郝小燕，裘璐，吳文利，張一，肖海濤

（貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽 550004）

蜜源生物液是以紫云蜜為主要原料，配以中藥復(fù)方，以獨(dú)特的發(fā)酵工藝，將中藥復(fù)方的功效成分完全融入蜂蜜中而制備的一種功能性飲品，具有補(bǔ)氣血，健脾胃，強(qiáng)身健體的功效。通過研究，我們發(fā)現(xiàn)蜜源生物液具有一定的抗氧化性（另文發(fā)表），還具有良好的流變性、滲透性、乳化性以及與多種物質(zhì)良好的兼容性。在酒中加入該生物液，可提高總酯而降低雜醇含量，使其口感純正。這些特性與紫云蜜有顯著的不同。功能食品在國內(nèi)外食品市場(chǎng)的增長幅度很大,功能食品的開發(fā)與生產(chǎn)成了食品行業(yè)的重要發(fā)展方向[1]，對(duì)其有效化學(xué)成分進(jìn)行分析則是深入開發(fā)的基礎(chǔ)。目前，對(duì)蜜源生物液化學(xué)成分的研究未見報(bào)道。本研究采用GC-MS技術(shù)并通過HPMSD化工作站檢索NIST98標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫和WILEY質(zhì)譜圖庫，分析、鑒定了蜜源生物液乙酸乙酯部位的化學(xué)成分，并與紫云蜜進(jìn)行比較。以期為蜜源生物液的多領(lǐng)域開發(fā)和應(yīng)用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

HP 5973 GC-MS聯(lián)用儀：美國惠普公司。

1.2 試劑

CO2（純度99%）：由貴陽氧氣廠提供；乙酸乙酯等均為國產(chǎn)分析純。

1.3 材料

蜜源生物液：由貴州森川生物制藥有限公司提供；紫云蜜：貴陽市售。

2 方法與結(jié)果

2.1 乙酸乙酯萃取物的制備

取蜜源生物液適量，乙酸乙酯反復(fù)多次萃取得乙酸乙酯的萃取液，備用。

取紫云蜜適量，乙酸乙酯反復(fù)多次萃取得乙酸乙酯的萃取液，備用。

2.2 氣相色譜條件

HP-5MS5%PhenylMethylSiloxane（30m×0.25mm×0.25μm）彈性石英毛細(xì)管色譜柱，柱溫45℃（保留2min），以5℃/min升溫至300℃，保持2 min；汽化室溫度250 ℃；載氣為高純 He（99.999%）；柱前壓 7.62 Pa，載氣流量 1.0 mL/min；進(jìn)樣量 1 μL；分流比 20∶1。

2.3 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜的電離方式為EI；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1015 V；接口溫度280℃；質(zhì)量范圍30 AMU～550 AMU，溶劑延遲3 min。

2.4 定性分析

取超臨界萃取物1.0 μL，用氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定。最后通過HPMSD化學(xué)工作站檢索NIST 98標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫和WILEY質(zhì)譜圖庫，并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)[2]進(jìn)行人工譜圖解析，以確認(rèn)蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位的化學(xué)成分。

2.5 GC-MS分析結(jié)果

用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測(cè)得其中各組分的相對(duì)百分含量，對(duì)總離子流圖（見圖1和圖2）中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過NIST98質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，結(jié)合人工譜圖解析，按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖與文獻(xiàn)核對(duì)，對(duì)基峰、質(zhì)荷比和相對(duì)豐度等方面進(jìn)行直觀比較，結(jié)果從蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位中分別分離并鑒定出32和51個(gè)化學(xué)成分（見表1）。

圖1 蜜源生物液乙酸乙酯部位的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of ethyl acetate extract from Miyuan Bio-liquid

圖2 紫云蜜乙酸乙酯部位的總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of ethyl acetate extract from Ziyun Honey

表1 化學(xué)成分分析結(jié)果Table 1 Analytic result of chemical constituents

3 討論

1）在本研究之前，選用了石油醚、氯仿、乙酸乙酯分別對(duì)樣品進(jìn)行了萃取，其中每種溶劑的用量、萃取次數(shù)及樣品量一致。通過比較發(fā)現(xiàn)，采用乙酸乙酯時(shí)相應(yīng)的萃取率最高。因此，本研究選用乙酸乙酯對(duì)樣品進(jìn)行前處理。

2）采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC－MS）聯(lián)用技術(shù)從蜜源生物液乙酸乙酯部位分離出的32種化合物，占總含量的93.61%，包括雜環(huán)類化合物2種，有機(jī)酸類3種，酯類8種，醇類3種，酰胺類3種，芳香族化合物4種，烴類7種，酚類和醛類各1種；從紫云蜜乙酸乙酯部位分離出的53種化合物，占總含量的93.18%，包括雜環(huán)類化合物2種，有機(jī)酸類2種，酯類9種，醇類7種，酰胺類4種，芳香族化合物4種，烴類14種，酚類3種，醛類3種，酮類4種，醚類1種。由此可見GC-MS確有分離效果好、檢測(cè)成分多等優(yōu)點(diǎn)，適合用于這兩種物質(zhì)的化學(xué)成分分析。

3）通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較，蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位在成分組成及其含量上均表現(xiàn)出了較大的差異：前者含量最高的是雜環(huán)類化合物（47.16%），其次分別是有機(jī)酸類（19.33%）和酯類（17.19%）；后者含量最高的是有機(jī)酸類（33.93%），其次是雜環(huán)類化合物（18.17%）?？v觀表 1還可以看出 5－羥甲基－2－呋喃甲醛是蜜源生物液乙酸乙酯部位中含量最高的，達(dá)41.92%，而該物質(zhì)在紫云蜜乙酸乙酯部位中僅有17.76%。至于這些差異對(duì)蜜源生物液的特殊功效是否有關(guān)，還有待于進(jìn)一步的研究。

4）從表1可以看出蜜源生物液和紫云蜜乙酸乙酯部位均有酚類物質(zhì)的存在。相關(guān)研究已經(jīng)表明酚類物質(zhì)是很強(qiáng)的體外抗氧化劑，可以有效清除機(jī)體內(nèi)可以導(dǎo)致心血管疾病的自由基，減輕和消除機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激[3-4]。這提示蜜源生物液所具備的抗氧化活性與該類物質(zhì)有關(guān)，但具體的量效關(guān)系還有待研究和探索。至于本次檢測(cè)出的其他成分對(duì)抗氧化活性是否有貢獻(xiàn)還需考證。

5）通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)：（1）酯類、醇類、醛類在蜜源生物液乙酸乙酯部位中的總相對(duì)含量為20.26%，而這3類化合物在紫云蜜乙酸乙酯部位的含量?jī)H為13.66%。（2）雜環(huán)和芳香類化合物在蜜源生物液乙酸乙酯部位中的總相對(duì)含量為49.49%，而該類化合物在紫云蜜乙酸乙酯部位的含量?jī)H為24.23%。酯類化合物、雜環(huán)和芳香類化合物均是酒中重要的呈香物質(zhì)[5-7]，由此可以看出蜜源生物液比紫云蜜更適合作為添加劑應(yīng)用于釀酒業(yè)中。

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