜源生物液：由貴州森川生物制藥有限公司提供；紫云蜜：貴陽市售。

2 方法與結果

2.1 乙酸乙酯萃取物的制備

取蜜源生物液適量，乙酸乙酯反復多次萃取得乙酸乙酯的萃取液，備用。

取紫云蜜適量，乙酸乙酯反復多次萃取得乙酸乙酯的萃取液，備用。

2.2 氣相色譜條件

HP-5MS5%PhenylMethylSiloxane（30m×0.25mm×0.25μm）彈性石英毛細管色譜柱，柱溫45℃（保留2min），以5℃/min升溫至300℃，保持2 min；汽化室溫度250 ℃；載氣為高純 He（99.999%）；柱前壓 7.62 Pa，載氣流量 1.0 mL/min；進樣量 1 μL；分流比 20∶1。

2.3 質譜條件

質譜的電離方式為EI；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1015 V；接口溫度280℃；質量范圍30 AMU～550 AMU，溶劑延遲3 min。

2.4 定性分析

取超臨界萃取物1.0 μL，用氣相色譜-質譜-計算機聯(lián)用儀進行分析鑒定。最后通過HPMSD化學工作站檢索NIST 98標準質譜圖庫和WILEY質譜圖庫，并結合有關文獻[2]進行人工譜圖解析，以確認蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位的化學成分。

2.5 GC-MS分析結果

用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測得其中各組分的相對百分含量，對總離子流圖（見圖1和圖2）中的各峰經(jīng)質譜掃描后得到質譜圖，經(jīng)過NIST98質譜計算機數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，結合人工譜圖解析，按各色譜峰的質譜裂片圖與文獻核對，對基峰、質荷比和相對豐度等方面進行直觀比較，結果從蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位中分別分離并鑒定出32和51個化學成分（見表1）。

圖1 蜜源生物液乙酸乙酯部位的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of ethyl acetate extract from Miyuan Bio-liquid

圖2 紫云蜜乙酸乙酯部位的總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of ethyl acetate extract from Ziyun Honey

表1 化學成分分析結果Table 1 Analytic result of chemical constituents

3 討論

1）在本研究之前，選用了石油醚、氯仿、乙酸乙酯分別對樣品進行了萃取，其中每種溶劑的用量、萃取次數(shù)及樣品量一致。通過比較發(fā)現(xiàn)，采用乙酸乙酯時相應的萃取率最高。因此，本研究選用乙酸乙酯對樣品進行前處理。

2）采用氣相色譜-質譜（GC－MS）聯(lián)用技術從蜜源生物液乙酸乙酯部位分離出的32種化合物，占總含量的93.61%，包括雜環(huán)類化合物2種，有機酸類3種，酯類8種，醇類3種，酰胺類3種，芳香族化合物4種，烴類7種，酚類和醛類各1種；從紫云蜜乙酸乙酯部位分離出的53種化合物，占總含量的93.18%，包括雜環(huán)類化合物2種，有機酸類2種，酯類9種，醇類7種，酰胺類4種，芳香族化合物4種，烴類14種，酚類3種，醛類3種，酮類4種，醚類1種。由此可見GC-MS確有分離效果好、檢測成分多等優(yōu)點，適合用于這兩種物質的化學成分分析。

3）通過實驗數(shù)據(jù)比較，蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位在成分組成及其含量上均表現(xiàn)出了較大的差異：前者含量最高的是雜環(huán)類化合物（47.16%），其次分別是有機酸類（19.33%）和酯類（17.19%）；后者含量最高的是有機酸類（33.93%），其次是雜環(huán)類化合物（18.17%）?？v觀表 1還可以看出 5－羥甲基－2－呋喃甲醛是蜜源生物液乙酸乙酯部位中含量最高的，達41.92%，而該物質在紫云蜜乙酸乙酯部位中僅有17.76%。至于這些差異對蜜源生物液的特殊功效是否有關，還有待于進一步的研究。

4）從表1可以看出蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位均有酚類物質的存在。相關研究已經(jīng)表明酚類物質是很強的體外抗氧化劑，可以有效清除機體內可以導致心血管疾病的自由基，減輕和消除機體內氧化應激[3-4]。這提示蜜源生物液所具備的抗氧化活性與該類物質有關，但具體的量效關系還有待研究和探索。至于本次檢測出的其他成分對抗氧化活性是否有貢獻還需考證。

5）通過對比發(fā)現(xiàn)：（1）酯類、醇類、醛類在蜜源生物液乙酸乙酯部位中的總相對含量為20.26%，而這3類化合物在紫云蜜乙酸乙酯部位的含量僅為13.66%。（2）雜環(huán)和芳香類化合物在蜜源生物液乙酸乙酯部位中的總相對含量為49.49%，而該類化合物在紫云蜜乙酸乙酯部位的含量僅為24.23%。酯類化合物、雜環(huán)和芳香類化合物均是酒中重要的呈香物質[5-7]，由此可以看出蜜源生物液比紫云蜜更適合作為添加劑應用于釀酒業(yè)中。

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